RAPD标记鉴别红鳍东方Tun笔假晴东方Tun种群的初步研究

用ＲＡＰＤ技术对东方Ｔｕｎ属的红鳍东方Ｔｕｎ和假晴东方Ｔｕｎ共三个群体进行分析,经２０个随机引物扩增,得到每一个体的多态片段。比较所有图谱,没有发现能够鉴别三个群体的特异性谱带,而且采自日本的红鳍东方Ｔｕｎ与采自中国的东鳍东方钝的电泳图谱基本相似。     

渤海莱州湾红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)×假睛东方鲀(Takifugu pseudommus)天然杂交种一例

记述了１９９８年５月莱州湾中采得的东方（Ｔａｋｉｆｕｇｕ）标本中的２尾个体,其形态特征介于红鳍东方（Ｔａｋｉｆｕｇｕｒｕｂｒｉｐｅｓ）和假睛东方（Ｔａｋｉｆｕｇｕｐｓｅｕｄｏｍｍｕｓ）之间,经比较分析认定其为该两近缘种的天然杂交种     

红鳍东方鲀人工育苗技术的初步研究

1996年从日本引进3kg（约180万粒）红鳍东方受精卵，在福建省宁德市进行人工育苗技术研究。孵出仔鱼70万尾，孵化率38．9％，培育出平均全长2．99cm的幼鱼18．5万尾，育苗成活率26．4％，并对人工育苗的关键技术进行了探讨。     

红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)耐低温相关微卫星标记的初步筛选

采用微卫星结合混合群体分离分析法技术（SSR-BSA）对红鳍东方鲀群体进行耐低温相关微卫星标记的筛选。首先对300尾红鳍东方鲀幼鱼进行低温处理,分别获得34尾耐低温（S组）和不耐低温个体（D组）。分别在两组中随机挑选15尾提取基因组DNA,构建耐低温和不耐低温DNA混池,然后用148对微卫星引物对其进行扫描。结果发现4个标记（fms45、fms82、fms100和fms182）在耐低温和不耐低温DNA混池中扩增出差异条带。用S组和D组全部个体对4个标记进行单个体验证,结果显示由fms100扩增,携带有116 bp条带的个体在S组和D组的出现频率分别是53%和18%,132 bp条带的出现频率分别是59%（S组）、24%（D组）;由fms182扩增,携带有125 bp的个体在S组和D组出现的频率分别是12%和35%,经卡方检验P值均小于0.05,差异显著。本文关于红鳍东方鲀耐低温分子标记的报道,为研究红鳍东方鲀耐低温的遗传基础以及相关分子机制提供了依据,也为开展红鳍东方鲀耐低温分子标记辅助选育提供了良好的基础。     

红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)性别差异微卫星标记的筛选

采用以BSA为基础的微卫星标记技术对红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)雌、雄群体进行性别差异标记筛选的研究。用雌、雄各30个个体构建雌、雄基因池,利用66对微卫星引物扫描雌、雄基因池。在雌、雄基因池中扩增出差异条带的引物有8对。用两个各包括30个雌、雄个体的群体对这8对引物进行两轮个体验证。结果表明,引物f383在两个雌、雄群体中扩增出的差异条带与性别都呈极显著相关性(r分别为0.710和0.673)(P0.01),f383是与红鳍东方鲀雄性呈正相关的微卫星标记。红鳍东方鲀性别差异微卫星标记的获得,为其性别相关基因的克隆和性别决定机制的研究提供理论基础。     

红鳍东方鲀精子形态的研究

实验研究红鳍东方精子形态的超微结构：红鳍东方精子分头部和尾部等两部分。头部似炮弹状,无顶体;核内有空隙,空隙中有或无少量电子致密小颗粒;细胞膜与核膜间的原生质有向外鼓起的单个小液泡;中心粒复合体位于植入窝内,由近端中心粒、中心粒间体和基体等组成。袖套位于核后端,内含７～８个环列的线粒体球。尾部近核端部分鞭毛的一侧有小囊泡群聚的囊泡鞘;远核端部分有侧鳍;囊泡鞘和侧鳍与轴丝的中央微管同在“Ｙ”轴上;轴丝为“９＋２”结构。     

红鳍东方鲀基因组微卫星特征分析

对河豚基因组微卫星分布特征进行研究,在约365Mb基因组序列中共找到49647个微卫星序列,平均每隔7351个碱基就有1个。微卫星序列长度主要分布在20～60个碱基的长度范围内。全部微卫星序列重复区长度（2802374bp）占整个基因组的比例为0．77％。两碱基重复类型数目最多,为35339个,占总数的71．30％;其次是四碱基类型,6837个,占13．77％;再次分别是三碱基类型3548个,占7．1496。五碱基类型1856个,占3．73％,六碱基类型1605个,占3．23％,单碱基类型最少,共402个。占0．80％。按降序排列,出现最多的前20个微卫星重复类别为：CA,TG,GT,AC,GA,CT,TC,TA．AG,AT,TCCA,ATCC,TCTG,GATG,ATCT,CATC,TGGA,ATGG,GATA,GAG,占全部微卫星序列的75．21％。在河豚基因组中未发现CC微卫星序列的存在。与其它生物基因组中微卫星分布特征相比,河豚基因组具有更高的简洁性。本研究将为研究河豚微卫星标记、研究其群体遗传多样性,进行不同基因组的比较研究提供基础。     

红鳍东方鲀幼鱼消化道的组织学和形态学研究

采用光镜和电镜技术对红鳍东方幼鱼消化道进行了组织学与形态学研究。红鳍东方消化道组织基本上分为粘膜层、粘膜下层、肌肉层和浆膜四层。口咽腔和食道前部表面被覆复层扁平上皮细胞 ,有杯状细胞、粘液细胞和味蕾分布。食道后部、胃、小肠和直肠的粘膜上皮由单层柱状上皮构成。胃 J型 ,没有胃腺存在 ,但发现有一种特殊的分泌细胞。小肠前部纵行粘膜褶发达 ,Z型 ,而后部粘膜褶不发达 ;直肠粘膜褶也很发达 ,为单个的乳头状突起。在食道与胃、胃与小肠、小肠与直肠之间均有括约肌。     

皱纹盘鲍中国群体和日本群体的自交与杂交F1 的RAPD 标记

利用皱纹盘鲍中国群体和日本群体野生个体的单自交和单正反杂交获得了 4个F1家系 ,其中家系AJC、BCC、CCJ、DJJ分别为日本♀×中国♂、中国♀×中国♂、中国♀×日本♂和日本♀×日本♂组合 ,采用 2 2个引物对上述四个家系及其各自亲本个体的遗传结构进行了RAPD分析。结果表明 ,四个家系的平均杂合度 :AJC为 0 .2 32 9,BCC为 0 .1 667,CCJ为 0 .1 773,DJJ为 0 .1 649;各家系两亲本间遗传距离 :AJC为 0 .2 4 62 ,BCC为 0 .1 70 1 ,CCJ为 0 .2 1 0 9,DJJ为 0 .1 688。各家系子代群体与父母本的遗传距离 :AJC为 0 .1 772和 0 .2 2 2 4 ,BCC为 0 .1 1 81和 0 .1 92 0 ,CCJ为0 .1 1 2 3和 0 .1 691 ,DJJ为 0 .0 694和 0 .1 947。各家系子代个体间的遗传距离AJC为 0 .0 976,BCC为0 .0 95 1 ,CCJ为 0 .0 699,DJJ为 0 .0 682 ,而子代各群体间遗传距离均小于 0 .0 2 2 0。     

栉孔扇贝(Chlamys farreri)自然群体遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD技术对栉孔扇贝(Chlamysfarreri)的四个自然群体(大连、烟台、青岛、韩国)的遗传多样性进行了分析。12个随机引物在四个群体中共检测到123个位点,其中多态位点109个,多态位点比例为88.62%;四个群体中均未检测到各群体特有的扩增带。韩国、烟台、大连、青岛四个群体的遗传多样性指数(Shannon指数)分别为0.2557、0.2557、0.2344和0.2249,以韩国和烟台群体遗传多样性较高,其次为大连群体,青岛群体最低,但它们之间无明显差异。不同群体的遗传多样性指数的平均数Hpop为0.2427,整个栉孔扇贝自然群体的遗传多样性指数Hsp为0.2503。遗传多样性剖分显示,绝大多数(97%)的遗传多样性是由群体内不同个体间的差异造成的,只有很小部分(3%)的遗传多样性与群体间的遗传分化有关。而采用基于单倍型(等位基因)之间的进化距离的AMOVA分析得到的这两个数据则分别为99%和1%,Φ值为0.010,且P=0.05,表明群体间遗传分化明显程度位于临界值。     

凡纳对虾优良性状遗传标记的筛选

凡纳对虾(Litopenaeus vannamei)是全球三大养殖对虾名优种类之一。我国从1988年开始试养，到1998年大量引进凡纳对虾亲虾和幼体后，华南地区兴起了养殖热潮。在1999年到2000年短短两年时间内，广东、海南、广西凡纳对虾的养殖面积已达10×104亩(1亩=666.7m2)，集约化防病养殖产量普遍达到5~9t/hm2，年产量高达10~20t/hm2，其养殖面积约占华南地区对虾养殖面积的60%，普遍获得了比养殖斑节对虾更好的经济效益，成为我国继中国对虾、斑节对虾之后的又一养殖对虾种类。从凡纳对虾养殖业的长远发展战略来看，如何避免斑节对虾因病害而造成养殖业全面萎缩的情况在凡纳对虾养殖业中重演已成为重要研究内容。 美国夏威夷海洋硏究所等单位利用遗传标记辅助选育种技术进行凡纳对虾良种选育和家系培养取得了很大的成效，培育出世界著名的无特异病原(SPF)凡纳对虾亲虾，在全球对虾养殖产量下滑的形势下仍然保持良好的增长趋势，其关键是种虾的选择和家系的培育。 Garcia等(1994)利用遗传标记技术进行了凡纳对虾种群的遗传标记研究，发现种群之间具有较高水平的遗传变异，因而有潜力进行凡纳对虾良种的人工选育。 本研究利用RAPD标记技术，对目前养殖凡纳对虾不同群体进行DNA多态性研究，筛选与优良性状有关的遗传标记，为凡纳对虾优质种苗的鉴定、选育和今后遗传标记辅助选育种提供了科学依据。     

利用RAPD和AFLP标记初步构建太平洋牡蛎的遗传连锁图谱

利用RAPD和AFLP标记 ,以一回交家系 [(Miyagi×Hiroshima)×Miyagi]为作图群体 ,构建了太平洋牡蛎的遗传连锁图谱。用经过筛选的 3 3个RAPD引物和 1 1个AFLP引物组合 ,对父母本和 80个子代个体进行了遗传分析。共得到母本分离标记 1 93个 ,其中 1 44个符合1∶1孟德尔分离规律。父本分离标记 1 5 6个 ,其中 1 1 1个符合 1∶1孟德尔分离规律。雌性框架图包括 99个遗传标记 ,定位在 1 2个连锁群中 ,覆盖 985 2cM ,标记间平均间隔 1 1 3cM。另外有 3个三联体 ,7个连锁对 ,图谱共覆盖 1 1 6 5 7cM。雄性框架图包括 72个遗传标记 ,分布在 8个连锁群 ,覆盖 81 1cM ,标记间平均间隔 1 2 7cM。另外有 4个三联体 ,3个连锁对 ,图谱共覆盖93 1 8cM。     

凡纳对虾、细角对虾和斑节对虾的RAPD鉴定标记

采用随机引物扩增DNA多态性（RAPD）技术分析比较了凡纳对虾，细角对虾和斑节对虾的分子标记。研究结果发现有3条引物（OPX－12，OPX－14和OPX－17）可扩增出重复稳定的图谱；3种对虾各有特定的RAPD标记：凡纳对虾有OPX－14^0940,OPX-17^1080,OPX-12^0760，细角对虾有OPX－14^1350,OPX-17^0850,OPX-12^1490，斑节对虾有OPX-14^0690,OPX-17^2260,OPX-12^0810。这些可作为3种对虾的鉴定标记。     

中华鲟随机扩增多态性DNA及遗传多样性研究

采用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术进行了连续３年（１９９５－１９９７）共７０尾来源于长江水系中华鲟样本遗传分析,共用了４０个１０ｂｐ长的随机引物,在２６种可供分析的引物中,只有ＯＰＫ０１、ＯＰＫ０２、ＯＰＫ０３、ＯＰＫ０９、ＯＰＫ１４和ＯＰＱ０８ＲＡＰＤ－ＰＣＲ产物有多态现象,多态引物占２３％。２６个引物中共扩增出１０８条稳定的ＤＮＡ带。其中１２条带为多态带,多态座位比例为１１．１％。个体间     

六种海产虾类基因组DNA多态性的RAPD标记研究

于１９９６年１０月在青岛胶州湾附近海域采集中国对虾,细巧仿对虾,周氏新对虾,鹰爪虾,脊尾白虾和脊腹褐虾等６种不同科或不同属的海产虾类,用ＲＡＰＤ技术对其基因组ＤＮＡ的多态性进行了研究。在事先优化的反应条件下,经２０个随机引物扩增,共得到２８２条多态性片段,片段长度在２３０￣２８００ｂｐ之间,根据扩增片段的共享度计算出相对遗传距离指数,然后用ＵＰＧＭＡ和ＮＪ程序进行聚类分析,结果所显示的６种虾的亲缘     

中华鳖(Pelodiscus sinensis)EST-SSR标记与生长性状相关性分析

采用中华鳖转录组测序方法开发了一系列EST-SSR引物, 对60 只中华鳖(Pelodiscus sinensis)的遗传多样性和标记-性状相关性进行研究, 结果表明, 15 对EST-SSR引物扩增结果达到了高度多态水平, 平均的有效等位基因数、期望杂合度和多态性信息含量分别为2.7633、0.5961 和0.539177。C8387位点分别与体长、体重、背甲长和裙边宽显著相关(P<0.05)和极显著相关(P<0.01), CC型、AB型分别为4种性状的优势、劣势基因型; C211位点分别与体重、背甲长和裙边宽呈极显著相关(P<0.01)和显著相关(P<0.05), 其中等位基因C与体重呈负相关, CC 型是裙边宽、背甲长性状的劣势基因型, 而BB型和AB型分别是裙边宽和体重的优势基因型; C5670位点与体重和背甲长分 别呈极显著相关(P<0.01)和显著相关(P<0.05), 其中BB型和AA型分别是体重和背甲长的优势、劣势基因型; C1312 和C13038位点均与体重、背甲长极显著相关(P<0.01), 且C1312上的BC型、C13038上的BB型分别是中华鳖体重、背甲长性状的优势基因型。     

许氏平鲉(Sebastes schlegeli)微卫星标记开发及野生、养殖群体遗传多样性分析

对许氏平鲉进行简化基因组测序,设计微卫星引物200对,可稳定扩增的引物190对,占95%。利用一个荣成野生群体对24个多态性较高的微卫星标记进行了评价,每个位点的等位基因数(Na)为2—21个,观测杂合度(Ho)为0.0417—0.9167,期望杂合度(He)为0.0278—0.9722,多态信息含量(PIC)为0.1948—0.9496,结果显示有20个微卫星位点为中高度多态。利用这些引物对荣成野生群体和烟台养殖群体的遗传多样性进行了比较分析,野生和养殖群体的平均等位基因数(Na)分别为8.5000、6.9583,有效等位基因数(Ne)的均值分别为4.5484、3.6365,期望杂合度(He)均值分别为0.6421、0.5840,多态信息含量均值(PIC)分别为0.6088、0.5490,平均香农-威纳指数均值为1.4605、1.2834,但F检验发现无显著差异,发现两个群体的遗传多样性都处于高度多态水平,但养殖群体遗传多样性水平低于野生群体。本研究结果说明许氏平鲉的人工繁育中,通过使用较大数量的亲本进行繁育可有效防止选育群体的遗传多样性降低,但人工定向选育对选育群体的遗传多样性也产生了一定的影响。Bonferroni校正后在两个群体中各有4个位点偏离Hardy-Weinberg平衡。本研究开发的微卫星标记为许氏平鲉遗传图谱构建、分子标记辅助育种等提供了更多标记选择,对野生和养殖群体遗传多样性分析为下一步的遗传育种提供参考。     

长江、黄河和辽河水系中华绒螯蟹野生和养殖群体遗传变异的微卫星分析

我国中华绒螯蟹(以下简称河蟹)养殖主要集中在长江、黄河和辽河流域,经过多年的人工养殖、跨流域引种和增殖放流等活动可能会对其遗传特性造成一定的影响,因此本研究利用29个微卫星标记对3个水系的野生和养殖群体进行了遗传特征分析。结果表明:(1)6个群体均表现出较高的遗传杂合度水平(Ho=0.702—0.744),香农信息指数(I)显示6群体的遗传多样性水平依次为:长江野生长江养殖黄河野生辽河养殖黄河养殖辽河野生。(2)分子方差分析(AMOVA)结果显示,来源于种群内个体间和个体内部的变异分别为14.02%和85.88%,群体间的遗传分化处于较低水平(FST0.05);(3)瓶颈效应和遗传结构分析显示,所有群体近期均经历过有效种群的降低,且6种群内个体的遗传组成混杂。综上所述,三水系野生和养殖群体均具有较高的遗传多样性,长江和黄河野生群体的遗传多样性略高于养殖群体;三水系河蟹野生群体的遗传分化与地理距离具有一定的相关性,长江养殖群体、黄河野生及养殖群体间的遗传分化较小可能与其跨流域引种及养殖群体逃逸造成其种质混杂有关。