大菱鲆Hepcidin基因的克隆和真核表达载体的构建

Hepcidin是鱼类的一种重要的抗菌肽.通过比较GenBank中不同Hepcidin基因的同源相似性,设计出特异性的引物,以我国海水养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus L)肝脏为模板利用RT-PCR 技术克隆获得了一条基因.使用生物信息学手段对该基因序列进行了比对和分析,证实这条基因为Hepcidin1 precursor基因,属于Hepcidin基因家族.通过设计引物在Hepcidin基因的5′和3′端分别引入EcoR I和NotⅠ酶切位点.经过双酶切后获得具有EcoR I和Not I酶切位点的Hepcidin成熟肽片段,并与同样使用该酶线性化的表达载体pPIC3.5K连接.构建了表达载体pPIC3.5K/Hepc1,并将其导入到酵母基因组中,完成了真核表达载体的构建,为Hepcidin的真核表达作了基础性的准备工作.     

甲壳动物抗菌肽研究进展

滥用抗生素增强了微生物耐药性,而新药开发却相对滞后,迄今,几乎所有的抗生素仅是早期15种左右抗生素的衍生物。近年来在生物体内发现一类具有广谱抗微生物活性的物质——抗菌肽,因其作用靶位与传统抗生素作用模式不同而倍受关注。抗菌肽研究现已成为医药学、免疫学和分子生物学等研究的新热点。     

脊尾白虾抗菌肽Crustin基因的克隆、表达与功能研究

为研究脊尾白虾(Exopalaemoncarinicauda)抗菌肽Crustin的结构特征和功能,本研究从脊尾白虾中克隆得到一个Crustin的新变体,命名为EcCrustin1。研究结果表明,EcCrustin1基因cDNA序列长度为740 bp,开放阅读框(ORF)长度为477 bp,编码158个氨基酸,EcCrustin1蛋白具有Ⅱ型Crustin的典型特征,包括N端的信号肽,C端WAP结构域,以及二者之间的甘氨酸富集区(GRR)和半胱氨酸富集区(CRR)。EcCrustin1基因主要在脊尾白虾血淋巴中表达,副溶血弧菌刺激后,EcCrustin1在血淋巴中的表达显著上调(P<0.05),说明EcCrustin1在脊尾白虾先天免疫应答中发挥重要作用。此外,通过原核表达获得了该抗菌肽的重组蛋白,为进一步研究其抑菌功能和机理提供了基础。     

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)Pthyastatin抗菌肽基因的克隆与表达分析

采用构建三疣梭子蟹血细胞全长cDNA文库的方法克隆了一个新型抗菌肽基因Pthyastatin,并用荧光定量RT-PCR方法,进行Pthyastatin的表达研究。结果表明,Pthyastatin前体由16个氨基酸残基的信号肽和成熟肽两部分组成,其中Pthyastatin成熟肽有两个结构域:N端的富含Pro/Arg结构域和C端的包含6个保守Cys残基与对虾抗菌肽penaeidins同源的结构域,表明Pthyastatin属于对虾抗菌肽penaeidins家族;荧光定量RT-PCR分析结果表明Pthyastatin在血细胞中高水平组成型表达;致病菌副溶血弧菌诱导后Pthyastatin在血细胞中表达先下调、后上调,在诱导后24h表达量又基本恢复到诱导前水平,支持Pthyastatin在血细胞中高水平组成型表达的观点,但致病菌诱导后表达变化机制不明。     

溶菌酶和抗菌肽在对虾养殖中的应用

近年来,我国对虾养殖业取得了巨大进步。然而,随着养殖环境日趋恶化和人为原因导致的水质污染等问题的出现,使我国的养虾业依旧面临着流行性病原（细菌、病毒和真菌）的考验。为了从源头上防治和根除这些疾病,国内外一些专家、学者对对虾的先天免疫特别是溶菌酶（Lysozyme）和抗菌肽（Anti—microbial Peptides,AMPs）及其基因工程方面做了深入的研究并且有了一定进展。     

养殖期中国对虾抗菌肽的表达

利用半定量RT-PCR方法,根据中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗菌肽的cDNA序列,设计一对特异引物,首次对中国对虾养殖期(PL11期仔虾～稚虾)抗菌肽的表达进行了研究。结果在各时期样本所提取的总RNA中,均扩增出一条长度约为200bp的特异性条带,表明中国对虾养殖期不同阶段均有抗菌肽的表达,提示中国对虾抗菌肽基因为组成型表达,并可能是中国对虾抵抗微生物感染的一个重要分子基础。     

基因大盗——海兔

看看这只海洋小精灵,它警惕地竖起两只“耳朱”——在这一瞬间,它是不是活像一只蹲在地上竖着一对耳朵的小花兔呢？其实这就是罗马文献中描述的神奇海洋精灵——海兔。日本人称它为“雨虎”。事实上,它和我们常见的兔子亲缘关系很远,它是一种软体动物而不是哺乳动物。它头顶的两个可爱的突起也不是“耳朵”,而是触角。这两对触角分工十分明确,     

哺乳动物的组织再生基因被锁定

器官再生的秘密即将揭开,未来世界也许会更加匪夷所患·壁虎断了尾巴可以长出来,这种神奇的本领让人类羡慕不已。十年前开始的一项研究最近取得了里程碑式的成果：定位了哺乳动物中一个调控组织再生的基因。     

海水养殖花鲈鳃组织hepcidin-like抗菌肽基因克隆与序列分析

本研究利用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增技术（3’RACE）克隆出海水养殖花鲈（Lateolabrax japonicus）鳃组织hepcidin-like抗菌肽基因cDNA（523bp），包含完整的编码区、3’端非翻译区（3’UTR）和典型的多腺苷酸化信号（AATAAA）．该基因编码86个氨基酸，由信号肽、优势域和成熟肽组成．与花鲈肝脏分离到hepcl及国外发表白鲈（Morone chrysops）hepcidin氨基酸序列进行比较，结果显示花鲈鳃hepcidin-like基因编码的氨基酸与它们在27个位点上存在着差异；该hepcidin-like基因可能为hepcidin的不同变体，属于hepcidin抗菌肽家族的新成员．     

大黄鱼（Pseudosciaena crocea）一种新型抗菌肽的纯化及其生物学特性研究

以致病性溶藻弧菌为指示菌,通过酸粗提、固相萃取、Sephadex G-25柱凝胶层析和RP—HPLC等分离纯化技术,从大黄鱼胃肠组织中分离纯化抗菌肽。结果表明,大黄鱼肠道组织中存在着多种抗菌物质,并最终得到一种高纯度的新型抗菌肽AMP-W3。AMP—W3由10种氨基酸组成,其中天冬氨酸、谷氨酸和甘氨酸的含量较高。AMP...     

海洋生物抗菌肽在枯草杆菌BS168中的高效表达

为了实现基因工程高效制备tachyplesin Ⅰ,采用tachyplesin Ⅰ基因串联表达的方法,以穿梭表达载体pSBPTQ为表达载体,通过RT-PCR扩增tachyplesin Ⅰ基因(tac)和采用直接退火的方法合成tachyplesin Ⅰ串联基因(2tac),构建重组表达载体pSBPTQ-TAC和pSBPT...     

东方鲀属主要经济鱼种繁育养殖、育种和基因研究现状

鲀类是指硬骨鱼纲（Osteichthyes）、鲀形目（Tetraodontiformes）的一个鱼类类群。在南方,人们称它为“鸡泡鱼”、“气泡鱼”,在北方则称“河鲀”或“廷巴”。鲀类种类繁多,从太平洋至大西洋到处都有它们的踪迹。     

泥螺抗菌肽的初步研究

将一定浓度的大肠杆菌注射于泥螺体内18h后，将其粘液和血淋巴，于95℃加热10min，10000r／min，4℃离心20min，所得上清液用截留分子量为3kD的超滤装置于10000r／min，4℃下离心1h．滤液用Sephadex G-50分离，得到两个吸收峰．以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作为试验菌株检测抑菌活性，结果表明泥螺经大肠杆菌诱导后，在其血淋巴和分泌的粘液中可分离得到抗菌肽，此多肽具有分子量较小，热稳定性好，对革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌均能够起到抑制作用的特点．     

重组抗菌肽海藻酸钠微囊制备与体外释放特征研究

对重组表达的海洋生物抗菌肽对虾素3-2进行亲和层析纯化,以海藻酸钠为壁材,采用凝聚法制备了重组抗菌肽海藻酸钠微囊,以微囊的形态和包封率为指标优化制备工艺,对制备的微囊进行体外释放特征的初步研究。结果显示,在氯化钙浓度为1.5%,海藻酸钠浓度为2.0%时,制备的微囊为完整的球形,冷冻干燥后的直径约为1.1 mm,包封率为83.87%。微囊在模拟胃液(pH 2.0)中2 h左右释放量趋于稳定,释放量低于14%;微囊在模拟肠液(pH 7.8)中不断释放,5 h时释放量达98%,表明微囊具有良好的肠溶性而可以抵抗胃液的破坏,可以用作重组抗菌肽缓释/控释制剂,为抗菌肽在水产病害防治过程的口服给药提供实验基础。     

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)I 型Crustin抗菌肽的基因克隆与真核重组表达

Crustin 是目前报道广泛存在于甲壳类中的一类具有广谱抗菌活性的抗菌肽, 主要由甲壳类血淋巴细胞合成。本研究采用RACE 技术和真核表达技术, 进行了三疣梭子蟹Crustin 基因的克隆和重组表达研究。结果表明, 在三疣梭子蟹血细胞Crustin 基因cDNA 全序列中, 开放阅读框编码110个氨基酸残基的Crustin 前体, Crustin 前体由N 端21 个氨基酸残基的信号肽、富含Cys 结构域和C端WAP 结构域三部分组成, 属于I 型Crustin, 构建的分泌型真核表达质粒pVT102U/α-crustin 转化酿酒酵母S78, 经RT-PCR 和SDS-PAGE 电泳验证, 表明重组Crustin 表达成功。     

西沙群岛的棘皮动物 Ⅴ.海百合纲和总结

本文是西沙群岛棘皮动物研究报告的最后部分,包括海百合纲和总结。研究材料和以前一样是中国科学院海洋研究所采集的标本。西沙群岛珊瑚礁海百合种类不多,数量也很贫乏。共采56个标本,通过研究鉴定,仅包括3种海羊齿(Comatulids)，其中有一种在我国是首次记录。     

基于线粒体CO Ⅰ基因序列对中国海蛾螺科的分子系统学分析

本研究利用18种蛾螺总科（Buccinoidea）动物的CO Ⅰ基因序列对中国海蛾螺科进行了科上和科内水平的分子系统学分析。在建立的系统发育树中,蛾螺科种类聚成了4个明显的分枝:第一枝包括侧平肩螺（Japelion latus）、朝鲜蛾螺（Buccinum koreana）、黄海蛾螺（Buccinum yokomaruae）、皮氏蛾螺（Voluthapa perryi）、香螺（Neptunea cumingi）、小鼠脊蛾螺（Lirabuccinum musculus）以及褐线蛾螺（Japeuthria cingulata）;第二枝包括莫氏角亮螺（Antillophos monsecourorum）和尖鱼篮螺（Nassaria acuminata）;第三枝包括黑口甲虫螺（Cantharus melanostoma）和矛唇齿螺属（Engina lanceolata）;第四枝包括褐管蛾螺（Siphonalia spadicea）和长吻真螺（Euthria lubrica）。该结果与先前基于形态分析进行的亚科划分基本一致。蛾螺科的单系性没有得到支持,织纹螺科种类（Nassarius thachi、N.sinarus、N.euglyptus）插到蛾螺科系统树中并与角亮螺属（Antillophos）及鱼篮螺属（Nassaria）聚成一枝;东风螺科种类（Babylonia areolata、B.spirata）和榧螺科种类（Oliva mustelina）与褐线蛾螺（Japeuthria cingulata）聚成一枝。东风螺属起初隶属于蛾螺科,现已被移出并作为单独的一科——东风螺科Babyloniidae,本研究确认了这一结论。鱼篮螺属（Nassaria）和角亮螺属（Antillophos）与织纹螺属（Nassarius）种类聚在一起,这与最近的分子研究得到的结果一致。