应用卤虫新品系“OP1”提高遗传变异的研究

对孤雌生殖卤虫新品系“OP1”产生的罕见雄体与两性生殖卤虫雌体进行了杂交研究、同工酶分析和温度实验。结果表明杂交、自交和回交后代卤虫为两性生殖方式,后代中的雌雄比例约为1:1;杂交F₁代的四氮杂茂氧化酶(TO)表现出双亲间的杂交酶带,F₁代的碱性磷酸酶(ALP)表现了双亲间的中间过渡状态;两性卤虫雌雄个体间存在一定的酶谱差异。发现了为TO同工酶编码的孤雌等位基因和两性等位基因及其在杂交后代中的某些表达与调控。本项杂交实验能够显着提高遗传变异水平,为卤虫新品系的培育提供了一条新途径。     

“海孤1号”卤虫与杂交实验

报导我国一株罕见雄体出现率特别高的孤雌生殖卤虫“海孤1号”(OP1)。其罕见雄体出现率高于以往报导的10～20倍。利用这株卤虫的罕见雄体与两性生殖卤虫(A.sinica)的雌体进行杂交实验获得成功。     

卤虫杂交品系生化特性的初步研究

选择两性生殖品系（我国山西运城两性生殖品系）的雌体卤虫与孤雌生殖品系（天津塘沽品系）的雄体卤虫，于实验室内获得杂交品系，并对此杂交品系和其亲本品系进行生化特性的比较分析。①同工酶分析的结果表明：杂交F1代雌、雄个体和双亲品系雌、雄个体间的过氧化物酶表现基本相同；F1代的葡萄糖－6－磷酸脱氢酶表现出双亲间的过渡状态；F1代的肌浆蛋白酶带的数量、活性都高于亲本。②进一步对杂交F1代、山西运城两性生殖品系的氨基酸种类和含量做了比较分析，结果表明：杂交品系的氨基酸总含量明显高于其亲本，且含有单一亲本所不具有的氨基酸（如胱氨酸）组成。本实验结果显示，通过杂交手段可显著提高卤虫遗传变异水平，并且是选择高卤虫营养品系的手段之一。     

不同地理品系卤虫的同工酶变异初步研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对国内外不同生态地区的孤雌生殖和两性生殖卤虫进行了酯酶（ＥＳＴ）、四唑氧化酶（ＴＯ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）同工酶变异分析。指出不同地理品系卤虫有其独特的ＥＳＴ和ＴＯ标志酶带；孤雌生殖卤虫具有与两性生殖卤虫显著不同的ＴＯ基本带型和ＡＬＰ标志带区。这些结果为卤虫地理品系的纯度鉴定，以及两种生殖方式卤虫的分类和鉴别提供了生化指标。     

中国卤虫种群α—淀粉酶同工酶的基因表达特征

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法,对中国卤虫种群中２０个品系的α－淀粉酶（α－ＡＭＹ）同工酶基因的表达特征进行了分析。实验结果显示：Ａｒｔｅｍｉａｓｉｎｉｃａ和Ａ．ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａ各自有其独特的酶谱和基因型,Ａ．ｓｉｎｉｃａ的主要基因型为：０／ａｂ／ｂｂ和ａｂ／ａｂ／ａｂ,而Ａ．ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａ的主要基因型为０／ｂｂ／ａｂ和０／ｂｂ／ｂｂ,这可以作为区分两个种的重要生化指标;各品系间、品系内存在多态现象,并且平均杂合度值较高,与卤虫为了更好地适应不良的生活环境而积累大量有利基因和变异有关;从遗传距离和遗传相似系数可知Ａ．ｓｉｎｉｃａ和Ａ．ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａ有共同的祖先,两者分化时间大约在距今５７６万年至１００万年左右。     

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析方法对中国卤虫(Artemia)同工酶变异的研究

本文提出运用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,对我国山东半岛几个盐场中的卤虫的十一种同工酶变异进行分析。其中三种同工酶,乳酸脱氢酶(LDH),苹果酸脱氢酶(MDH),以及四唑氧化酶(TO),表现为多态酶,并且存在盐场内和盐场间的相对变异。该项技术将有助于基础科学的研究以及在水产养殖中用来筛选和辨别卤虫的不同品系。     

中国孤雌生殖和两性生殖卤虫关系的同工酶研究

本文分析了国内外不同地理品系卤虫的酯酶(EST)、四氮杂茂氧化酶(TO)和碱性磷酸酶(ALP)同工酶,根据各卤虫品系的遗传相似性聚类分析和酶谱表型分析,发现我国山西和新疆地区的两性生殖卤虫在遗传上是密切相关的,它们都属于中华卤虫Artemia sinica.我国不同地理品系的孤雌生殖卤虫存在显着的遗传分化;河北和大连地区的孤雌生殖卤虫与Artemia sinica遗传相关性密切,新疆地区的孤雌生殖卤虫则具有独特的酶谱表型,反映了我国孤雌生殖卤虫起源和进化的复杂性。孤雌生殖卤虫具有与两性生殖卤虫显着不同的ALP和TO酶谱表型,为孤雌生殖卤虫的纯度鉴定及其与两性生殖卤虫的分类和鉴别提供了生化指标。     

中国两性生殖卤虫各品系碱性磷酸酶、酸性磷酸酶同工酶基因的表达特征

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法 ,对中国两性生殖卤虫 Artemia sinica的 1 4个品系的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶同工酶基因的表达特征进行了分析 ,并与 Artemia urmiana的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶同工酶基因的表达特征进行了比较研究。结果表明 :中国两性生殖卤虫各品系的 ALP、 ACP同工酶的酶谱相同 ,均为单体酶。 ALP、 ACP同工酶分别由 ALP - 1、 ACP- 1 ,ALP- 2、ACP- 2 ,ALP- 3、ACP- 3三个基因座位编码 ,ALP- 1、ACP- 1座位存在a、 b两个共显性等位基因 ,ALP- 2、ACP- 2存在 a、b、c三个等位基因 ,ALP- 3、ACP- 3座位存在 a、b两个等位基因。共发现 7种基因型 :1 .0 / cc/ bb,2 .0 / bb/ bb,3.0 / aa/ aa,4.0 /ab/ aa,5.0 / ac/ ab,6.0 / ac/ aa,7.ab/ ab/ aa。仅在 A.urmiana中发现 0 / cc/ bb、 0 / bb/ bb基因型 ,而 A.sinica的主要基因型为 :0 / ac/ aa、 0 / ab/ aa、 0 / aa/ aa。仅 GN品系的 ALP - 1、 ACP- 1有基因座位表达。     

卤虫等位酶的遗传控制

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析了孤雌生殖卤虫产生的罕见雄体、两性卤虫及其杂交后代 (F1)的酯酶 (EST)、超氧物歧化酶 (SOD)、过氧化物酶 (PRX)、碱性磷酸酶 (AL P)、四唑氧化酶(TO)和乳酸脱氢酶 (L DH)的同工酶酶谱表型。对编码 5种酶的 19个位点、35个等位基因的表达进行了遗传分析。结果表明 ,在 EST、PRX和 TO酶谱中既有共显性等位基因 ,又有沉默等位基因的表达 ;卤虫 PRX、AL P和 SOD为单体酶 ,在 EST和 TO酶谱中还存在着二聚体同工酶 ;除 LDH为单态外 ,其余 5种同工酶为多态酶。     

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析方法对中国卤虫（Artemia）同工酶变异的研究

本文提出运用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，对我国山东半岛几个盐场中的卤虫的十一种同工酶变异进行分析。其中三种同工酶，乳酸脱氢酶(LDH)，苹果酸脱氢酶(MDH)，以及四唑氧化酶(TO)，表现为多态酶，并且存在盐场内和盐场间的相对变异。该项技术将有助于基础科学的研究以及在水产养殖中用来筛选和辨别卤虫的不同品系。     

卤虫（Artemia）“海孤一号”的基础生物学研究：1.存活与生长

本文对不同温盐条件下虫“海孤一号“的存活和生长情况进行了研究,结果表明：温、盐显著影响“海孤一号“的存活与生长,但温盐对存活的交互影响不显著。“海孤一号“的最适存活条件是温度２０－２５℃,盐度６０‰－１００‰,在不同温盐条件下,“海孤一号“的生长都经历了一个由慢到快再转慢的过程,Ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲线能很好地拟合生长曲线,并把生长过程分为第一慢速生长期、快速生长期和第二慢速生长期。     

无效基因fruitless参与卤虫Artemia franciscana的生殖调控研究

fruitless （fru）是在昆虫与甲壳动物求偶、交配行为以及生殖发育过程中发挥关键作用的基因。卤虫不仅是水产育苗的重要开口饲料,而且是生物学研究的重要实验生物。本实验通过对卤虫Artemia franciscana转录组的筛选,获得了fru基因的开放阅读框（ORF）并进行生物信息学分析,利用qPCR技术研究了它在卤虫生殖腺发育的不同阶段的表达情况,最后利用RNAi显微注射技术,深入探索了它的功能。经过生物信息学分析,fru基因的ORF长度为1 215 bp,其中包含了404个氨基酸,其分子量和等电点分别为45.19 kDa和5.28,属于酸性亲水性蛋白,且不含信号肽和跨膜结构;结构域预测显示fru存在BTB_POZ和HTH两个结构域,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷组成,三级结构与其对应。qPCR结果显示,fru基因的表达量在卵囊的晚期胚胎中表现出明显的增加趋势,其表达量显著高于其他发育阶段（P < 0.01）;而在精巢的未成熟期,fru基因的表达量也有所增加,其表达量显著高于成熟早期、中期和晚期（P < 0.01）。经过RNA干扰,我们发现fru基因的表达量有了显著的下降（P < 0.01）,并且经过受到干扰的雌虫后代都为休眠卵。这表明fru基因对于A. franciscana的生殖和发育有着重要的影响,甚至可能是影响卤虫繁殖方式的关键因素。通过本次研究,我们获得了关于fru基因在卤虫生殖发育中的作用及其相关分子机制的重要信息,可以帮助我们更好地理解这一重要的生物学过程。     

卤虫（Artemia）“海孤一号”的基础生物学研究：2.生殖与生命周期

本文对不同盐度条件下卤虫“海孤一号”的生殖及生命周期进行了观察和研究。结果表明：在较宽的盐度范围（３２％－１２０％）内卤虫都有很强的生殖能力,平均产后代７－１２次,每代１８０－２３０个,相邻两代间隔５．５－５．９天,同时存在生殖高峰期。在生殖参数中,产后代间隔时间最稳定,受盐度影响不显著。卤虫：海孤一号”在最适条件下,平均存活９０天,平均产后代约２０００个。     

我国不同产地卤虫生物学的初步研究

选用了孤雌生殖的4个卤虫品系,它们是山东埕口盐场(C),福建惠安盐场(H),青海柯柯盐湖(K),以及海南岛莺歌海盐场(Y)。对卤虫品系进行了染色体倍数的观察和温、盐度对生长、生殖的影响试验。并从养殖观点讨论了各品系的优劣。     

中国卤虫早期胚胎发育相关基因的研究——卤虫幼体trh基因的整体荧光原位杂交技术的建立

中国卤虫(Artemia sinica)是重要的饵料生物,是当前海洋生物学研究的热点生物和重要的生物模型。本文报告了卤虫无节幼体整体荧光原位杂交(WFISH,whole-mount fluorescent in situ hybridization)技术,用于快速对卤虫早期发育相关基因的特定时空表达图式进行分析,有助于对卤虫早期发育相关基因功能进行鉴定。人工合成带有FITC标记的卤虫trh基因(trachealess gene)寡核苷酸探针,检测到trh基因在卤虫无节幼体的头部背面盐腺中表达。     

秦皇岛海域“褐潮”海水对卤虫、轮虫存活和摄食的影响研究

为评价秦皇岛褐潮现场海水的毒性,作者利用HPLC技术及CHEMTAX,分析了2013年7月2日采自秦皇岛褐潮高峰期微型及微微型浮游植物的色素组成及群落结构;测定了卤虫(Artemia salina)、轮虫(Brachionus plicatilis)存活率和摄食量。研究表明,褐潮海水微型及微微型浮游植物中,海金藻(Pelagophyceae)占主要优势,其生物量占总生物量的72.6%。褐潮海水抑制卤虫存活,卤虫48 h存活率降至77%;对轮虫24 h存活没有显著效应。此外,褐潮海水抑制卤虫、轮虫的摄食,卤虫、轮虫8 h内摄食量分别由(5.5±0.4)ng/个降至(2.4±0.4)ng/个、由(1.5±0.2)ng/个下降至(0.9±0.1)ng/个。该结果与美国的3株褐潮藻的毒性进行了比较。CCMP 1507对卤虫存活有显著抑制作用,其他两株没有显著效应;3株褐潮藻对轮虫24 h存活都没有显著影响。暴露于3株褐潮藻中,卤虫的摄食量均显著较低;其中CCMP 1507在混合饵料中还抑制卤虫、轮虫对其他藻的摄食。对CCMP 1507各组分分析发现,该藻的毒性主要来源于藻细胞。结合现场试验与室内试验结果分析表明,秦皇岛褐潮对卤虫、轮虫有一定的毒性,其毒性与CCMP 1507的毒性相当。     

太空搭载诱变卤虫的孵化与生长研究

两种不同来源地的卤虫(Artemia sp.)卵经卫星搭载空间诱变返回地面后分别与地面对照组进行了孵化速度、孵化率、生长速度、存活率及怀卵量的比较试验.结果表明:国产卤虫搭载组孵化速度明显快于对照组,而孵化率、生长速度、存活率及怀卵量差异不显著;美国产卤虫搭载组与对照组孵化速度相差不大、存活率差异不显著,但搭载组孵化率和怀卵量均显著高于对照组,而生长速度低于对照组.实验结果表明,经空间诱变的卤虫在生长发育等方面与对照组相比具有明显的差异,空间诱变表现随机,诱变方向具有不确定性.     

3种海藻单一或混合投喂对卤虫的饵料效果研究

用亚心形扁藻、绿色巴夫藻、极大螺旋藻为基本饵料,以纯投单胞藻或单胞藻中添加螺旋藻的方式来培养卤虫。结果表明:不同饵料搭配养殖卤虫的效果差异明显。纯扁藻和绿色巴夫藻搭配扁藻的养殖效果比较理想,卤虫成活率高,生长快速,生殖力大。极大螺旋藻养殖效果差。     

卤虫繁殖机制的研究——Ⅰ.卵子发育过程中染色体的变化

本文以卤虫的生殖细胞卵子作为材料进行染色体标本制备,具体研究了卤虫卵子在发育过程中染色体的变化,探讨致使孤雌生殖卤虫染色体自然加倍的可能途径,以及两性生殖卤虫卵子发生受精的具体地点。     

凡纳滨对虾摄食诺氟沙星强化卤虫的药代动力学研究

应用高效液相色谱法研究了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)摄食诺氟沙星强化卤虫(Artemia)的药物代谢动力学。结果表明:强化4~8 h,卤虫体内的药物质量浓度达到最高,此后卤虫体内药物摄入和排除达到一个动态平衡;温度影响诺氟沙星在卤虫体内半衰期:体长3mm和6 mm的卤虫,在4,16,28℃时的半衰期分别为51.33,19.29,18.64 h和39.67,13.26,12.6 h。对虾摄食诺氟沙星强化的卤虫后,对虾组织中药物质量浓度经时过程符合一级吸收二室开放模型;投喂剂量对Tmax和Cmax影响较大,当对虾给药质量分数分别为800,400,200mg/kg时,肌肉中给药后出现最高血药的时间或达峰时间分别为0.403,0.540,0.481 h;肝胰脏中给药后出现最高血药的时间或达峰时间分别为0.826,1.839,1.469 h;肌肉中给药后的最高血药质量浓度分别为98.943,46.752,10.887 mg/L;肝胰脏中给药后的最高血药质量浓度分别为738.267,597.352,415.268 mg/L。药物在对虾肌肉的消除半衰期(约26.688 h)明显长于肝胰脏中消除半衰期(约13.988 h)。