疏肝健脾解毒方中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定

目的：建立高效液相色谱（HPLC）法测定疏肝健脾解毒方中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。方法：采用HPLC法,以依利特Supersil ODS-C₁₈柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）为色谱柱,以乙腈-0.2%甲酸溶液为流动相梯度洗脱（0～23 min,12%乙腈;23～65 min,12%～26%乙腈）,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为260 nm。结果：经方法学验证,毛蕊异黄酮葡萄糖苷在7.2～43.2 μg（R₂=0.9998）范围内线性关系良好,精密度、稳定性和重复性试验的RSD 均＜2.0%（n=6）,加样回收率为98.87%（RSD为1.79%）。结论：本研究建立的含量测定方法简便,结果准确可靠,适用于疏肝健脾解毒方中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的测定,可为其质量标准的深入研究提供依据。     

益肺饮含药血清对肺癌A549细胞增殖凋亡的影响

目的：研究中药复方益肺饮不同浓度含药血清对肺癌A549细胞增殖凋亡的影响。方法：将SD小鼠分为2组,分别灌胃益肺饮和0.9%氯化钠注射液,获得5%、10%、15%、20%的益肺饮含药血清和10%无药血清。A549细胞进行培养后分为实验组、对照组和空白对照组,实验组加入不同浓度的含药血清,对照组加入10%无药血清,空白对照组加入10%胎牛血清。采用CCK-8法观察各组血清对A549细胞的增殖影响;采用流式细胞仪检测不同浓度含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果：与空白对照组相比,各浓度益肺饮含药血清对A549细胞均有明显的增殖抑制作用（P<0.05）,其抑制率随药物浓度递增而增强,5%含药血清组与20%含药血清组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术检测结果表明,不同浓度下含药血清组凋亡率明显优于对照组及空白对照组（P<0.05）;不同浓度含药血清组组内比较,5%、10%、15%各浓度之间两两比较差异有统计学意义（P<0.05）,但15%与20%浓度组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：益肺饮含药血清对肺癌A549细胞具有明显的增殖抑制、诱导凋亡的作用,并具有一定的浓度依赖性。     

健脾消癌方对结肠癌HCT116/5-Fu耐药细胞增殖、凋亡、周期的影响研究

目的：研究健脾消癌方对HCT116/5-Fu耐药细胞增殖、凋亡、周期的影响。方法：采用5-Fu浓度递增间断刺激法诱导建立HCT116/5-Fu细胞,制备健脾消癌方含药血清,设立10%、15%、20%含药血清组,设立相同浓度无药血清对照组及10%胎牛血清组。采用CellTiter GLO法检测细胞增殖能力并计算细胞抑制率,采用PI-FACS法检测细胞周期变化,采用Annexin V-APC单染法检测细胞凋亡水平。结果：与对照组相比,不同浓度含药血清组对HCT116/5-Fu细胞增殖均有抑制作用,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）,且随含药血清浓度的升高而抑制作用增强;与对照组相比,不同浓度含药血清组HCT116/5-Fu细胞凋亡率均明显提高,差异有统计学意义（P＜0.01）,且随含药血清浓度升高细胞凋亡率提高幅度增大;与对照组相比,不同浓度含药血清组均可将细胞周期阻滞在G0/G1期,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：健脾消癌方可抑制HCT116/5-Fu细胞的增殖,促进HCT116/5-Fu细胞的凋亡,阻滞其细胞周期进程,且其作用随浓度的升高而明显增强,具有改善结直肠癌耐药的作用。     

健脾消癌方对人结肠癌HCT116细胞AKT、mTOR表达的影响

目的：探讨健脾消癌方（JPXA）含药血清对人结肠癌HCT116细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达以及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法：取不同浓度的JPXA含药血清作用于HCT116细胞,筛选JPXA含药血清处理HCT116细胞的半抑制浓度（IC50）,并将HCT116细胞分为实验组和对照组,予以相应处理后,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,PI-FACS法检测细胞周期变化,Annexin V-APC 单染法流式细胞仪检测凋亡水平,并采用Rt-PCR检测AKT mRNA、mTOR mRNA水平,采用Western Blot检测AKT、p-AKT、mTOR及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）水平。结果：与对照组相比,实验组HCT116细胞增殖能力显著下降,能使细胞周期停留在G1期及S期,且细胞凋亡水平上升,差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,实验组AKT mRNA、mTOR mRNA表达水平及AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白含量明显下降（P<0.05或P<0.01）。结论：JPXA能抑制AKT、mTOR表达,对结肠癌细胞的增殖、克隆能力有一定抑制作用,并可在一定程度上促进结肠癌细胞的凋亡。     

谷氨酰胺二肽对日本对虾血清生化指标、肝胰腺细胞凋亡及肠粘膜形态的影响

采用饲养对比试验方法,研究了谷氨酰胺二肽（Gin二肽）对日本对虾血清生化指标、肝胰腺细胞凋亡和肠绒毛的影响及对虾体健康的作用。结果表明,饲喂Gin二肽各组的PO、LSZ、ACP含量均显著（P〈0．05）高于对照组,添加0.5％和1．0％Gin二肽组的SOD和ALP含量也显著（P〈0．05）高于对照组：添加1．0％Gin二肽的TP含量显著（P〈0．05）高于其它各组。血清TP、PA、UN、CHO、PO、LSZ、SOD、ALP、ACP和LDH等各项指标均随Gin二肽添加量的提高而呈现增加趋势。试验建立了流式细胞术检测对虾肝胰腺细胞凋亡率的方法;肝胰腺细胞凋亡率随着日粮Gin二肽添加量的增加而显著降低（P〈0．05）。肠道切片显微观测结果表明,添加1．0％的Gin二肽能显著增加日本对虾肠绒毛高度（P〈0．05）。饲料中添加Gin二肽可显著提高日本对虾血清中的溶菌酶、抗氧化酶及磷酸酶活性,降低肝胰腺细胞凋亡率,增加肠绒毛高度,改善虾体健康状况。     

健脾消癌方对人结肠癌细胞中Wnt信号分子β-catenin、Axin及靶基因MMP-7、CD44的影响

目的：观察健脾消癌方对Wnt信号分子β-连环蛋白（β-catenin）、Axin及靶基因基质金属蛋白酶-7（MMP-7）、CD44的影响,探讨其抗结直肠癌复发转移的作用机制。方法：将对数生长期的HCT116细胞分为空白组,0.9%氯化钠注射液组,5-Fu组及健脾消癌方低、中、高剂量组,分别干预48h后,收集细胞,PCR检测β-catenin、Axin及MMP-7、CD44表达。结果：健脾消癌方含药血清可以降低人结肠癌HCT116细胞中β-catenin mRNA表达水平,上调Axin mRNA表达水平,明显抑制MMP-7 mRNA及CD44 mRNA的表达。结论：健脾消癌方抗结直肠癌转移侵袭的药理作用可能与其下调Wnt/β-catenin信号通路的信号分子β-catenin及上调Axin的表达水平并有效降低靶基因MMP-7、CD44的表达水平有关,这可能是健脾消癌方抗结直肠癌复发转移的重要分子机制之一。     

四逆软肝方对高浓度乙醛培养的人肝星状细胞肝纤四项及MMP-1、TIMP-1的影响

目的：探讨四逆软肝方对高浓度乙醛培养的人肝星状细胞肝纤四项（CG、HA、LN、PCIII）及基质金属蛋白酶1（MMP-1）、组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）的影响。方法：采用高浓度乙醛对人肝星状细胞LX-2株造成损伤后,随机分为四逆软肝方、清热解毒化浊片、扶正化瘀片和脱离乙醛4组;经给药24h后搜集各组细胞培养液上清,采用ELISA试剂盒检测肝纤四项及MMP-1、TIMP-1含量。结果：250mmol/L乙醛培养72h,细胞存活率最高;与正常组比,乙醛组CG、HA、LN、MMP-1、TIMP-1差异无统计学意义（P>0.05）,PCIII升高（P<0.01）。与正常组比较,脱离乙醛组CG下降（P<0.01）、PCIII升高（P<0.01）;与脱离乙醛组比较,四逆软肝方组HA、PCIII、TIMP-1均降低（P<0.01）,CG、LN、MMP-1差异无统计学意义（P>0.05）。四逆软肝方组、清热解毒化浊片组、扶正化瘀片组组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：四逆软肝方可降低受损的LX-2细胞HA、PCIII、TIMP-1指标的表达,可能对抗肝纤维化有一定的作用。