克氏原螯虾LDH同工酶的组织特异性研究

以克氏原螯虾为材料,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,分析了肌肉、眼球、肝胰腺和心脏4种组织和器官中乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的表达情况。结果发现,眼球中出现Ldh-5和Ldh-62条酶带,肌肉中出现Ldh-1、Ldh-2、Ldh-3、Ldh-4、Ldh-5共5条酶带．肝胰腺中只出现Ldh-61条酶带,心脏中出现Ldh-3和Ldh-5共2条带。在这些检测到的酶带中,肌肉中Ldh-5活性最强,染色最深。实验结果表明,不同组织中LDH的同工酶的表达存在差异。表现出明显的组织特异性。     

2种不同体色的克氏原螯虾卵巢发育及生长特性研究

本文研究了2种不同体色的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)即青壳原螯虾和红壳原螯虾的生理指标和卵巢发育差异,对同规格不同体色的克氏原螯虾性腺发育、生长速度进行比较分析,以及比较不同温度下同规格的青壳原螯虾生长发育变化。研究结果表明,青壳雌虾卵巢处在I～III期,多数为Ⅰ、Ⅱ期,而同规格的红壳雌虾卵巢各期均出现,Ⅱ、Ⅲ期较多。体质量8g左右的虾苗在30d的饲养过程中,红壳原螯虾的增重率仅为青壳原螯虾的67%,青壳原螯虾的脱壳率比红壳原螯虾高出40%,平均脱壳周期比红壳原螯虾短9d。体质量10g左右的青壳原螯虾在水温(28±2)℃,无遮蔽物的条件下饲养30d后体色由青色转为红色,而相同规格的青壳原螯虾在(18±2)℃的水温,无遮蔽物条件下生长30d后体色仍保持为青色。     

黄鳍鲷LDH同工酶的组织特异性研究

以黄鳍鲷为材料进行两方面研究:（1）用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对其肌肉，心脏，肝脏，血清，玻璃体，晶状体，脑等组织器官进行LDH同工酶分析比较，结果表明，不同组织中LDH的同工酶谱带不相同，存在着组织特异性：（2）用聚丙烯酰胺等电聚焦电泳法对其肌肉，血清的LDH同工酶进行分离 ，结果得到12－15条电泳区带，等电点范围在pH为3．65－9．58之间。     

白斑症病毒(WSSV)对克氏原螯虾血细胞的感染规律

用WSSV粗提液注射感染克氏原螯虾,感染后每24 h采集螯虾血细胞。血细胞经与抗WSSV单克隆抗体及FITC标记的羊抗鼠抗体结合反应后,应用流式细胞仪检测WSSV对血细胞的感染,同时记录螯虾累积死亡率及血细胞密度。结果表明,感染WSSV后螯虾1~7 d的累积死亡率分别为3.3%,13.3%,16.7%,36.7%,70.0%,90%和100%;1~5 d血细胞被感染比例分别为6.47%,6.93%,10.65%,26.08%和4.94%;1~5 d被感染细胞的平均荧光强度分别为10.7,10.89,11.71,13.77和15.47;1~6 d血细胞密度分别为(7.56±0.30),(5.60±0.24),(4.21±0.30),(1.45±0.26),(1.21±0.21)和(1.14±0.18)×106个/mL,阴性对照组螯虾血细胞密度为(5.34±0.22)×106个/mL。可见,感染WSSV后螯虾血细胞密度呈现先升后降的趋势,至感染后第6天血细胞密度仅为对照组的21.3%;被感染血细胞内的病毒量始终呈上升趋势、达到最高感染率时螯虾处于濒死状态,表明血细胞的WSSV感染与螯虾死亡密切相关。     

克氏原螯虾(Procambarus clarkii) CypA基因应答WSSV侵染的表达研究

克氏原螯虾亲环素蛋白A(Procambarus clarkii Cyclopllilin A,简称PcCypA)是一种存在于克氏原螯虾(P.clarkii)中高度保守的重要蛋白,具有多种生物学功能。为了初步阐明CypA在病毒侵染克氏原螯虾过程中的免疫应答机制,本研究利用qRT-PCR等技术分析了克氏原螯虾在WSSV病毒感染后,PcCypA在不同组织中的转录表达情况。研究结果表明克氏原螯虾在感染WSSV后,心脏和肌肉组织中都出现了肌纤维断裂溶解的情况,在肝胰腺组织中出现了脂肪颗粒脱落、细胞空泡化和细胞膜溶解现象。同时,不同组织中的PcCypA基因表达存在明显的时序差异,以24hpi为界,0—24hpi为注射应激期,在此期间,肝胰腺、心脏等组织中的PcCypA转录表达量均有上调;24—36hpi为应激恢复期,绝大多数的组织中PcCypA转录表达均出现了回落,但在心脏、肌肉、血淋巴组织中出现了上调,说明这三个组织对WSSV感染的响应可能早于其他组织;48hpi之后为病毒感染响应阶段,在此期间鳃和肌肉组织中PcCypA表达量显著提升,而在肝胰腺和精巢组织中却出现表达下调;96—120hpi为感染响应后期阶段,肝胰腺和肠组织的PcCypA转录水平再次上调。因而,可以初步推断PcCypA在病毒WSSV侵染克氏原螯虾过程中参与了机体的免疫应答,且在不同的组织中PcCypA的转录表达水平存在显著差异。     

克氏原螯虾热休克蛋白70基因表达的定量研究

根据实验室克隆的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)HSP70(scHSP70)的核酸序列,制备内部缺失42bp的核酸片段作为竞争性模板.采用竞争性RT-PCR的方法,定量测定克氏原螯虾组织的scHSP70 mRNA的表达量.结果显示,scHSP70有广泛的组织分布,但是在正常情况下表达量均较低.经2 h热休克处理,7种组织的scHSP70 mRNA的表达量均显著上升,表明该scHSP70可能是一种热诱导型HSP70.心脏组织scHSP70在热激前后的表达量均较高,分别为1.12×105和4.80×105分子/μg总RNA.而血细胞中scHSP70的表达在热激前后均处于最低水平,分别为0.191×104和1.61×104分子/μg总RNA.在0～8 h长时间的热休克实验中,心脏组织scHSP70的表达随着热休克时间的延长,呈现增强的趋势,提示心脏组织在虾类的应激反应中发挥了重要的作用.     

流式细胞术检测对虾白斑症病毒(WSSV)对克氏原螯虾血细胞的感染

用WSSV粗提液人工感染克氏原螯虾,感染后分别在6,12,18,24 h采血分离血细胞,通过WSSV的混合单抗和FITC标记的羊抗鼠二抗的间接免疫荧光染色,应用流式细胞仪检测病毒对克氏原螯虾血细胞的感染并分析感染强度.结果表明:分离获得的血细胞形态完好,感染后血细胞内的病毒被标记上了绿色荧光;流式检测发现,随感染时间延长,被感染细胞的百分率及平均荧光强度均逐渐升高,反映血细胞的病毒感染程度逐渐加深;PCR检测同时证实人工感染后各采样点血细胞样品均为WSSV阳性.     

不同盐度对克氏螯虾幼虾代谢率的影响

研究了不同盐度对克氏螯虾(Procambarus clarkii)幼虾耗氧率和排氨率的影响.试验用虾体长(3.13±0.30)cm,体重在(1.82±0.21)g.在25℃条件下,试验设置0、2、4、6、8、10、12共7个盐度梯度.在试验设置的盐度范围内,在盐度为2时,克氏原螯虾幼虾的的耗氧率与排氨率最低,由此可以表明幼虾对盐度调节的等渗点在2左右.随着盐度升高,幼虾的耗氧率和排氨率也随之上升,Turkey HSD test发现,在对照组、2、4和6盐度组的耗氧率、排氨率差异明显(P＜0.05).超过0～6的盐度范围时,盐度对幼虾的耗氧率、排氨率影响与对照组的差异显著(P＜0.05).     

基于图像识别的5个不同产地克氏原螯虾(Procambarus clarkii)形态差异分析

为了解江苏、江西、湖北、上海、河南5个地区克氏原螯虾（Procambarus clarkii）的形态差异和获取快速、有效的形态鉴别方法,本研究采用传统形态测量法和地标点法来分析各产地形态差异。结果显示：（1）克氏原螯虾雌雄群体相对扭曲主成分分析,前三个主成分累计贡献率分别为79.96%、67.21%,传统形态测量法前三个主成分累计贡献率分别为76.77%、82.70%,两种方法均表明其形态差异主要体现在头胸甲及腹部部位;（2）聚类分析将克氏原螯虾5群体聚为两支,上海、河南、江西、湖北群体聚为一支,江苏群体单独聚为一支。（3）地标点法雌雄群体综合判别准确率分别为100%、94%,传统形态测量法综合判别准确率均为56%。以上研究结果表明不同产地间克氏原螯虾具有一定的形态差异,且地标点法区分不同产地克氏原螯虾群体差异性效果显著,这将有利于克氏原螯虾生产和选育过程中群体的鉴别及外形特征的快速获取。     

西施舌同工酶组织特异性研究

采用不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对西施舌5种组织(肝胰脏、鳃、后闭壳肌、外套膜和足)的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶进行了研究。同工酶图谱显示:西施舌上述组织的3种同工酶具有一定的组织特异性。其中,肝和鳃组织EST酶活性较高,闭壳肌MDH酶活性最高,而肝组织SOD酶活性略高,上述组织是进行同工酶分析的理想材料。     

口虾蛄超氧化物歧化酶同工酶的组织特异性研究

以口虾蛄为材料进行研究，用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对其肌肉、心脏、腹鳃、肝胰腺及眼球5种组织器官进行超氧化物歧化酶(SOD)同工酶的研究分析。结果表明：不同组织中超氧化物歧化酶(SOD)的同工酶谱带存在差异，具有明显的组织特异性。眼球、腹鳃、肝胰腺和心脏中有2条酶带，肌肉中几乎不表达，心脏中SOD2和肝胰腺中SODl谱带表达最浓，而腹鳃中的酶带表达最弱。     

鳜亚科SINIPERCINAE鱼类的LDH同工酶的比较研究

对鳜亚科9种鱼类的LDH同工酶进行了比较研究。结果表明9种鱼的LDH同工酶表型具有明显的种间差异;同种的个体及性别之间没有明显差异。根据LDH同工酶表型所得的分类结果与形态分类基本一致。鉴于9种鱼具有基本相同的相对迁移率,提出鳜亚科的种类可能是单系起源。在暗鳜(Siniperca obscura Nichols,1930);鳜(S.chuatsi Basilew-sky,1855)的晶体里,发现了C基因控制的区带,暗鳜、斑鳜(S.scherzeri Steindachner,1892)及大眼鳜(S.knerni Garmar,1912)的肝组织中酶谱存在多态现象。     

口虾蛄(Oratosquilla oratoria)同工酶的组织特异性及生化遗传分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳方法，研究分析了口虾蛄(Oratosquilla oratoria)肌肉、眼球、腹鳃、心脏和肝胰腺5种器官或组织中LDH、ADH、MDH、SDH、MEP、POD、AMY、GDH、SCD、EST、GLDH和SOD共12种同工酶的表达情况。结果表明，口虾蛄同工酶的表达具有明显的组织特异性。对12种同工酶进行生化遗传分析，获得了基本酶谱。12种同工酶共记录出35个基因座位，其中11个基因座位Ldh-3、Adh-1、Sdh-2、Est-1、Est-2、Est-3、Mdh、Mep-7、Gldh-1、Gldh-2和Scd-1为多态，其多态座位比例为31.43％。     

卤虫杂交品系生化特性的初步研究

选择两性生殖品系（我国山西运城两性生殖品系）的雌体卤虫与孤雌生殖品系（天津塘沽品系）的雄体卤虫，于实验室内获得杂交品系，并对此杂交品系和其亲本品系进行生化特性的比较分析。①同工酶分析的结果表明：杂交F1代雌、雄个体和双亲品系雌、雄个体间的过氧化物酶表现基本相同；F1代的葡萄糖－6－磷酸脱氢酶表现出双亲间的过渡状态；F1代的肌浆蛋白酶带的数量、活性都高于亲本。②进一步对杂交F1代、山西运城两性生殖品系的氨基酸种类和含量做了比较分析，结果表明：杂交品系的氨基酸总含量明显高于其亲本，且含有单一亲本所不具有的氨基酸（如胱氨酸）组成。本实验结果显示，通过杂交手段可显著提高卤虫遗传变异水平，并且是选择高卤虫营养品系的手段之一。     

罗氏沼虾肌肉8种同工酶的研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)肌肉中的ADH,LDH,G6PDH,SOD,GDH,EST,AKP,ACP等8种同工酶进行分析,以期为其种质资源保护和开发以及遗传育种等方面的研究提供基础资料.结果表明,8种同工酶由17个基因位点所编码,其中G6pdh-1,Gdh-1和Est-3等3个基因位点具有多态现象.多态位点比例为17.6%.     

不同地理品系卤虫的同工酶变异初步研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对国内外不同生态地区的孤雌生殖和两性生殖卤虫进行了酯酶（ＥＳＴ）、四唑氧化酶（ＴＯ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）同工酶变异分析。指出不同地理品系卤虫有其独特的ＥＳＴ和ＴＯ标志酶带；孤雌生殖卤虫具有与两性生殖卤虫显著不同的ＴＯ基本带型和ＡＬＰ标志带区。这些结果为卤虫地理品系的纯度鉴定，以及两种生殖方式卤虫的分类和鉴别提供了生化指标。     

黄河鲤鱼和鲤鱼同工酶的研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳，分析了黄河鲤鱼Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｃａｒｐｉｏｈａｅｍａｔｏｐｔｅｒｕｓ和鲤鱼Ｃｙｐｒｉｎｕｓ ｃａｒｐｉｏ的脑、肝、心、肾、肌、眼等六种组织器官的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶和脂酶（ＥＳＴ）同工酶。结果表明：在不同组织中两种同工谱带各不相同，存在着明显的组织特异性。黄河鲤鱼和鲤鱼的乳酸脱氢酶谱带相似，但存在一定的差异性；除在眼、心、肾三种组织中黄河鲤鱼比鲤鱼多一条     

凡纳对虾个体发育早期的同工酶研究

采用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳技术，对凡纳对虾(Penaeus vannamei)个体发育早期6个时期的11种同工酶系统(EST、ALP、ACP、GDH、MDH、LDH、AAT、ME、LAP、ADH、AMY)进行研究。结果表明，凡纳对虾在幼体发育阶段已基本具备分解代谢蛋白质、脂类、碳水化合物的酶系。在早期发育过程中，EST同工酶系最为复杂，显示5-15条谱带，至少由6个位点编码；整个发育早期阶段GDH表达很弱，未见R-AMY及Q_AMY的表达；ALP、GDH、AMY及EST在无节幼体期表达很弱或未见表达；ACP、MDH、ME、ADH及AMY酶谱从糠虾幼体第Ⅲ期开始谱带数明显增加；除LAP、AAT酶谱简单且各期变化差异不大外，其它9种同工酶均随发育进程表现出明显差异。     

无裂栉江珧种内同工酶表型差异的比较研究

采用垂直板聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳对 4种不同类型无裂栉江珧Atrinapectinata的肾脏、后闭壳肌和鳃组织进行了酯酶 (EST)、过氧化物歧化酶 (SOD)、乳酸脱氢酶 (LDH)、苹果酸脱氢酶 (MDH)、苹果酸酶 (ME) 5种同工酶的比较研究。结果表明这 4种类型的酶谱表达有差异 ,特别是肾组织的EST ,后闭壳肌的EST、SOD和鳃组织的SOD、MDH的酶谱表型差异明显 ,其特征谱带可作为区别无裂栉江珧种内差异的一种分子标记。