三疣梭子蟹精子保存研究

于2004年5月到2004年7月对三疣梭子蟹精子进行了常温、低温和超低温保存研究。利用离子载体A23187人工诱导顶体反应以判断精子活力。常温和低温保存实验的结果显示,4℃下无钙人工海水(calcium-free artificial sea water,Ca2 FASW)保存236h的精子有25%以上的成活率。在4℃,25℃两种温度与Ca2 FASW、天然海水(natural sea water,NSW)两种基础液构成的4种组合中,最优组为4℃、Ca2 FASW,最差组为25℃、NSW。将精子浓度与Ca2 FASW对照组及诱导组比较,结果显示,25℃和4℃下,精子浓度与对照组顶体反应率相关性不显著(P=0.068>0.05,P=0.265>0.05),与诱导组顶体反应率极显著相关(P<0.01)。以二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)和甘油(Glvcerol,G)作为抗冻剂进行超低温冷冻实验,72h后解冻,包括对照组在内的所有组均有98%以上的精子不经诱导就发生顶体反应。     

三疣梭子蟹肌肉乳化病的同工酶病理变化研究

采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE),对患有肌肉乳化病的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)3种组织中10种同工酶及肌浆蛋白的酶谱表型进行分析,并就患病后酶谱变化特征及原因进行了讨论。证实在部分组织中,除SOD酶外9种酶及肌浆蛋白的酶带均出现明显的紊乱现象,表明病蟹的病理机制极可能与代谢异常有关,其特异性变化可以作为疾病早期诊断及病理分析的生化辅助指标。     

NaCl 对三疣梭子蟹消化酶活力的影响

作者采用酶学分析方法研究了反应介质中添加NaC1对三疣梭子蟹(Porturrus tritubrculatus)中肠腺蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶A、羧肽酶B、淀粉酶活力的影响,反应介质中NaC1浓度设置为0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0和2.0 mol/L 8个梯度.实验结果表明,反应介质中添加NaC1对消化酶活力影响显著,除羧肽酶B外,添加NaC1对三疣梭子蟹消化酶均有激活作用,且所有消化酶都有很高的耐盐性.当反应介质中NaC1浓度为0.1～0.5 mol/L时蛋白酶活力最大;0.5 mol/L时胰蛋白酶活力最大;胰凝乳蛋白酶在反应介质中NaC1浓度为1 mol/L时酶活力最大;羧肽酶A在反应介质中NaC1浓度为0.05～0.1 mol/L时酶活力最大;NaC1对羧肽酶B有抑制作用,在反应介质中NaC1浓度为2 mol/L的条件下,只有未添加NaC1时酶活力的60%;NaC1在0～2 mol/L时对淀粉酶均有激活作用,其最大激活能力在0.5mol/L左右.     

溶藻弧菌对三疣梭子蟹抗氧化酶系统的影响

从患乳化病的养殖三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)体组织内分离出痛原菌--溶藻弧菌(Vibrioalginglyticus),通过肌肉注射的方式对三疣梭子蟹进行感染实验,对照组注射等量的生理盐水,在感染后O、24、48和72 h分别采集不同处理组三疣梭子蟹的血淋巴、肌肉和肝胰腺组织,测定溶藻弧菌对其各组织抗氧化相关酶活的影响.结果表明:注射生理盐水的对照组三疣梭子蟹体组织中抗氧化酶和MDA含量在不同的采样时间变化不显著(P>0.05).与对照组比较,三疣梭子蟹感染溶藻弧菌后血淋巴、肌肉和肝胰腺组织中SOD活性随着感染时间的延长显著降低(P<0.05).在感染溶藻弧菌24 h时血淋巴和肝胰腺组织中GSH-px活性有增强的趋势(P>0.05),随后在感染48 h后GSH-px活性显著降低(P<0.05);感染组各体组织中的MDA含量均随着感染时间的延长而显著上升(P<0.05).结果显示梭子蟹感染溶藻弧菌后机体消除氧化过程自由基的抗氧化酶活降低,脂质过氧化物水平升高,使得抗氧化防御能力下降.     

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CYP4C基因的cDNA克隆及表达分析

采用RT-PCR及Smart-TM Race技术,首次获得三疣梭子蟹CYP4C基因cDNA全长序列。该基因全长1888bp,编码一个由514个氨基酸组成的多肽,预测分子量大小为59.54kDa,理论等电点为8.08。氨基酸序列中含有CYP基因家族特有的K螺旋保守序列(ExxR)和血红素结合区(FxxGxxxCxG)。同源性及系统进化分析表明,三疣梭子蟹CYP4C基因与岸蟹、凡纳滨对虾、日本沼虾、中国对虾、沟虾、红螯螯虾的同源性分别为88%、72%、66%、59%、60%、59%。荧光定量RT-PCR结果表明,CYP4C在肝胰腺、肌肉、眼柄、鳃和心脏中均有分布,在肝胰腺中表达量最高。高盐(45)胁迫后,三疣梭子蟹CYP4C的表达量显著高于对照组,随着胁迫时间的延长出现逐渐降低的趋势,在胁迫48h后表达量达到对照组水平;低盐(11)胁迫条件下,CYP4C的表达水平随着胁迫时间的延长呈现逐渐下降的趋势,且从胁迫6h开始显著低于对照组。研究推测,CYP4C基因参与三疣梭子蟹盐度适应调节,是蜕皮机制的调控因子之一。     

浙江省三疣梭子蟹产量波动及潜在影响因素分析

依据2000—2015年浙江省三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)渔获量的数据,以及影响渔获量的因素(管理类因素、环境类因素和营养关系类因素等共11个因子),使用广义加性模型(GAM)对各类因素对三疣梭子蟹渔获量的影响进行了分析。结果显示,赤潮面积、捕捞努力量和放流数量对三疣梭子蟹渔获量影响显著(P0.01)。3个因子的累积解释比率达98.3%,其中,赤潮的解释比率最大,达到47.2%,捕捞努力量的解释比率为37.8%,放流数量的解释比率为13.3%。三疣梭子蟹渔获量随着赤潮面积增加有所减少,随着捕捞努力量的加大有迅速增加的趋势,与放流尾数呈现正相关趋势。三疣梭子蟹渔获量的波动受诸多因素的影响。今后需开展更深入的研究,找到可能影响三疣梭子蟹渔获量的其他关键因素。     

三疣梭子蟹幼体消化道发育的组织学研究

三疣梭子蟹的消化道分前肠、中肠和后肠,前后肠起源于外胚层,腔内有角质衬里,中肠起源于内胚层,腔内无角质层。消化管壁均由上皮层、结缔组织层、肌肉层和外膜组成。前肠包括口腔、食道和胃,食道壁内褶形成食道嵴,食道嵴的折叠程度以及食道放射肌的排列密度随幼体发育而增加。胃的结构复杂,其内的角质层特化成前部的胃磨和后部的腺滤器。胃磨、腺滤器、贲门胃和幽门胃之间的比例以及贲门－幽门瓣在幼体发育过程中变化明显。中肠的前端背面有一对前盲囊管,沿胃的背面向前延伸,在发育上有长度的变化。中肠后端背面发出一支后盲囊管,在Ｚ２形成,随后逐渐延长并发生弯曲。后肠始于腹部第二节,在蚤状幼体时最长可达中肠的两倍多,大眼幼体后随着腹部的退化而明显缩短。     

氟苯尼考在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)疾病模型内的代谢动力学

为了解健康和疾病条件下药物在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)体内的代谢差异,在构建三疣梭子蟹溶藻弧菌疾病模型的基础上,按25mg/kg剂量分别给健康和患病三疣梭子蟹单次口灌氟苯尼考后,采用高效液相色谱法测定了其肝胰腺、肌肉和血浆中的药物浓度,药时数据应用3P97药代动力学软件拟合。结果显示:氟苯尼考在健康和患病条件下三疣梭子蟹相同组织中的药时曲线形态相似,三种组织的药时数据均符合带时滞的一级吸收二室开放模型;肝胰腺吸收药物最快,肌肉次之,血浆最慢;与健康组相比,患病蟹肝胰腺、肌肉、血浆三种组织对氟苯尼考的吸收和消除速度明显减慢,达峰时间推迟,半衰期延长,清除率减低,最高药物浓度下降,表观分布容积和药时曲线下总面积变大。说明疾病使氟苯尼考在三疣梭子蟹体内的吸收、分布、代谢和消除均发生了显著变化,建议患病三疣梭子蟹口服氟苯尼考的休药期至少10d。     

10种金属离子对三疣梭子蟹中肠腺消化酶活性的影响

以酶学分析方法研究了10种金属离子(Ag 、Cd2 、Ca2 、Cu2 、Fe3 、Hg2 、Mg2 、Mn2 、Pb2 和Zn2 )对三疣梭子蟹Portunus trituberculatus中肠腺蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶A、羧肽酶B、淀粉酶和纤维素酶活性的影响,10种金属离子浓度分别设置为5×10-4、1×10-3和5×10-3mol.L?13个梯度。结果表明,在实验浓度范围内低浓度(0.5mmol.L-1)Fe3 、Pb2 、Mn2 及0.5和1mmol.L-1的Ca2 对蛋白酶活性影响不显著,Mg2 对蛋白酶的激活作用随浓度的升高而升高,1mmol.L-1的Mn2 对蛋白酶表现为显著激活作用;3种浓度的Ca2 、Cd2 、Mg2 、Mn2 对胰蛋白酶均表现显著激活作用;Ca2 及低浓度的Mg2 和Cu2 对胰凝乳蛋白酶有激活作用;Hg2 及低浓度的Mg2 、Mn2 、Zn2 对羧肽酶A有激活作用;Ca2 及低浓度的Mg2 对羧肽酶B有激活作用;Ca2 、Cd2 、Mn2 和低浓度的Zn2 、Fe3 、Pb2 对淀粉酶表现为激活作用;Zn2 、Fe3 、Mn2 、Cu2 对纤维素酶表现为激活作用。除此之外,金属离子对这几种消化酶均表现为抑制作用,抑制作用随浓度的升高而升高。     

锯缘青蟹与三疣梭子蟹幼体饵料的比较

本文报道了３种单细胞藻类、３种微小动物、４种人工饵料,分别喂养不同发育期的锯缘青蟹和三疣梭子蟹幼体,从其变态速度和存活率,比较各种饵料的效果。结果表明,以单细胞藻类、轮虫、卤虫、桡足类混饲效果最佳,到达变态时间为１５￣１７ｄ,存活率分别为５４％、６３％。     

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CTL基因SNP位点E4-205 C/T与抗溶藻弧菌相关性分析

C-型凝集素(C-typelectin,CTL)是甲壳类动物体液免疫中重要的免疫因子之一。但CTL基因在溶藻弧菌对三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)感染的过程中的表达及抗病机制尚有待进一步研究。为初步阐明CTL基因SNP E4-205 C/T位点与抗溶藻弧菌感染相关的分子机制,对不同基因型梭子蟹进行溶藻弧菌感染,通过绝对定量方法分析不同基因型梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中溶藻弧菌的复制情况。发现溶藻弧菌感染后12 h内梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中C/C组细菌数量显著高于T/T组,结果表明T/T组梭子蟹抗感染能力显著高于C/C组。进一步对该位点非同义突变(ACT-ATT)导致的一个氨基酸改变(Thr-Ile)的两种蛋白进行体外重组表达,并对两种重组蛋白CTL-ATT及CTL-ACT进行活性分析。发现两种重组蛋白对溶藻弧菌生长均具有一定的抑制作用, CTL-ATT的抑菌活性显著高于CTL-ACT。重组蛋白CTL-ATT与PAMPs的结合活性高于CTL-ACT与PAMPs的结合活性,同时两种蛋白与PAMPs和溶藻弧菌的结合活性具有浓度依赖性。结果表明三疣梭子蟹CTL基因参与机...     

三疣梭子蟹幼体中肠腺发育的组织学和细胞学研究

将蚤状幼体 I期 (Z1)到仔蟹共六期三疣梭子蟹幼体固定 ,作横切、纵切和平切的连续切片 ,观察中肠腺的解剖学及组织学特征 ,并研究其细胞的超微结构。三疣梭子蟹的中肠腺起自前、中肠交界处 ,分左右两部分 ,每部分三叶 ,由总管与幽门胃和中肠相通 ,中肠腺管的长度和数量随幼体发育而增加。管壁的上皮细胞在各期幼体均可分为四种类型 :E-细胞 (胚细胞 )、F-细胞 (纤维细胞 )、R-细胞 (吸收细胞 )和 B-细胞 (分泌细胞 ) ,它们在中肠腺管中的分布位置和功能各有不同。     

受短期停食胁迫下三疣梭子蟹幼体的存活与变态

2005年4月以三疣梭子蟹各期幼体为实验动物,开展了短期停食对三疣梭子蟹幼体存活与变态影响试验.结果表明:完全停食处理条件下三疣梭子蟹各期幼体的平均全致死时间按发育先后次序(Z₁,Z₂,Z₂,Z₄,M)依次为81,120,141,162和200 h,平均半致死时间为39,66,90,64和174h;短期停食后恢复正常给饵条件下三疣梭子蟹各期幼体停食处理后的变态临界点按发育先后次序依次为停食处理后的33,57,69,54和150 h;单次停食时间在变态临界点内,先停食后正常给饵与"给饵+停食"循环两处理模式中各期幼体的存活率和变态率均随着停食时间的延长而下降,幼体变态所需时间和变态后个体死亡率也分别随之延长和增加,其中Z₁停食3 h组与"给饵3 h+停食3 h"循环组、Z₂停食4 h组与"给饵4 h+停食4 h"循环组、Z₃停食4.5 h组与"给饵4.5 h+停食4.5 h"循环组,Z₄停食6 h组与"给饵6 h+停食6 h"循环组、M停食7.5 h组、停食15 h组以及"给饵7.5 h+停食7.5 h"循环组均与对照组无差异.最后,还分别就三疣梭子蟹各期幼体停食处理极限值和限食处理总实验时间的确定、短期停食胁迫对三疣梭子蟹幼体的存活与变态特征以及三疣梭子蟹各期幼体的补偿生长水平及其应用等进行了分析与探讨.     

三疣梭子蟹肝脏的结构研究

于１９８９年９月－１９９０年８月，用电镜研究浙江舟山出产的三疣梭子蟹肝脏的结构。结果表明，三疣梭子蟹的肝脏主要由４种细胞构成；Ｂ细胞，大，长柱状，胞质中有许多液泡，粗面内质网发达；Ｒ细胞和Ｆ细胞，两者相似，均含丰富的粗面内质网，核糖体、脂滴、线粒体等结构，但Ｒ细胞脂滴数量多，体积大，Ｆ细胞的核糖体数量超过Ｒ细胞２；Ｅ细胞，多边形，核大而圆，粗面内质网少，线粒体小而狭长。     

三疣梭子蟹池塘养殖的研究

１９９３年，苍南县水产局从三疣梭子蟹（Ｐｏｒｔｕｎｕｓｔｒｉｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｕｓ　Ｍｉｅｒｓ）幼蟹开始，经苗种培育和养成两个阶段，完成整个池塘养殖试验过程。１材料与方法１．１试验场地苍南县沿浦镇沿浦村对虾场１号塘，面积１０６６７ｍ２（１６亩）。设闸门一处，大潮汛直接进、排海水，小潮依靠抽水机改善水质。水位可保持１～１．５ｍ。在该塘内侧原高坡面修建一口长３８．６ｍ，宽１２．１５ｍ大规格蟹种养成塘，编号为２。塘水进出通过１ｍ宽的缺口，与大塘相通。水位达０．６～０．７ｍ。又在大塘中，以网片围成无底…     

逆境环境因素对三疣梭子蟹幼蟹致死效应分析

利用正交试验设计,研究了温度、盐度和酸碱度3种环境因素逆境下对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)幼蟹的致死效应,以阐明三疣梭子蟹幼蟹对不同逆境环境的抵抗力大小。3种逆境环境因素的水平分别是:温度为10,15,30,35℃;盐度为10,15,35,40;酸碱度为6.0,6.5,9.0,9.5。结果表明,盐度变化对梭子蟹幼蟹的影响最大,其次为酸碱度,再次为温度。对于温度而言,低温下幼蟹的存活时间较长;对于盐度而言,高盐度逆境比低盐度逆境下的存活时间长;对于pH值而言,碱性环境下的存活时间比酸性环境下的存活时间长。     

三疣梭子蟹4个野生群体线粒体16S rRNA和COⅠ基因片段的比较分析

对分别采自辽东湾、莱州湾、海州湾和舟山的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)4个野生群体的线粒体16S rRNA和COⅠ基因片段进行了扩增和测序,分别得到长度为524 bp和658 bp的片段.2段序列的碱基组成均显示较高的A+T比例(16S rRNA基因70.8%,COⅠ基因63%),这与果蝇、虾类、蟹类等无脊椎动物的16S rRNA和COⅠ基因片段研究结果相似.通过对三疣梭子蟹16S rRNA和COⅠ基因片段遗传特征的研究,发现种内变异较低,在16个样本中,16S rRNA基因序列中共检测到1个变异位点,2种单倍型;COⅠ基因序列中共检测到4个变异位点,5种单倍型.另外,以中华绒螯蟹为外群探讨了梭子蟹科(Portunidea)几个属种的系统进化关系.用MEGA4.0软件中的NJ法构建了系统进化树,基于16S rRNA和COⅠ2种片段的聚类结果均显示梭子蟹属(Portunus)与美青蟹属(Callinectes)亲缘关系最近,先聚在一起,然后再与蟳属(Charybdis)聚在一起,最后才与外群中华绒螯蟹聚在一起,这一结果与传统分类基本一致.     

三疣梭子蟹死因探讨

本文报道海捕三疣梭子蟹暂养中出现大量死亡的原因。电镜观察结果表明，死蟹的肝脏和肌肉组织中有大量的弧菌寄生，鳃组织中未见弧菌，但附着有枪蟹茗荷儿Ｏｃｔｏｌａｓｍｉｓｌｏｗｅｉ，加上暂养环境条件和其原海洋生态环境的不同是造成其死亡的主要原因。     

三疣梭子蟹雌雄隔离养殖技术研究

在193亩池塘中开展三疣梭子蟹雌雄分养和雌雄混养对比试验。其中雌雄分养面积93亩，亩产商品蟹182公斤，平均壳宽12．6厘米，平均个体重230．1克，成活率40．2％。与雌雄混养相比，亩产量提高了53．6％，成活率提高了1.51倍。专家鉴定认为，梭子蟹雌雄分养，方式新颖，效果明显，技术水平属国内先进。