弓背青鳉3种雌激素受体基因的克隆及其表达分析

【目的】克隆弓背青鳉(Oryzias curvinotus)雌激素受体基因(Estrogen receptor, er),分析在组织、胚胎发育时期中表达特征和雌二醇暴露后表达响应,为探究er介导雌激素调控机制提供理论依据。【方法】通过弓背青鳉肝脏转录组数据筛选进行er序列扩增,实时定量PCR(RT-q PCR)检测不同组织、不同胚胎发育时期和雌二醇暴露后的er表达量。【结果】3种ocuerα/erβ1/erβ2的编码区序列分别为1 860 bp、1 689 bp和2 007 bp,编码氨基酸个数相应为619、562和688。定量结果显示,3种er主要在肝脏和性腺高表达。胚胎发育过程中,ocuerα在卵裂期至囊胚期表达量低,在囊胚期后表达量逐渐上升持续到孵化;2种ocuerβ亚型均在胚胎发育初期有较高表达,随后ocuerβ1在原肠胚后开始降低,ocuerβ2在囊胚期后开始降低,在器官发育后期表达量均逐渐上升直至孵化。弓背青鳉仔鱼雌二醇暴露结果显示,各浓度雌二醇暴露均能使ocuerα和弓背青鳉卵黄蛋白基因(Vitellogenin,vtg)表达量上升,ocuerβ1仅在20μg/L上调,ocuerβ2表达量下调。【结论】ocuer不同亚型在介导雌激素调控中起着重要作用。     

全基因组重测序筛选弓背青鳉三亚群体性别遗传标记

【目的】开发弓背青鳉（Oryzias curvinotus）三亚群体（下称“三亚青鳉”）遗传性别鉴定分子标记,为进一步挖掘其性别决定基因奠定基础。【方法】用染色体商（Chromosome quotient,CQ）法比较雌雄两性个体的全基因组重测序覆盖度,筛选潜在的性别特异性序列区域（CQ <0.1）并设计引物,通过PCR扩增验证引物区分三亚青鳉群体及其子代性别的适用性。【结果】经CQ分析筛选,CQ <0.1的特异性区域279个,设计引物279对。随机挑选的60对引物中,29对标记引物在三亚青鳉群体雄鱼中扩增得一个DNA条带,雌鱼无条带,均可鉴定三亚青鳉遗传性别。从29对引物中随机挑选2对引物（命名为Marker1和Marker2）进一步验证,引物Marker1、Marker2在雄鱼中扩增产物分别为791、556 bp,两对引物对三亚青鳉子代群体的扩增结果与亲本一致。用两对性别特异性标记对三亚群体的F2代全同胞家系94个个体进行扩增,结果发现F2群体自然性别比约1:1。【结论】性别特异性引物Marker1和Marker2均可对三亚青鳉群体进行遗传性别鉴定,在三亚青鳉野生亲本及...     

青鳉foxl2基因敲除突变体的构建与表型分析

【目的】建立青鳉(Oryziaslatipes)foxl2基因突变体材料,为阐释foxl2基因功能提供良好的动物模型和研究基础。【方法】利用CRISPR/Cas9技术敲除青鳉foxl2基因,建立突变体材料。观察foxl2基因突变体的第二性征、性腺等形态特征;组织学分析性腺结构与性腺中细胞类型;用定量PCR检测性腺发育相关基因的表达情况。【结果】通过CRISPR/Cas9技术成功敲除青鳉foxl2基因,建立foxl2基因缺失4个碱基的青鳉突变体。从第二性征与性腺表型上,foxl2-/-突变体均表现为生理雄性;组织切片分析发现,foxl2-/-突变体的性腺结构与野生型卵巢和野生型精巢均有显著差异,存在退化的核仁外周卵母细胞与精子,提示foxl2-/-的性腺在组织结构上类似精巢;定量PCR结果显示,foxl2-/-突变体中雄性性腺发育关键基因sox9b、gsdf、amh等的表达量升高,雌性性腺发育关键基因cyp19a1a等的表达量下降。【结论】通过CRISPR/Cas9技术成功建立青鳉foxl2基因缺失的突变体,foxl2-/-突变体有遗传雌性、生理雄性的表型特征,foxl2对维持青鳉性腺功能有重要作用。     

炔诺酮短期暴露对海洋青鳉仔鱼的毒性效应

【目的】研究低浓度炔诺酮（Norethisterone,NET）短期暴露对海洋青鳉（Oryzias melastigma）仔鱼的毒性效应。【方法】海洋青鳉仔鱼在8.96 ng/L的NET暴露10 d,分析仔鱼游泳行为,氧化-抗氧化相关酶活性,性激素、甲状腺激素水平,以及基因转录模式;NET处理后仔鱼在人工海水中饲养至5月龄,统计性别比例。【结果】NET短期暴露后,海洋青鳉仔鱼的游泳行为有显著的抑制效应,仔鱼在静止状态的时间减少,处于小运动和大运动状态的时间极显著增加（P <0.01）;丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性变化不显著（P> 0.05）;仔鱼雌二醇（E2）水平显著降低（P <0.05）,睾酮（T）水平极显著提升（P <0.01）,群体中雌雄比例无影响;132个基因的转录模式发生改变,主要涉及节律调节、物质代谢和免疫等生物学过程。【结论】海洋青鳉在低浓度NET环境短期暴露可引起仔鱼游泳行为、激素水平及基因转录模式的变化;海洋环境残留的NET对鱼类健康有潜在风险,进而破坏海洋渔业资源。     

珠江斑鱯的早期胚胎发育观察

观察了珠江斑鳠3批次受精卵的胚胎发育,描述及记录了胚胎发育各期的形态特征及所需时间。斑鳠的成熟卵子呈圆形,黄色,卵子直径为3.1~3.8 mm,吸水后最大卵径为4.0~4.2 mm,受精卵黏性很小。珠江斑鳠胚胎发育与其他硬骨鱼类基本相似,属于盘状卵裂。在水温(27.5±0.5)℃时,受精后约1 h 10 min进入胚盘形成期,受精2 h 15 min后进入卵裂期,受精后7 h 50 min,进入囊胚期,再经约13 h 45 min进入原肠期,受精后21 h15 min,胚孔封闭,当受精39 h 5 min后,心脏开始出现搏动,受精后55 h,仔鱼开始孵出。     

苏氏圆腹胚胎发育的初步观察

观察两批苏氏圆腹受精卵的胚胎发育,描述并记录胚胎发育各期的形态特征及发育时间。结果表明:苏氏圆腹成熟卵呈圆球形,淡黄色,富有光泽,卵黄分布均匀,相对密度略大于水,卵径0.93～1.11 mm,平均0.98±0.19 mm。受精卵吸水后呈微黏性,属黏性卵,卵膜略膨胀,卵径0.99～1.15 mm,平均1.08±0.27 mm。苏氏圆腹胚胎发育属于盘状卵裂,与其他淡水硬骨鱼类基本相似。其发育过程可分为:受精卵、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官分化期、出膜期和初孵仔鱼。在水温26±1℃的条件下,苏氏圆腹胚胎孵化历时24 h 45 min,总积温640.90 h.℃。初孵仔鱼体全长3.20～3.60 mm。     

Observation and analysis of morphology abnormalities in development of Oryzias melastigma embryos

Fish embryos are widely used as models in toxicology,drug development,and human disease research because of their high sensitivity,observability,and operability,providing the basis for an in-depth understanding of the embryogenesis.Increasing studies have indicated that birth defects are hereditary.In this study,we used Oryzias melastigma as a model to conduct a study of 185-day embryogenesis and observed self-induced non-pathological abnormal embryogenesis.O.melastigma experienced pre-puberty stage,adolescence stage,and senescence stage,and individuals produced up to 102 eggs per day.However,the fecundity was markedly reduced during the senescent stage.During the active egg and blastodisc stages,pseudo-fertilization and pseudo-blastocysts were observed.During cleavage at the 4-to 32-cell stages,we observed blastomeres separation or dislocation.Excessively separated blastomeres formed double blastoderms,eventually resulting in conjoined twins.During the blastula stage,we observed abnormally increased cell volume,narrowed and elongated blasto cysts,and ab normally coated blastoderms.At the organogenesis stage,we observed abnormal numbers of Kupffer's vesicles and conjoined twins.Abnormality in the location and number of oil droplets were observed in various development stages.Abnormal development was more commonly observed in fertilized eggs produced by broodstock in prepuberty or senescence stages,which is probably related to the age of fish and the egg quality.This study can provide the materials for comparative analysis in toxicological and molecular studies of O.melastigma,and may provide evidence for other economic fish that produce sticky eggs.     

鞍带石斑鱼人工繁殖及胚胎发育研究

为建立鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)人工繁殖技术,研究了鞍带石斑鱼亲鱼培育、催产及胚胎发育过程。根据性腺检查及催产结果,判定鞍带石斑鱼在广东的繁殖季节为每年的7-9月份,产卵水温在28~31℃。使用10~12尾雌鱼和3尾雄鱼搭配进行催产实验,亲鱼未出现发情和追尾现象,虽能产卵但均未受精,通过人工授精可得受精卵。对鞍带石斑鱼胚胎发育进行了观察,详细描述从受精卵到初孵仔鱼的28个具体发育时期的形态特征和发育时间,结果表明,将鞍带石斑鱼胚胎发育划分为卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期和器官形成期。在水温(27±0.5)℃、盐度31.0、pH 7.8的海水中,鞍带石斑鱼胚胎历时25 h 40 min完成整个胚胎发育孵化出膜。     

温度对匙吻鲟胚胎与仔鱼发育的影响

研究不同温度下匙吻鲟(Polyodon spathula)的胚胎与仔鱼发育。结果表明,26℃时,匙吻鲟胚胎发育到大卵黄栓期全部死亡;在15～24℃范围内,胚胎均可孵化出膜,孵化时间与温度呈极显著的负相关关系(P<0.01)。胚胎发育的最适温度范围为18～22℃,最佳温度为20℃,生物学零度为12.30℃。卵黄囊期仔鱼历时随温度的升高而缩短。在16～22℃范围内,温度对卵黄囊期仔鱼生长的影响极显著(P<0.01),22～24℃影响不显著(P<0.05)。在22～26℃范围内,仔鱼生长的差异不显著(P<0.05),成活率低,且畸形率极显著地高于16～20℃(P<0.01)。匙吻鲟仔鱼早期发育的最适温度范围为18～20℃,温度过高是造成仔鱼畸形率增加的主要原因之一。     

花胚胎发育及仔鱼阶段同工酶的初步分析

<正>鱼类胚胎发育是一个复杂而有序的系统工程,是基因时空综合表达结果。已有的研究证明:机体在生长发育过程中会发生一系列复杂的同工酶时空表达变化,它是基因特异性表达的一种主要作用形式。同工酶研究是研究鱼类个体发育的有力手段之一,     

Effects of Salinity on Embryonic Development,Survival, and Growth of Crassostrea hongkongensis

This study examined the effects of salinity on embryonic development,survival,and growth of the Hong Kong oyster Crassostrea hongkongensis.The embryos,larvae,and juveniles of C.hongkongensis were held in artificial seawater at three different salinities （low,15; medium,23; and high,30） to determine the optimum hatchery and nursery conditions for mass production of the seeds.Results showed that the percentage production of straight-hinged larvae from fertilized eggs was significantly lower at the high salinity than at the low-and medium-salinities （P ＜ 0.05）.The survival rates of larvae and juveniles differed significantly among the three salinity trials,with the highest survival rate observed at the low salinity （P＜ 0.05）.The shell height of larvae was significantly larger at the low salinity than at the high and medium salinities from days 9 to 15 （P＜ 0.05）,whereas that of juveniles was significantly larger at the low salinity than at the high and medium salinities on day 70 （P ＜ 0.05）.These results indicate that the larvae and juveniles of C.hongkongensis are tolerant to a wide range of salinities （15 to 30）,but show better growth and survival at relatively low salinities.Thus,it is recommended to use relatively low salinities in hatchery and nursery systems for improved yields of C.hongkongensis.     

盐度对管角螺胚胎发育的影响

在水温25.5~29.2℃的条件下,设11个盐度梯度对管角螺[Hemifusus tuba(Gmelin)]的胚胎发育进行了观察和研究。结果显示:管角螺胚胎发育的适宜盐度范围为22~35,最适盐度范围为25~31;在适宜的盐度范围内,7~9 d发育的胚胎能完全消耗卵囊内的败育卵变为自身发育的营养物质,13~15 d形成稚螺雏形,31~34 d胚胎完成发育从卵囊内爬出;适宜盐度范围内各盐度对正常卵发育数量、孵化率无显著影响。低于其适宜盐度范围,胚胎发育在初始阶段便受抑制,盐度为16~19只有部分正常卵发育,需34~36 d才完成胚胎发育;高于适宜盐度范围的38、41两组,在6 d内对胚胎发育无影响,但6 d后影响显著。低盐度对胚胎发育影响较高盐度更为明显。     

泰国虎纹蛙与中国虎纹蛙早期胚胎发育比较研究

比较了泰国虎纹蛙与中国虎纹蛙在控温条件下的胚胎发育过程。结果表明:两亚种蛙在右鳃封闭期与鳃盖完成期之间有明显的"角质颌出现"的特征,因而在传统分期的基础上增加了一个"角质颌出现期",从而将两者自受精卵开始到鳃盖完成期为止划分为26个时期;两亚种蛙大部分发育时期外形特征基本相同,但八细胞期细胞的排列方式,两亚种蛙神经褶期的神经沟形状、纤毛出现期的神经褶棱高度等均不同;泰国虎纹蛙的发育速度较快,自受精卵期到鳃盖完成期共耗时70.4h,中国虎纹蛙在相同的条件下则需92.5h,但在四细胞期、八细胞期、神经管期和尾芽期,泰国虎纹蛙的发育速度却较中国虎纹蛙慢。     

外源视黄酸对草鱼早期胚胎发育的影响

以 10 - 6 M和 10 - 5 M的视黄酸体外处理草鱼 ( Ctenopharyngodon idellus)早期胚胎 ,结果发现其影响了胚胎的形态发育 ,影响其中轴器官的形成和神经系统的分化 ,使胚胎前部结构全部或部分缺失 ,由此诱导的神经器官 ,如眼、听囊、嗅囊等缺失或不分化 ,胚胎的尾部缩短 ;同时也减少了色素细胞的形成。并且这种畸形程度随着处理浓度加大 ,时间加长而加剧。但在原肠中期以后处理的胚胎 ,神经系统发育基本正常 ,因此说明视黄酸并不抑制原肠作用和随后的神经诱导。它可能是通过抑制某些基因的表达从而影响神经外胚层的区域性分化。