真鲷精子的超低温保存研究

对真鲷精子超低温保存技术进行了初步探讨，在液氮中保存真鲷（Pagrosomus major)精子时发生冷冻伤害的温域为－30－60℃，适宜的降温速率为20℃／min；使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20％；采用低盐度或高pH值的溶液激活冻精的效果不如自然海水。真鲷冻精的复苏率和存活率最高可达到50．73％和62．5％；以20℃/min和20％DMSO处理真鲷精子，保存在液氮中46d徨冻精复苏率和存活率为50．63％和61．02％。     

中国对虾精子超低温保存的研究

于1991年11月-1993年5月对中国对虾纳精囊中精子进行超低温保存研究。结果表明，以自然海水或人工海水作基础液添加10％DMSO（V／V）及5％－10％的甘油配制成抗冻稀释液，稀释中国对虾精子进行超低温保存最有效，存活率在60％以上；保存94-138d，解冻后作人工授精，受精率最高达59％；稀释液中Mg2+，K+，Ca2+为超低温保存所必需，但Ca2+浓度过高则不利于精子的保存。光镜及电镜观察表明。冷冻对中国对虾精子的损伤主要表现为“棘突”的折断，严重时须体脱落仅剩精核；冻伤的精子不发生正常项体反应，不形成项体丝。     

不同温度保存对黑鲷精子生理特性的影响

分别采用室温（２１℃左右）低温（３－５℃,冰箱）和超低温（－１９６℃,液氮）保存黑鲷Ｓｐａｒｎｓｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｕｓ（Ｂａｓｉｌｅｗｓｋｙ）精子,探讨不同温度保存在黑鲷精子生理特性的影响,在室温条件下,黑鲷精子活力随保存时间的延长而下降,保存４ｈ后的精子失去激烈运动的能力,在低温条件下,黑鲷精子寿命有所延长,黑鲷精子经过超低温保存后,其激活率,受精率与鲜精的接近,精子活力则有所下降,黑鲷新鲜     

美洲黑石斑精子超低温保存研究

作者采用2 mL 的冷存管和程序降温仪高效超低温保存美洲黑石斑(Centropristis striata L.)精子.分析比较了4种不同浓度抗冻剂15%DMSO(二甲基亚砜)、15%EG(乙二醇)、15%PG(丙二醇)和10%Meth(甲醇),5种降温速率(10,15,20,25,30℃/min)和5种解冻温度(30,35,40,45,50℃)对美洲黑石斑精子超低温保存效果的影响.实验结果表明,采用 Hanks’作为稀释液,15% DMSO、15% EG、15% PG 作为抗冻剂,30℃/min 的降温速率对精液进行超低温保存35℃水浴解冻,冻精激活后获得理想的运动率(>60%).通过对抗冻剂、降温速率、解冻温度的筛选,作者建立了美洲黑石斑精液高效超低温保存的方法,并对冻精进行长期保存.美洲黑石斑精子超低温保存方法的建立对于海水鱼类精子库的建立以及种质资源的保存和生物多样性的保护具有重要意义.     

中国对虾精子超温保存的研究

于１９９１年１１月－１９９３年５月对中国对虾纳精囊中精子进行超低温保存研究。结果表明，以自然海水或人工海水作基础液添加１０％ＤＭＳＯ（Ｖ／Ｖ）及５％－１０％的甘油配制成抗冻稀释液，稀释中国对虾精子进行超低温保存最有效，存尖率在６０％以上；保存９４－１３８ｄ，解冻后作人工授精，受精率最高达５９％；稀释液中Ｍｇ＾２＋，Ｋ＾＋，Ｃａ＾２＋为超低温保存所必需，但Ｃａ＾２＋浓度过高则不利于精子的保存。光镜及     

不同温度保存对黑鲷精子生理特性的影响

分别采用室温(21℃左右)、低温(3—5℃,冰箱)和超低温(-196℃,液氮)保存黑鲷Sparusmacrocephalus(Basilewsky)精子,探讨不同温度保存对黑鲷精子生理特性的影响。在室温条件下,黑鲷精子活力随保存时间的延长而下降,保存4h后的精子失去激烈运动的能力。在低温条件下,黑鲷精子寿命有所延长。黑鲷精子经过超低温保存后,其激活率、受精率与鲜精的接近,精子活力则有所下降。黑鲷新鲜精子在海水盐度为10时能被激活,但经过超低温保存后的黑鲷精子激活所需的最低盐度必需在10以上。     

日本蟳精子获取和超低温冷冻保存技术研究

本文比较了胰酶消化法、网搓法和机械研磨法3种方法对获得游离日本蟳精子的效果。对获得的精子进行超低温冷冻保存,用曙红Y进行染色,检测精子的存活率。使用7种不同稀释液、不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)、甘油(GLY)、1,2-丙二醇(PG)为抗冻保护剂,在6种不同的降温程序下,对日本蟳精子进行超低温冷冻保存,后在不同的温度下解冻复苏精子。实验结果表明:3种精子获取方法中以搓洗法的实验效果最好,胰酶消化法的效果次之,最差的是机械研磨法。其中搓洗法中以500目的筛绢效果最好,精子密度达2.56×10~(13)个/mL。日本蟳精子冷冻保存实验结果表明,稀释液以去钙人工海水、抗冻保护剂以5%DMSO、平衡时间20 min、降温程序P-1(0℃平衡20 min;-5℃/min降至-80℃;-80℃平衡5 min;-20℃/min降至-180℃;然后置于液氮中保存),水浴解冻37.5℃的效果最好,精子存活率最高。     

赤点石斑鱼精子的超低温冷冻及短期保存

对赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)精子的激活特点、超低温冷冻方案筛选、短期保存、受精实验等方面进行了研究。结果表明：水温25℃、比重为1.018的海水对赤点石斑精子具有最佳的激活效果,活力为(82.50±4.18)%;在进行超低温冷冻时,选择距离液氮面7 cm的高度进行降温,获得冻后活力为(65.83±3.76)%,显著高于1、3、15 cm 的处理组(P<0.0001),利用冻存液 B(含30 g/L 海藻糖、10%DMSO 的生理盐水)冻存赤点石斑精子,冻精活力为(67.92±3.96)%,显著高于另外两种冻存液(P<0.05);通过优化的方案(冻存液B,7 cm高度)冻存得到精子可获得较好的受精效果,受精率为(74.55±4.31)%,而相应的鲜精受精率可达(87.42±4.63)%,二者间的差异具有显著性(P=0.017);短期保存的结果表明,赤点石斑鱼精子在4℃环境中保存约两周后活力降低为0。     

鱼类精液超低温冷冻保存的研究展望

精液的超低温冷冻保存是从上世纪50年代开始的，此项技术发展至今已取得很大成就。国外学者的工作主要集中在冷水性鲑鳟鱼类及某些海水鱼上，而国内以研究四大家鱼及其他淡水鱼类精液的超低温保存居多，只有少数学者研究如真鲷、黑鲷、花鲈、大弹涂鱼等海水鱼类精液的超低温保存。本文就开展鱼类精液冷冻保存研究的意义、鱼类精子超低温保存的基本生物学原理，及有关鱼类精液冷冻保存的研究现状等作一综合评述。     

点带石斑鱼的精子活力及超低温冷冻前后精子超微结构的比较

研究了盐度、pH对点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)精子活力的影响;同时对超低温冷冻前后点带石斑鱼精子的超微结构进行了比较观察。研究结果表明:(1)该鱼精子活力的适宜盐度范围为15-35,盐度为15时,精子寿命最长为26 min;最适pH值范围为6.5-8.0,当pH值为7.5时,精子的寿命最长为4 min;(2)超低温冷冻保存前,正常的点带石斑鱼精子由头部、中段和尾部3部分组成,精子头部呈球圆形或近圆形,直径约1.8 m;中段不明显,可见线粒体;鞭毛细长,约15 m,尾部主要结构是轴丝,为典型"9+2"微管结构;(3)超低温冷冻保存后,点带石斑鱼精子的形态结构损伤明显,主要表现为质膜褶皱、破裂,细胞质外漏,线粒体膨胀破损,脱落和鞭毛断裂等特征。     

日粮水平对黑鲷幼鱼氮收支的影响

于１９９４年８－１１月进行４次黑鲷幼鱼摄食－生长实验,平均水温２６．８,２４．４,２０．１和１４．８℃,生次实验分４个日粮水平,分别对单位体重日摄取、粪便氮、氮排泄和氮生长进行测定和估计。     

黑鲷早期鳞被的形成

黑鲷Sparus macrocephalus(Basilewsky)幼苗鳞被最早出现的部位是在躯干部胸鳍基后至肛门直上方的侧线处。黑鲷只具一个鳞被起始中心。最早出现鳞片的个体为体长9.5—14.1mm,平均11.51±0.85mm,全长11.2—16.5mm,平均13.65±1.01mm,孵后日龄23—35d。鳞被发育完全时的最小个体为体长12.1—18.5mm,平均14.57±1.55mm,全长14.8—23.5mm,平均17.99±2.17mm,孵后日龄27—42d。     

气泡幕对黑鲷阻拦作用机制初探

于１９８７年３月－１９８８年１月在室内水池中观察黑铜失去视觉后气泡幕的反应,比较同种参数气泡幕对正常视觉黑鲷与失去视觉黑鲷的阻拦效果,采用大小适宜的红黑双层布将鱼的双眼裹住,使鱼失去视觉,探讨气泡幕对鱼类作用的机制,结果表明,黑鲷失去视觉后,活动受到限制,游泳行为发生变化,游速显著低于正常视觉时,气泡幕对其阻拦率由正常视觉由７５．１％下降到４５．２％下降了３９．８％,ｔ－检验表明,两种视觉状态下的     

盐度变化对黑鲷生长激素及其受体的影响

将海水鱼类黑鲷Sparusmacrocephalus从盐度为26.6的海水直接转入淡水,考察渗透压的急剧降低对黑鲷的生长激素(growthhormone,GH)及其受体(growthhormonereceptor,GHR)等生理指标的影响。研究发现:(1)黑鲷从海水直接转入淡水后48h有33%的鱼死亡,对照组无死亡现象;(2)黑鲷在转入淡水48h内其血清生长激素(GH)含量、肝脏及鳃中GHR及GHRmRNA含量与对照组均无显著差异;(3)黑鲷在转入淡水48h后其肾脏中GHR含量较对照组显著升高(p<0.05),肾脏中GHRmRNA含量在24h及48h显著高于对照组(p<0.05)。结果表明,从GH含量看,黑鲷从海水环境到淡水低渗环境与鲑鳟鱼类从淡水到海水环境的适应性调节机制有差异,而黑鲷肾脏中GHR的含量变化可能参与黑鲷对外界环境渗透压的这种急剧降低的适应性调节。     

黑鲷（Sparus macrocephalus）成熟精,卵和精子入卵早期过程的初步观察

黑鲷精子入卵早期发育迅速。精、卵相遇的3－5sec左右,卵孔管出现一种能引诱精子入卵的物质;精卵相触约10－15sec左右,即精子进入卵孔管后,管内又涌出另一种能阻止多余精子继续入卵的物质;同时,受精锥形成。约15-54sec左右,受精膜发生;约90sec左右受精膜举起,围卵腔雏成;约180sec左右受精锥开始退缩,精子头部和颈部被俘入卵内;约300sec左右出现第二极体。文中对卵孔管出现的这两种物质进行了浅析。     

黄海黑鲷仔鱼耳石的日轮以及光照对其形成的影响

实验仔鱼于１９８６年５月，由饲养在海洋研究所室内的同一尾黄海黑鲷雌鱼在一次产卵中取得的受精卵孵化后取得的。对实验仔鱼耳石生长轮形成的周期以及光照对其形成的影响进行了观察。实验证明，黑鲷仔鱼耳石生长轮形成具有日周期性，仔鱼培育天数与耳石生长轮数之间的关系以回归式Ｎ＝Ｄ－１．８９表达之。在２４ｈ内的１２ｈ光照，１２ｈ黑暗条件下，耳石形成一个宽带和一个窄带。在６ｈ光照，６ｈ黑暗条件下，则形成两个宽带和两     

用包埋脱水法冰冻保存牟氏角刺藻

采用包埋脱水法研究了牟氏角刺藻(Chaetaceros muelleri)的超低温保存，探讨了影响存活率的内、外因素：藻细胞年龄、蔗糖浓度、脱水速率、胶球含水量等。结果 表明，将处于静止初期的藻细胞包埋在含有0．5mol／L蔗糖的3％褐藻酸钙胶球中，以平均速率0．9％含水量／h脱水至胶球含水量为40％的条件下冰冻存活率较高，可达到30％左右。与常规的两步法冰冻保存相比。包埋脱水法可大大简化操作程序，是保存牟氏角刺藻的一种有潜力的方法。     

黑鲷消化系统的胚后发育研究

于１９９５年３－６月,在中国科学院海洋研究所养殖池采集养殖黑鲷的各期仔鱼、稚鱼和幼鱼样品,利用组织切片技术,综合外观特征,在显微和电镜水平对其消化系统的发育特点和细胞结构等作了系统观察研究。结果表明,黑鲷仔、稚、幼鱼消化系统的发育煌阶段性,胃、肠、肝、胰和幽门盲囊在仔鱼期开始发育,后逐渐成熟。仔鱼在饵料转换期内的死亡率较高,主要原因是其消化系统的结构和功能尚不完善。饵料的种类和适口性亦可直接影响仔