甲硫氨酸脑啡肽对栉孔扇贝血淋巴中2种自由基的影响

用分光光度技术对甲硫氨酸脑啡肽(met-Enk)对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)血淋巴中自由基及其相关酶的影响进行了研究。结果表明,除了脑啡肽浓度为1μg/mL时血清和血细胞中过氧化氢酶(CAT)活力高于对照外,脑啡肽浓度分别为10和50μg/mL,作用时间分别为1,3和5h时,血清和血细胞中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、过氧化氢(H2O2)和CAT的含量或活力均低于对照;随着脑啡肽浓度的升高,其含量或活力均呈下降趋势。说明脑啡肽对栉孔扇贝血淋巴中的自由基NO和H2O2及其相关酶的含量或活力起副调节(抑制)作用。相同的脑啡肽浓度下,随着作用时间的延长,其含量或活力又有所回升。说明栉孔扇贝血淋巴中可能存在脑啡肽的拮抗物质。脑啡肽可能在栉孔扇贝的免疫调节中发挥重要的作用。     

栉孔扇贝血淋巴中超氧化物歧化酶和过氧化氨酶活性及其性质的研究

于１９９７年１０月－１９９８年１月,从胶州湾贝类养殖场购买栉孔扇贝,分别采用邻苯三酚自氧化法和过氧化氢法测定了其血细胞和血清中的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）的活力,并对ＳＯＤ类型的鉴别区分、ＳＯＤ和ＣＡＴ的热稳定性以及温度对ＳＯＤ和ＣＡＴ活力的影响进行研究。结果表明,血细胞中ＳＯＤ和 ＣＡＴ活力分别为３１２．７Ｕ和 １２４．４Ｕ,血清中ＳＯＤ和ＣＡＴ活力分别为１０２．３Ｕ和７３．８Ｕ;冻存１０ｄ后,血清中ＳＯＤ的活力丧失２４．６％,而ＣＡＴ的活力丧失４０．８％;血细胞中ＣｕＺｎ－ＳＯＤ和Ｍｎ－ＳＯＤ的活力分别为１９３．４Ｕ和８２．３Ｕ,血清中仅存在ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性;血清中ＳＯＤ的热稳定性很高,在８０℃下保温３０ｍｉｎ后,酶活力仍很高,而ＣＡＴ的热稳定性较低;血清中的ＳＯＤ和ＣＡＴ的最适温度分别为５０℃和４５℃。     

栉孔扇贝血淋巴中谷胱甘肽还原酶的活性研究

用酶标仪采用DTNB比色法测定栉孔扇贝(Chlamys farreri)血淋巴中谷胱甘肽还原酶(GR)的活性,并研究pH值、温度、激活剂和抑制剂对血清中该酶活性的影响及酶的热稳定性。结果表明,栉孔扇贝血细胞中GR比活力明显高于血清。血清中GR的最适pH值因缓冲液的不同而稍有差异:用PBS为缓冲液时,最适pH值为7.0;Tris-HCl为缓冲液时,最适pH值为7.5。酶的最适温度为60℃。将血清在20℃,30℃,40℃,50℃,60℃,70℃和80℃温度的水浴中放置30min后于20℃,pH7.5条件下测定该酶的热稳定性,结果显示50℃时酶的比活力最高,低于或高于此温度的酶比活力均下降,80℃时酶活性完全丧失。栉孔扇贝血淋巴中GR属中温型中性酶类,低温下较稳定。EDTA对该酶活性有促进作用,硫酸铜有抑制作用。     

大肠杆菌感染后栉孔扇贝血淋巴中7种酶活力的变化

于１９９８年１１月对栉孔扇贝注射大肠杆菌,分别于１,１５,３０ｈ测定了栉孔扇贝血清和血名参与免疫防御的水解,氧化和氧化酶的活力。表明,大肠杆菌激发后,血清实验组的ＡＣＰ活力在１ｈ 于对照组,１５ｈ和３０ｈ时极显著地高于对照组     

栉孔扇贝血淋巴中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性及其性质的研究

于１９９７年１０月－－１９９８年１月,从胶州湾贝类养殖场购买栉孔扇贝,分别采用邻苯三酚自氧化和过氧化氢法测定了其血细胞和血清中的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）的活力,并对ＳＯＤ类型的鉴别区分、ＳＯＤ和ＣＡＴ的热稳定性以及温度对ＳＯＤ和ＣＡＴ活力的影响进行研究。结果表明,血细胞中ＳＯＤ和ＣＡＴ活力分别为３１２．７Ｕ１２４．４Ｕ,血清中ＳＯＤ和ＣＡＴ活力分别为１０２．３Ｕ和７３．８Ｕ;     

硒化壳聚糖对栉孔扇贝血细胞中部分免疫因子的影响

取人工养殖栉孔扇贝(Chlamys farreri)的血淋巴,体外加入不同浓度的硒化壳聚糖,作用1h后采用生化方法分别测定栉孔扇贝血细胞中的髓性过氧化物酶(MPO)和非特异性酯酶(NSE)的活力,以及过氧化氢(H2O2)和活性氧的含量。结果表明:加入硒化壳聚糖后,栉孔扇贝血细胞中依赖卤素的MPO、不依赖卤素的MPO、α-醋酸萘酯酶和α-丁酸萘酯酶的活力均为实验组显著高于对照组,过氧化氢和活性氧的含量也为实验组显著高于对照组。说明硒化壳聚糖对栉孔扇贝血淋巴中多种参与免疫防御的酶的活力和具有杀菌作用的免疫因子的含量均具有明显的提高作用,因而硒化壳聚糖对栉孔扇贝的免疫功能具有明显的增强作用。     

栉孔扇贝(Chlamys farreri)血淋巴中一氧化氮和一氧化氮合酶的研究

采用组织化学、免疫组化和生物化学方法对栉孔扇贝血淋巴中的一氧化氮和一氧化氮合酶(EC1．14．13．39；NOS)进行了研究。结果表明，大部分血细胞呈NOS组化阳性，少量呈强阳性或弱阳性。神经型一氧化氮合酶(nNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在大部分血细胞呈阳性，且多在其细胞质局部集中分布；诱生型一氧化氮合酶(iNOS)在大部分血细胞也呈阳性，但多较均匀分布。分光光度测定结果表明，血清和血细胞中均存在NOS和NO，结构型一氧化氮合酶(cNOS，nNOS eNOS)活力分别为2．87U和2．61U；iNOS活力分别为0．32U和0．45U；NO的含量分别为：33．64和41．67μmol／g蛋白。病毒感染后，血清和血细胞中总一氧化氮合酶(tNOS)活力实验组均高于对照组，3h时差异显著，9h和24h时差异极显著；血清和血细胞中iNOS活力在3h、9h和24h时，实验组均高于对照组，且均差异极显著；血清和血细胞中NO含量在3h、9h和24h时，实验组也均高于对照组，且均差异极显著。栉孔扇贝血淋巴中存在的NO-NOS体系可在抵抗病原生物感染方面发挥重要的作用。     

环境因子对栉孔扇贝血淋巴中谷胱甘肽转硫酶活性的影响

采用分光光度法研究了环境因子对栉孔扇贝（Chlamys farreri）血淋巴中谷胱甘肽转硫酶（GST）活性的影响。结果表明,血清和血细胞中都存在GST,且血细胞中酶活力高于血清。血细胞中GST的适宜温度范围是20～35℃,最适温度为30℃,在60℃时酶活力完全丧失。该酶的适宜pH为7—8,最适pH为7．5。将血细胞裂...     

脂多糖对栉孔扇贝血清和血细胞中7种酶活力的影响

实验于１９９８年１￣１０月进行。栉孔扇贝注射脂多糖后,分别于１,１５和３０ｈ测定了其血清和血细胞中７种参与免疫防御的水解酶、氧化酶和抗氧化酶的活力。结果表明,血清实验组的酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活力在１,１５和３０ｈ时,血细胞实验组在１ｈ时显著高于对照组。血清和血细胞实验组的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活力仅在１ｈ时,溶菌酶活力分别在１ｈ和１５ｈ时显著高于对照组。血细胞中无酚氧化酶（ＰＯ）活性。血清实验组的Ｐ     

温度骤变对栉孔扇贝全血细胞和颗粒血细胞数量的影响

血细胞及其亚群的数量是栉孔扇贝(Chlamys farreri)的重要免疫指标之一。本文研究了栉孔扇贝在17℃下,分别经水温突变(11、23和28℃)和不同温度(5、11、17和23℃)干露处理后,应用以抗栉孔扇贝全血细胞单抗和颗粒血细胞单抗分别为第一抗体的间接酶联免疫吸附实验和流式细胞术测定全血细胞数量、颗粒血细胞数量及比例的变化。结果表明:水温骤变全血细胞和颗粒血细胞数量变化显著,全血细胞数量11、23℃组均先升高后逐渐趋于对照组,28℃组一直显著低于对照组;颗粒血细胞数量及其比例11℃组显著增加并始终高于对照组,23℃组显著降低后逐渐恢复至对照水平,28℃组始终低于对照水平。不同温度干露后,全血细胞和颗粒血细胞数量均显著降低,海水恢复后,5℃组较11、17℃组更接近对照组,23℃组干露12h扇贝全部死亡。研究表明:全血细胞及颗粒血细胞数量对温度变化的反应敏感;较低水温有利于细胞数量的提升,较高水温下细胞数量下降显著;低温干露后细胞数量恢复较好,高温干露扇贝存活率差。     

栉孔扇贝血细胞的显微和超微结构

通过光镜、扫描电镜和透射电镜观察栉孔扇贝Chlamys farreri血细胞的形态、结构特征,对其分类进行了初步研究。根据细胞的大小、形态和结构特征可将血细胞分成5种类型:Ⅰ型小透明细胞,大小约2.44±0.11μm,约占45%—50%;Ⅱ型大透明细胞,大小约4.83±0.28μm,约占15%—20%;Ⅲ型小颗粒细胞,大小约4.07±0.15μm,约占15%—20%;Ⅳ型中颗粒细胞,大小约7.20±0.26μm,约占20%—25%和Ⅴ型大颗粒细胞,大小约13.87±0.73μm,约占3%—5%。血细胞在血淋巴中的平均密度为(3.03±0.11)×107cell.ml—1,其中颗粒细胞占42.6%,透明细胞占57.4%。透射电镜观察结果表明,颗粒细胞的细胞质颗粒可区分成3种类型:Ⅰ型高电子密度颗粒,Ⅱ型低电子密度颗粒和Ⅲ型中等电子密度颗粒。     

硝酸氮对栉孔扇贝幼虫影响的研究

作者于1986～1989年研究了营养盐的变化对栉孔扇贝幼虫的影响,结果表明,培育海水中硝酸氮(NO_3-N)、亚硝酸氮(NO_2-N)、铵氮(NH_4-N)和磷酸盐(PO_4-P)等项指标中,硝     

紫色无硫细菌对栉孔扇贝幼虫生长发育的影响

于１９９１年，以栉孔扇贝幼虫为材料，用１０００ｍｌ烧杯模拟育菌现场条件，进行光合细菌作为饵料添加剂的试验。分析表明，光合细菌中含粗蛋白６２．３％；１８种氨基酸的总量为５１．２４％；维生素Ｂ１，Ｂ２，Ｂ１２含量分别为０．０１０６５％，０．００９３８８％，０．００２６４％；脂类和其他生理活性物质。生长试验结果表明，在开始的１２ｄ，在补充Ｒｐｓ ｓｐ，５０ｍｇ／Ｌ和１００ｍｇ／Ｌ时，幼虫平均增长率分别为     

壬基酚对栉孔扇贝组织抗氧化酶活性的影响

研究不同浓度的壬基酚(0.05,0.10,0.20,0.40,0.80,1.60mg/L)对扇贝组织超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响。试验进行6h,24h和48h后,分别测定扇贝鳃和消化盲囊组织中2种酶的活性。结果显示:①鳃组织中,0.05,0.10和0.20mg/L处理组中的SOD和CAT活性在试验6h后被轻度激活,24h和48h后出现抑制;0.40,0.80和1.60mg/L处理组的酶活性在整个试验过程中均被抑制。②消化盲囊中,0.05和0.10mg/L处理组中的SOD和CAT活性在试验6h后被轻度激活,24h和48h后被抑制;0.40,0.80和1.60mg/L处理组在整个试验过程中均被抑制。③扇贝消化盲囊组织中的SOD和CAT活性均高于鳃组织,对壬基酚的敏感性也高于后者。④扇贝消化盲囊和鳃组织中的SOD和CAT活性对壬基酚的反应变化趋势相似,二者结合,可以作为壬基酚污染的生物标志物。     

硒对华贵栉孔扇贝碱性磷酸酶的酶动力学及理化性质研究

探讨了微量硒(Se~(4+))对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis(Reeve))碱性磷酸酶(AKP)的作用。以催化动力学原理研究了不同缓冲系统中微量硒时AKP的影响。结果表明,Se~(4+)对谈酶的作用与酶所处的环境有关。在0.05 mol/L Na_2CO_3-NaHCO_3(pH 9.0)缓冲溶液中Se~(4+)浓度小于12.5 mmol/L时呈现出激活作用;Se~(4+)浓度大于12.5 mmol/L时呈现出非竞争性的抑制作用,其抑制常数为6.81×10~(-2)mol/L。在0.05 mol/L Tris-HCl缓冲系统(pH 9.0)中,微量Se~(4+)对AKP具有强烈竞争性抑制作用,其抑制常数为3.79×10~(-1)mol/L。经紫外吸收光谱、荧光发射光谱和圆二色谱的实验表明,微量Se~(4+)与AKP作用后,该酶的构象已发生了变化。研究发现海水环境中若含有微量Se~(4+)(SeO_3~(2-)),可以促进扇贝AKP的水解。利于贝类的生长发育和外壳的形成,并有益于贝类的繁殖。     

栉孔扇贝不同组织SOD、CAT和MPO活力的比较分析

对2龄和3龄栉孔扇贝外套膜、鳃、消化盲囊、肾、闭壳肌、性腺组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和髓过氧化物酶(MPO)活力分析表明,检测组织均存在这三种酶,且在不同组织中活力表现存在明显差别,其中肾组织SOD、CAT活力最高,而MPO在消化盲囊中表现最高活力,与其它组织相比均呈显著性差异(P＜0.05).不同贝龄的栉孔扇贝酶活力比较表明,三龄贝各组织SOD、CAT和MPO活力均高于二龄贝.     

栉孔扇贝对硅藻和甲藻细胞的选择性摄食初探

硅、甲藻类是浮游植物中的2个主要功能类群,传统上认为硅藻类是贝类的主要饵料.通过饲喂单种和混合藻液实验初步研究了栉孔扇贝对我国近海硅藻(中肋骨条藻和小角毛藻)、甲藻(东海原甲藻)常见种的摄食选择性.实验结果表明栉孔扇贝对东海原甲藻的摄食率和摄食选择效率均高于2种硅藻,即,相比2种硅藻,栉孔扇贝更倾向选择摄食东海原甲藻.这与传统认识有异,提示需进一步全面认识甲藻类群在海洋生态系统中的功能定位.     

脑啡肽对栉孔扇贝血细胞聚集和附贴的影响

用质量浓度为2,5和25mg/L的脑啡肽对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)血细胞聚集和附贴的影响进行了研究。结果表明质量浓度为2~25mg/L的脑啡肽均抑制血细胞的聚集,并且随着脑啡肽质量浓度的升高,对血细胞聚集的抑制作用加强。2mg/L的脑啡肽促进血细胞的附贴,5mg/L和25mg/L的脑啡肽抑制血细胞的附贴。实验证明脑啡肽对栉孔扇贝的免疫调节有重要作用。     

石油烃暴露对栉孔扇贝组织Wnt4基因表达的影响

采用荧光定量PCR的方法测定了不同浓度石油烃暴露下栉孔扇贝各组织Wnt4基因相对表达量的变化,结果表明,栉孔扇贝各组织Wnt4基因表达量在不同浓度石油烃影响下变化程度具有明显差异,对照组表达量大小顺序为精巢>卵巢>鳃丝>消化盲囊;在浓度为0.1mg·L^-1石油烃影响下,除鳃丝Wnt4基因表达量有上升趋势之外,其余各组织均无显著变化(P>0.05);而在0.3mg·L^-1及以上石油烃浓度组,四种组织Wnt4基因表达量随暴露时间均出现明显上升或者被抑制的现象(P<0.05),各组织Wnt4基因被激活和被抑制的时间和程度均有不同,受石油烃暴露影响的程度为鳃丝>卵巢>精巢>消化盲囊。本研究认为0.3mg·L-1及以上浓度石油烃暴露对栉孔扇贝各组织特别是鳃丝Wnt4基因表达量的影响较大,对栉孔扇贝的生长发育影响明显;各组织Wnt4基因表达量在不同浓度石油烃的影响下呈现一定的规律性,其变化跟各组织解毒指标的变化具有一定相似性,是较好的反映栉孔扇贝在石油烃暴露下其生长发育变化程度的生物学指标。