中国对虾肝胰脏细小病毒病的直接荧光抗体法诊断研究

中国对虾肝胰脏细小病毒（ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅ,ＨＰＶＤ）是一种广泛流行于中国对虾中的危害性较大的疾病。由于该病没有特异的肉眼症状,因此早期、快速诊断方法的研究就十分重要。作者曾完成了ＳＰＡ协同凝集试验法和免疫金银染色法的诊断研究。本文用直接荧光抗体法进行研究,观察其诊断效果。结果是,将抗ＨＰＶ的荧光抗体滴加到对虾肝胰脏组织涂片以后,在某些样品的肝胰脏上皮细胞中出现了圆形、椭圆形,大小６～１３μｍ的黄绿色荧光物。经比较,该荧光物的大小和形状与同一样品病理组织切片上经Ｈ－Ｅ染色后上皮细胞中出现的ＨＰＶ包涵体是一致的。由此认为,这些存在于肝胰脏上皮细胞内的荧光物是ＨＰＶ包涵体,而直接荧光抗体法用于诊断中国对虾ＨＰＶ是有效可行的。     

T-E染色法用于对虾暴发性流行病的现场快速诊断

用Ｔ－Ｅ染色法可对该病进行现场快速诊断。取发病对虾的胃上皮区组织 或鳃组织，用Ｔ－Ｅ染液进行压片染色，可观察到上皮细胞核和结缔组织细胞核的病 毒性病理变化：细胞核质被挤到核的边沿，核内空泡化。发病严重的对虾胞核显著 膨大，核内呈嗜伊红着色。用这一染色法在现场仅需１０ｍｉｎ就可掌握对虾的细胞病 理变化，诊断结果与组织切片的Ｈ－Ｅ染色法一致。     

白斑综合症杆状病毒致病性特征

对白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）致病性特征的研究结果表明：ＷＳＢＶ的致病性与斑节对虾Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ个体大小无关,ＷＳＢＶ的致病力与感染方式和病毒数量有关;在盐度为１４、温度为２８－３２℃的海水中,游离ＷＳＢＶ在４ｈ内失去感染活性;体长７ｃｍ的白斑综合症死亡斑节对虾,其携带的ＷＳＢＶ在５７ｈ失去感染活性;体长７ｃｍ死亡斑节对虾经２８℃空气干燥,其携带的ＷＳＢＶ在５０ｈ失去感染活性;ＷＳＢＶ不能通过体表感染健康斑节对虾,而斑节对虾摄食一定数量病毒才能导致感染;水不能作为游离ＷＳＢＶ的载体传播ＷＳＢＶ。     

中国对虾卵细胞中病毒的初步研究

对中国对虾卵巢和受精卵细胞进行了电子显向镜超微结构观察，发现卵巢内有球状病毒粒子，大小为８０ｎｍ左右，受精卵细胞内有传染性皮下和造血组织坏死病毒（ＩＨＨＮＶ）感染，其严重影响对虾受精卵的发育，从获得的结果来看，中国对虾病毒（ＩＨＨＮＶ）垂直传播的可能性极大。     

斑节对虾一种新球形病毒的研究

应用电镜超薄切片技术，发现斑节对虾肝胰腺上皮、肠上皮和淋巴样细胞质中一种新的球形形病毒，称之为斑节对虾球形病毒。病毒粒子为球形，直径２８－３５ｎｍ，核衣壳直径２１－２８ｎｍ，囊膜光滑无纤突，包涵体多数为球形，体积差异颇大，外有单位膜包被。ＭＳＶ与ＭＢＶ混合感染，造成严重理变化。     

白斑综合症杆状病毒致病性特征

对白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）致病性特征的研究结果表明,ＷＳＢＶ的致病性与斑节对虾个体大小无关,ＷＳＢＶ的致病力与感染方式和病毒数量有关,在盐度为１４,温度为２８￣３２℃的海水中,游离ＷＳＢＶ在４ｈ内失去感染活性;体长７ｃｍ的白斑综合症死亡斑节对虾,其携带的ＷＳＢＶ在５７ｈ失去感染活性;体长７ｃｍ死亡斑节对虾经２８℃空气干燥,其携带的ＷＳＢＶ在５０ｈ失去感染活性;ＷＳＢＶ不能通过体表感染健康斑节     

天津地区对虾暴发性流行病的病因、病理及传播途径的初步研究

本文对１９９３年天津地区对虾暴发性流行病的病因、病理及传播途径进行了初步研究。１材料和方法试验材料取自塘沽区、汉沽区、宁河县和大港区发病和未发病虾池的可疑濒死活虾（体长４～７ｃｍ），固定前快速将肝胰腺连同中肠取出，或将头胸甲剪开，将虾体切成背部相连的数段，浸入Ｄａｖｉｄｓｏｎ固定液中固定［２］，组织病理观察用石蜡切片，厚８μｍ，Ｈ－Ｅ染色。电镜材料是将肝胰腺切成小块浸入２．５％戊二醛液固定，放入冰桶中带回试验室，常规超切，透射电镜观察，细菌调查用无菌瓶采水，用异养菌培养基（ＰＧＹ）和ＴＣＢＳ选择…     

中国对虾气泡病的初步研究

气泡病一般发生在幼鱼和仔虾消化道及鳃丝中，导致鱼虾部分死亡。自Ｍａｒｓｈ和Ｇｏｒｉｈａｍ于１９０５年报道了鱼的气泡病后已有许多报道，但对于虾的气泡病报道较少。Ｌｉｇｈｔｎｅｒ，Ｄ．Ｖ．等报道过褐对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ　ａｚｔｅｃｕｓ）蚤ＩＩ期幼体及稚虾的气泡病［６～９］。１９７９年著者进行中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）摄饵量实验［４］过程中曾遇到仔虾消化道气泡病，致使仔虾漂浮在水面，死亡率较高（＞３０％）导致实验不能进行。为此笔者对中国对虾气泡病的成因及防治方法进行了初步研究并于１…     

中国对虾精子超温保存的研究

于１９９１年１１月－１９９３年５月对中国对虾纳精囊中精子进行超低温保存研究。结果表明，以自然海水或人工海水作基础液添加１０％ＤＭＳＯ（Ｖ／Ｖ）及５％－１０％的甘油配制成抗冻稀释液，稀释中国对虾精子进行超低温保存最有效，存尖率在６０％以上；保存９４－１３８ｄ，解冻后作人工授精，受精率最高达５９％；稀释液中Ｍｇ＾２＋，Ｋ＾＋，Ｃａ＾２＋为超低温保存所必需，但Ｃａ＾２＋浓度过高则不利于精子的保存。光镜及     

利用WSBV的引物扩增中国对虾的杆状病毒DNA

利用台湾报道的ＷＳＢＶ的ＰＣＲ引物,成功地扩增出了１４００ｂｐ左右的中国对虾的杆状病毒的ＤＮＡ片段,与预计的产物长度吻合。该引物对经初步离心处理的病虾组织也能扩增出特异性ＤＮＡ条带,而对正常虾组织ＤＮＡ、昆虫杆状病毒（ＡｃＭＮＰＶ）ＤＮＡ进行扩增,均获得阴性结果。说明该引物的特异性较高,对中国对虾的杆状病毒的检测具有一定的实际应用价值。实验结果同时说明ＷＳＢＶ与中国对虾的杆状病毒有同源序列存在,具有一定的保守性;用该引物进行的ＰＣＲ扩增为中国对虾的杆状病毒与其他相关病毒的比较研究提供了一种技术手段。