养殖牙鲆卵巢发育及其调控的组织学研究

采用石蜡切片技术、H．E染色和免疫组织化学方法，对工厂化养殖雌性牙鲆的性腺发育进行了深入的研究。实验鱼体长范围为28～38cm，卵巢发育较迟缓，均处于Ⅱ期；实验中给予外源激素进行调控，结果发现单独注射LHRH—A2（25μg／kg体重）、hCG（1000IU／kg体重）和这两种激素的联合注射（LHRH—A2：12．5μg／kg体重，hCG：500IU／kg体重），均未能有效促进牙鲆性腺的进一步发育。     

外源激素对养殖牙鲆血浆睾酮和雌二醇含量的影响研究

雄性牙鲆单独注射促黄体激素释放激素类似物(LHRH-A)(每千克质量的注射量,下同)25μg/kg或人绒毛膜促性腺激素(hCG)1 000 IU/kg,血浆睾酮(T)含量在注射后6 h大幅度降低,12h时达到最低值,以后逐渐回升;LHRH-A与hCG联合注射[LHRH-A(12.5μg/kg)+hCG(500 IU/kg)],注射后6 h血浆T含量剧烈下降,24 h时达到最低点,以后缓慢回升;对照组雄鱼血浆T含量随着采样进行而呈现降低趋势.雌鱼单独LHRH-A后,血浆雌二醇(E₂)水平逐渐下降,24 h时达到最低值,30 h后略有回升;单独注射hCG后,血浆E₂含量缓慢下降,30 h达到最低值;LHRH-A与hCG联合注射,注射后6 h血浆E2含量逐渐下降,24 h时达到最低点,30 h时缓慢回升.对照组雌鱼血浆E₂水平也随着采样的进行而逐渐降低.结果表明:单独或联合注射LHRH-A和hCG降低了雌、雄牙鲆血浆E₂和T含量,与对照组结果相同.     

重组酵母菌对牙鲆生长及血清激素含量的影响

于１９９８年１０－１１月间在荣成市寻山养殖场实验了饲喂具有大麻哈鱼生长激素基因的酵母菌对牙鲆的生长及其血清激素的影响。实验分为对照组和三组实验组,其中对照组的铒料中不含重组酵菌,实验组的铒料中分别含有重组酵母菌０．２５‰、０．５０‰、０．７５‰（Ｗ／Ｗ）。实验表明,通过投喂重组酵母菌,可以增加牙 血清生长激素的含量,牙促进牙鲆的生长。重组酵母菌的含量不同,对牙鲆血清甲状腺素和三碘甲状腺原氨酸的影响     

促激素及其受体在雄性半滑舌鳎脑垂体和精巢中的定位

应用兔抗血清对抗鱼类和哺乳类促激素及其受体的多克隆抗体对雄性半滑舌鳎脑垂体和精巢进行了免疫组织化学定位.其结果显示GnRHR、LHR和GtH免疫活性定位在不同发育时期的腺垂体和精巢中.GtH免疫阳性细胞的数量和免疫强度随着精巢发育成熟而明显增强.同时还发现睾酮（T）和雄激素受体（AR）在半滑舌鳎精巢中的定位有别于其他鱼类,尤其是雄激素受体（AR）免疫活性在精原细胞中的数量很少.依据这个特点文中还讨论了其可能与精巢发育的关系,同时证明了半滑舌鳎精巢发育像其他硬骨鱼类一样受激素的调控.     

外源类固醇激素对中华绒螯蟹幼蟹精巢发育影响的初步研究

本文报道了１７α－甲基睾丸酮和１７β－雌二醇两种外源类固醇激素对中华绒螯蟹幼蟹精巢发育的影响。１７α－甲基睾丸酮可促进中华绒螯蟹幼蟹精巢发育,即精巢指数增大、加快精子的形成;１７β－雌二醇对上述指标有抑制作用;酒精则对其无影响。     

苯并[a]芘对雄性褐菖鲉精巢成熟的影响

本实验采用雄性褐菖鲉作为实验对象,腹腔注射0.5×10-6、1×10-6、5×10-6、10×10-6(m/m)苯并[a]芘,7d后苯并[a]芘处理组精巢睾酮水平和睾酮与17β-雌二醇的比值都有上升,但都未表现出显著性差异(P>0.05).腹腔注射50×10-6(m/m)苯并[a]芘,11d后取出精巢,常规石蜡切片,结果显示雄性褐菖鲉的精巢,精小叶腔和输出管中精子密集程度明显增加,次级精母细胞减少,精巢壁厚度变薄.结果提示,苯并[a]芘对褐菖鲉具有类雄激素效应.     

凡纳滨对虾“眼柄-促雄性腺-精巢”内分泌轴调控精巢发育的分子机制研究

位于甲壳动物眼柄的神经内分泌器官在调控甲壳动物的繁殖过程中发挥着重要作用。已有证据表明“眼柄-促雄性腺-精巢”内分泌轴调控十足目雄性甲壳动物精巢的发育,但是该过程的分子机制仍不清楚。本研究以凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）为实验对象,研究了切除雄性对虾的单侧眼柄对促雄性腺内胰岛素样促雄性腺素基因（LvIAG）和精巢内基因表达的影响。结果表明,切除单侧眼柄后,LvIAG基因的表达明显上调;比较了眼柄切除前后对虾精巢的转录组数据,共有267个基因的表达量出现明显变化。对精巢内差异表达基因进行功能分析发现,多个参与性腺发育和内分泌调控的基因发生表达上调,如Doublesex（Dsx）、保幼激素环氧水解酶（juvenile hormone epoxide hydrolase,JHEH）、细胞色素P450酶系基因以及泛素化系统相关基因等。对差异表达基因进行荧光定量PCR验证,结果与转录组结果一致,证实了转录组结果的可靠性。研究结果表明,对虾眼柄调控精巢的发育很可能是通过影响促雄性腺中LvIAG的表达,进而调控精巢内Dsx、JHEH、内分泌及泛素化系统相关基因的表达实现的。研究结果对深入理解甲壳动物精巢发育的分子调控机制提供了重要依据,对甲壳动物的人工繁育也具有重要指导意义。     

摘除眼柄对中华绒螯蟹精巢发育及其氨基酸含量的影响

本文报道了摘除眼柄对中华绒螯蟹精巢发育及其氨基酸含量的影响,实验分成两组,即摘除眼柄实验组和对照组。结果表明：对照组粗巢内生殖细胞种类多,各期的生殖细胞都有,与之比较,实验组的种类少,只有精子期细胞,说明摘除眼柄可促进精巢发育,加快精子的形成,并使精巢发育同步化,摘除眼柄对精巢氨基酸含量有一定的影响,本文探讨了中华绒螯蟹性早熟可能的机制。     

大泷六线鱼精巢发育的周年变化研究

为完善六线鱼的人工繁殖理论,采用石蜡切片,HE组织染色方法研究了性成熟野生大泷六线鱼的精巢结构和精巢发育的周年变化过程。结果表明,大泷六线鱼精巢为典型的小叶型结构,精小叶间有间质细胞（Leydigs cell）,小叶内有支持细胞（Sertolis cell）及精小囊结构,其精巢的周年发育历程可分为：重复发育Ⅲ期,精子形成Ⅳ期,精子成熟Ⅴ期和退化吸收Ⅵ期。8月下旬开始生精活动的启动,生殖季节为11月至翌年1月份,2～4月份为退化吸收期,5～7月份为重复发育Ⅲ期。     

养殖牙鲆淋巴囊肿病防治的初步研究

牙鲆淋巴囊肿病发病率高 ,一年四季均可发病 ,目前尚无有效药物防治。实验采用 2种方式对健康鱼进行人工感染致病 ,然后根据不同水温加福尔马林、过氧化氢药浴。结果表明 ,2 2～2 5℃高温水结合过氧化氢药浴可使病鱼体表囊肿消失     

牙鲆发育中ALP基因表达图式及功能分析

为探讨研究碱性磷酸酶（ALP）在牙鲆发育变态中的表达与功能，采用组织学和分子生物学的方法对牙鲆ALP进行了研究。结果如下：1．组织化学染色显示原肠期胚体中即可以检测到ALP的活性。出膜后，在头和背部的活性比较强，而身体的内脏区域，活性较低，卵黄中没有表现出酶活性。仔鱼进食后，ALP开始在消化道中大量的表达，特别是在胃肠道粘膜层。2．牙鲆ALPcDNA全长为1811bp，预测能编码476个氨基酸的蛋白质。采用RT-PCR的方法在牙鲆卵到出膜后5天的时候不能检测到ALP基因表达，到变态前的仔鱼体内开始表达。在成鱼胃、肝、鳃、皮肤、皮下肌肉、肾中均能检测到ALP的表达。3．变态前的仔鱼身体总ALP活力约为出膜时的卵中酶活力的4倍，在变态期酶活力变化不大，但是在变态后期上升明显。甲状腺素（T4）在变态中对酶活力增加有明显的促进作用。作为甲状腺素合成抑制剂，硫脲（Tu）能降低仔鱼体内酶活性。4．使用ALP的活性抑制剂左旋眯唑（TRM）处理的仔鱼消化功能和头部骨骼的发育受到一定的影响。消化道内食物很少，消化道上皮层中ALP免疫显色反应减弱。头部骨骼中发现较多骨细胞死亡而只留下一些细胞碎片，超过95％的仔鱼不能完成右眼的移位就发生死亡，变态比对照组迟缓。5．定量PCR结果表明，变态中期ALP基因表达量只有初期的1／2，变态后期却明显上升到变态初期的2．5倍，T4和Tu处理对ALP基因表达产生影响的在中期和后期表现明显。中期T4组明显高于对照组和Tu组，变态后期T4组和Tu组均低于对照组。     

盐度对牙鲆非特异性免疫功能的影响

实验以健康牙鲆成鱼为研究对象，分别饲养于盐度为40，30(对照组)，20的海水中，以牙鲆血清的凝血活性、溶菌酶含量以及补体因子C3含量为指标，研究盐度对牙鲆非特异性免疫功能的影响。结果表明，盐度增加或降低3d后血清凝血活性升高4倍，并一直保持至12d不变；溶菌酶含量先是升高，在第5天达到高峰后又逐渐降低，至第12天的含量反而略低于对照组；C3的含量在第一天取样时就比对照组有了很大的增长，随后逐渐下降，在第7天后恢复正常。盐度变化导致牙鲆非特异性免疫因子变化，说明在养殖生产中维持稳定环境极为重要。     

雌牙鲆CYP19A基因启动子“CpG”岛区的单核苷酸多态性及与繁殖性能的关联分析

芳香化酶基因(CYP19)编码的芳香化酶是雄激素转化为雌激素的关键酶,在鱼类性腺发育及繁殖内分泌过程中起着重要的作用。本研究采用聚合酶链式反应-单链构象多态(PCR-SSCP)和放射性免疫方法(RAI)对61尾雌牙鲆进行了CYP19A基因启动子CpG岛区多态性检测,并将其与繁殖性能进行了关联分析。CpG岛区存在3种类型的基因型(pattern1、pattern2、pattern3),经测序发现CpG岛区有以下突变:T-1927插入或缺失、C-1899插入或缺失、T-1772C、C-1766T、TGTCAAC-1752~-1744插入或缺失(11个SNPs连锁突变)。方差分析结果表明:此位点对雌二醇(E2)水平的效应达到显著(P<0.05)水平,经多重比较分析,具有pattern1基因型的个体的雌激素(E2)水平显著低于pattern2和pattern3基因型个体的雌激素水平(P<0.05),同时pattern1基因型的个体的mRNA表达量显著低于pattern2和pattern3基因型个体的mRNA表达量(P<0.05)。以上结果表明,CYP19A基因调控区甲基化位点突变可能导致芳香化酶的表达量,进而影响牙鲆繁殖内分泌过程;同时也阐明了这些与牙鲆繁殖性状相关的SNPs可以用于生产实践中进行标记辅助选择具有优良繁殖性能的牙鲆。     

外源激素对二龄圆斑星鲽卵巢发育诱导效果的初步研究

为了认识2龄雌性圆斑星鲽的生殖特性和生殖潜力,采用注射外源激素诱导方法,研究了外源激素鲑鱼促性腺激素释放激素(GnRH)、促黄体素释放激素类似物(LHRH)诱导2龄雌鱼卵巢发育的效果.结果表明:两种外源激素以GnRH对卵母细胞成熟的诱导效果为好,经外源激素诱导后,有约30％实验鱼的卵巢部位可见相对明显的隆起,组织切片观察显示,实验鱼卵母细胞可达到5时相早期,但未能发生水合作用而成熟,表明2龄圆斑星鲽对外源激素的诱导应答效应较弱;外源激素诱导后,血浆中性类固醇激素(雌二醇和睾酮)的表达水平显示显著升高,96 h后表达水平下降恢复至正常水平;同时发现,激素诱导实验鱼的肝细胞直径增加,表明外源激素诱导可能部分启动了卵母细胞发育成熟所需卵黄蛋白物质的发生和转化过程.未能获得亲鱼产卵,可能是由于2龄人工亲鱼内分泌成熟调控系统对外源激素的响应机制未完全建立所导致.研究结果为认识人工养殖条件下圆斑星鲽的生殖特性及生殖潜力评价提供了理论支持和技术依据.     

牙鲆胸腺的组织学研究

牙鲆的胸腺位于鳃腔背面结缔组织膜上,紧贴着肾脏的头部,界限清晰,胸腺不向咽腔突出,胸腺上皮没有粘液细胞。牙鲆胸腺没有明显的外区和内区之分,胸腺细胞和巨噬细胞比较均匀地分布于整个组织中,未能观察到胸腺小体。在胸腺的细胞类型上,首次发现了大量的交错突细胞,常与淋巴细胞相伴,其特点是具有大量的”迷路样”膜结构。同时还发现,牙鲆胸腺可以不对称并存在快速退化现象,在3月龄时最易观察,而6月龄以上的牙鲆即退化消失。     

Effects of CO2-induced ocean acidification on the growth of the larval olive flounder Paralichthys olivaceus

It widely thought that ocean acidification processes that caused by atmospheric CO₂ increase and accordingly lower seawater pH conditions might cause serious harm to marine food webs in certain ecosystems in the near future. Little is known about how marine fishes respond to reduced pH conditions. We investigated the effects of CO₂ conditions on the growth of olive flounder (Paralichthys olivaceus) larvae. Newly hatched larvae were reared at three different levels of pCO₂ (574, 988 and 1297 µatm) in temperature-controlled (21 ± 0.5°C) water tanks for four weeks until metamorphosis. The experiment was repeated three times in May, June, and July 2011, and body lengths and weights were measured at the completion of each experiment. The results indicated that the body length and weight of flounder larvae significantly increased with increasing CO₂ concentrations (P < 0.05). A higher daily growth rate during the early larval stage (hatching to 14 days) was found among the larvae reared in low pCO₂ conditions, while a significantly lower growth rate was found among larvae in higher pCO₂ water conditions. On the other hand, in the late larval stage (18 days after hatching to metamorphosis), the daily growth rate of larvae was much higher in high CO₂ water. Bone density of larvae, however, decreased with increasing CO₂ concentration in the water

     

Effects of Green Light on the Stress Response of Olive Flounder Paralichthys olivaceus under Clove Oil Anesthesia

Ocean Science Journal - Clove oil (CO) is an effective anesthetic. Many hatcheries and research studies use clove oil to immobilize fish for artificial reproduction and surgery to suppress their...     

褐牙鲆鳃丝Na+-K+-ATPase性质的研究

研究了褐牙鲆 (Paralichthysolivaceus)鳃丝Na K ATPase的性质。结果表明 :褐牙鲆鳃丝Na K ATPase活力随着反应温度、pH的增加均呈现峰值变化 ,其最适反应温度为 3 0～ 3 5℃ ,高于 40℃酶活力急剧下降 ,至 5 0℃酶失活 ,而最适pH为 7.5～ 8.0之间 ,pH <7.5或 >8.0时酶活力急剧下降 ,低于 6.0酶活则被完全抑制 ;在本试验设计的反应时间和底物浓度范围内 ,随着时间和底物浓度的增大 ,酶活力的变化均为逐渐升高 ,且上升趋势逐渐变缓 ;反应介质中Na ,K ,Mg2 的最适浓度分别为 180 ,3 0 ,6mmol/L ,并且当K 或Mg2 浓度为 0时 ,酶活力均接近于 0。抑制剂乌本苷对鳃丝Na K ATPase活力表现为显著性抑制 ,在乌本苷浓度为 2mmol/L时 ,酶活力完全被抑制。