49味中药及其复方与抗生素对溶藻弧菌的体外抑菌作用

【目的】筛选对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)有抑菌作用的中草药及其复方以及抗生素。【方法】采用改良的牛津杯法对诃子、白芍、甘草等49种单味中药进行溶藻弧菌体外抑菌试验,以体外抗菌活性较好的22种药物,按中药配伍规则组成二联、三联复方,采用生药质量浓度分别为60、240 mg/mL的中药进行中药复方体外抑菌试验。用抗生素对溶藻弧菌进行药敏试验。【结果】当单种中药体外抑菌药物质量浓度为240 mg/mL时,诃子、乌梅、醋五味子等对溶藻弧菌抑菌作用明显,为极敏感。在二联中药体外抑菌试验中,当中药质量浓度为60mg/m L时,诃子、乌梅组成复方中药等8种复方对溶藻弧菌协同抑菌作用明显,为极敏感,药物质量浓度在240mg/m L时,诃子与白芍等14种双联中药的协同抑菌作用明显,为极敏感。在三联中药体外抑菌试验中,在药物质量浓度60 mg/mL时,诃子、乌梅、蒲公英等组成24种复方中药按质量比1∶1∶1的抑菌效果极为敏感,药物质量浓度在240mg/m L时,黄芩、诃子、黄芪等22复方中药按质量比1∶1∶1对的抑菌作用明显,为极敏感。溶藻弧菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、土霉素及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑4种药物高度敏感。【结论】18种单味中药对溶藻弧菌有抑制作用,黄芩、诃子、黄芪等24个三联复方中药药效较强,多个抑菌作用效果良好的三联复方中药可用于鱼病防治研究。     

中草药与抗生素联用对罗非鱼源无乳链球菌的体外抑菌作用

采用琼脂扩散法测定16味中草药水提物和19种抗生素的抑菌活性,筛选出抑菌作用较佳的3味中草药水提物和3种抗生素并测定其最小抑菌浓度(MIC),用常量棋盘稀释法测定3味中草药水提物和3种抗生素联用对罗非鱼无乳链球菌的微量抑制浓度指数(FIC index),研究中草药与抗生素联用对罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的体外抑菌效果。结果表明,16味中草药水提物和19种抗生素中,五倍子水提物、黄连水提物对无乳链球菌的体外抑菌作用最强,MIC均为3.9μg/m L;其次为板蓝根,MIC为250μg/m L;对无乳链球菌抑菌效果较好的抗生素依次为头孢唑林和头孢曲松(MIC 0.125μg/m L)、羧苄西林(MIC 0.5μg/m L)。联用实验中,黄连与头孢曲松、头孢唑林和羧苄西林联合用药的抑菌作用均表现为协同;五倍子与羧苄西林联合用药的抑菌作用表现为拮抗;板蓝根与3种抗生素联合用药的抑菌作用均为无相关。     

工厂化养殖暗纹东方鱼屯致病菌的分离和鉴定

从不同养殖场患病暗纹东方鱼屯(Takifaguobscurus)的鳃、肠、肝、肌肉及溃疡部位分离到9株菌株,经人工感染致病性试验,其T-22、T-11、J-2、H-3、H-5表现出较强的致病性,出现症状与自然发病鱼相同。通过对菌体形态特征、培养特性和API20E细菌生化快速鉴定试条的测定,分别鉴定为温和气单胞菌(Aeromonassobria)、豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、类志贺邻单胞菌(Plesiomonasshigelloides)、霍乱弧菌(Vibriocholerae)。证实这5株菌为致病菌。药敏试验结果表明9种药物对温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、霍乱弧菌均有较好的抑菌效果;嗜水气单胞菌表现出明显的耐药性。氟嗪酸、环丙沙星、复合磺胺对类志贺邻单胞菌有一定抑菌效果。     

工厂化养殖暗纹东方鲀致病菌的分离和鉴定

从不同养殖场患病暗纹东方鲀（Takifagu obscurus）的鳃、肠、肝、肌肉及溃疡部位分离到9株菌株，经人工感染致病性试验，其T-22、T-11、J-2、H-3、H-5表现出较强的致病性，出现症状与自然发病鱼相同。通过对菌体形态特征、培养特性和API20E细菌生化快速鉴定试条的测定，分别鉴定为温和气单胞菌（Aeromonas sobria）、豚鼠气单胞菌（Aeromonas calyioe）、嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）、类志贺邻单胞菌（Plesiomonas shigelloides）、霍乱弧菌（Vrbrio cholerae）。证实这5株菌为致病菌。药敏试验结果表明9种药物对温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、霍乱弧菌均有较好的抑菌效果；嗜水气单胞菌表现出明显的耐药性。氟嗪酸、环丙沙星、复合磺胺对类志贺邻单胞菌有一定抑菌效果。     

中药复方对鲫鱼细菌性败血症的防治效果

【目的】研究中药复方对鲫鱼(Carassius auratus)细菌性败血症的防治效果。【方法】由茵陈、地锦草、大黄、黄芩、白术、苦参、板蓝根按一定比例组成中草药复方,用索氏提取法以乙醇为溶剂提取中草药复方的总有效成分,提取物按质量分数0%、0.5%、2.0%,中药复方原料粗粉按质量分数2.0%的添加量制成药饵(分别记为0%、0.5%、2.0%药饵组,2.0%生药组),投喂人工感染温和气单胞菌(Aeromonas sobria)的鲫鱼,测定感染4 d和15 d时鲫鱼的血清转氨酶(GPT、AST)、甘油三酯(TRIG)、胆固醇(TC)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、白球比(白蛋白与球蛋白质量浓度比,A/G)等肝功能指标,尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、肌酐(CR)等肾功能指标,心肌功能指标肌酸磷酸激酶(CPK)。【结果】2.0%药饵组在0.5×10~9 cfu/mL和1×10~9cfu/mL的温和气单胞菌攻毒感染下,药饵防治率分别为82.5%和42.5%,与0%药饵组相比,药效极显著(P <0.01)。相对于对照组(健康鱼),感染0.5×10~9 cfu/mL温和气单胞菌病鱼(0%药饵组)转氨酶、TRIG、TC、TP、ALB、GLB、A/G指标下降(P <0.05),BUN、UA、CR、CPK指标上升(P <0.05),而其他药饵组各指标均较0%药饵组改善,恢复至对照组水平。【结论】中药复方对鲫鱼细菌性败血症有一定防治作用,可改善病鱼的肝脏、肾、心肌功能的受损状态。以添加质量分数2%中草药复方提取物的药饵防治鲫鱼细菌性败血症的药效显著。     

常用剂量氟苯尼考在罗非鱼肝脏和肾脏中的消除规律及组织学影响

在水温28℃条件下,以12 mg/kg剂量对罗非鱼单次口服给药,采用HPLC方法测定不同时间实验鱼肝脏和肾脏中的药物水平,分析氟苯尼考在罗非鱼肝、肾组织的吸收及消除规律。结果显示,肝脏和肾脏中的药动学参数均符合药动学一室模型,肝脏的药物消除速度快于肾脏,消除半衰期T1/2β分别为4.89 h和15.93 h;药物在肝脏的Tmax为5.43 h,吸收峰值为4.84μg/g;59 h后肝、肾组织中的药物含量均低于0.8μg/g。取12 mg/kg剂量连续给药7 d的实验鱼肝、肾组织,进行组织学观察,结果显示,给药组罗非鱼的肝、肾组织均未出现病理性变化。此外,氟苯尼考对6株罗非鱼常见病原菌的体外抑菌实验中,最小抑菌浓度(MIC)均≤4 mg/L,表明常用剂量氟苯尼考在罗非鱼体内消除快、残留少且不造成组织损伤,对常见病原菌具有良好的抑菌效果。     

中草药复方及其与抗生素联用对斜带石斑鱼河流弧菌病的治疗效果

【目的】通过药物体外抑菌试验及斜带石斑鱼抗病力研究,筛选有效治疗斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)河流弧菌(Vibrio fluvialis)病复方中药与中西药联用配方。【方法】用黄连、乌梅、黄柏比例分别为0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1的复方中药对河流弧菌进行体外抑菌实验;将质量分数2.2%复方中草药与中西药联用复方分别添加到基础饲料中,投喂感染河流弧菌的斜带石斑鱼73 d,研究中西药对石斑鱼河流弧菌病治疗效果。其中,试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的黄连、乌梅、黄柏比例分别为0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1,试验组Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的黄连、乌梅、黄柏、恩诺沙星配比分别为0.9∶1.3∶0.9∶1.3、1.2∶0.9∶1.0∶0.9、1∶1∶1∶1,另设空白对照组Ⅰ(健康鱼,投喂基础饲料)、Ⅱ(病鱼,投喂基础饲料)和阳性对照组Ⅲ(病鱼,投喂板黄散)、Ⅳ(病鱼,投喂大黄五倍子散)。【结果】黄连、乌梅、黄柏配比1∶1∶1、质量浓度200mg/mL的复方中药对河流弧菌的体外抑菌效果较佳,为最佳配方及用量。40 d病鱼死亡数,对照组Ⅱ对照组Ⅳ对照组Ⅲ试验组Ⅰ试验组Ⅲ试验组Ⅱ试验组Ⅴ试验组Ⅵ试验组Ⅳ对照组Ⅰ,试验组Ⅱ的黄连、乌梅、黄柏比1.2∶0.9∶1.0为疗效最佳的中药复方,试验组Ⅳ的黄连、乌梅、黄柏、恩诺沙星比为0.9∶1.3∶0.9∶1.3为疗效最佳的中西药联用复方。【结论】中药复方及中西药联用复方均可较好治疗斜带石斑鱼河流弧菌病,后者药效优于前者。     

飞机草总黄酮体外抑菌活性与体内抗大肠埃希菌感染效果

提取飞机草(Eupatorium odoratum Linn.)总黄酮,从抑菌圈、最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)等方面探讨飞机草总黄酮对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)的体外抑菌活性;经腹腔注射大肠埃希菌感染小鼠后,灌胃给予飞机草总黄酮,观察供试小鼠腹泻率,测定小鼠粪便大肠埃希菌数及血清抗体水平(IgM、IgA和IgG),评价飞机草总黄酮的体内抗感染作用。结果表明,金黄色葡萄球菌对飞机草总黄酮最为敏感,其抑菌圈直径为19.50 mm,MIC为0.015 6 g/m L,MBC为0.031 3 g/m L;160 mg/kg的飞机草总黄酮可降低小鼠腹泻率和粪便大肠埃希菌数(P0.01),提高血清IgA(P0.01)和IgG含量(P0.05)。飞机草总黄酮具有体内、体外抗菌作用。     

嗜水气单胞菌控菌药物配方的筛选

应用药敏纸片法测定63种抗菌药物对ML316、B-Ah6、TPS30、9617、YT-1、YT-715、ZY00-1、CQ-1、CHS-2、HB-04、JXO1-1、A.h1、A.h标准株、B-2、ATCC7966、0081、0030、JS70322NA等18株嗜水气单胞菌的敏感性,选择敏感药物硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、硫酸新霉素、盐酸米诺环素、硫酸链霉素测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果显示:MIC≤12.5 mg/L的药物,硫酸新霉素占61.11%,盐酸米诺环素占94.44%,硫酸庆大霉素占72.22%;MBC≤25mg/L的药物,硫酸新霉素占50%,盐酸米诺环素占72.22%,硫酸庆大霉素占55.56%,优于硫酸阿米卡星、硫酸链霉素,但硫酸庆大霉素均匀度不佳,因而硫酸新霉素、盐酸米诺环素对实验菌株抑制和杀灭能力较强;硫酸新霉素、盐酸米诺环素与增效剂甲氧苄氨嘧啶(TMP)分别以8∶2∶1和9∶1∶1比例混合配伍,加入TMP对实验菌株的MIC和MBC值较不加TMP显著下降,MIC值提高66.67%,MBC值则提高96.67%。综合原料成本,以硫酸新霉素、盐酸米诺环素与TMP比例分别为9∶1∶1为配方药物,制作药物饲料,以健康锦鲤和JS70322NA菌株为对象,开展预防和治疗临床评价实验,结果显示:配方药物具有良好的预防和治疗效果,实验组鱼体表症状不明显、临床预防和治疗实验各梯度给药剂量的死亡率均比对照组下降40%~60%。     

壳聚糖对腐生葡萄球菌的作用机制

【目的】探究壳聚糖处理对腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophytic)的作用机制。【方法】通过光密度值结合菌液澄清度法综合确定壳聚糖对腐生葡萄球菌的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC),分析其在MIC与2MIC的壳聚糖作用下的微生物生长曲线、电导率值、碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,AKP)含量、过氧化氢酶(Catalase,CAT)含量、苹果酸脱氢酶(Malatedehydrogenase,MDH)含量与生物膜生成量等指标变化,并结合扫描电镜(ScanningElectronMicroscopy,SEM)观察其作用后对菌体细胞形态变化影响,综合评价壳聚糖处理对腐生葡萄球菌的作用机制。【结果与结论】壳聚糖对腐生葡萄球菌的MIC为1.25 mg/mL;菌体经MIC和2MIC处理后,其正常生长受到抑制,细胞壁被破坏,细胞膜通透性改变,CAT与MDH含量降低,其作用效果与壳聚糖浓度正相关;SEM结果显示,与对照CK组对比,腐生葡萄球菌经MIC壳聚糖处理后,菌体形状不规则,表面皱褶;经2MIC壳聚糖处理后,菌体表面产生泡状物且黏附明显,表明壳聚糖使腐生葡萄球菌菌体细胞壁受损,菌体生长受到抑制,胞内保护酶与三羧酸循环中的关键酶活性降低,细胞代谢能力随之下降,细胞膜结构完整度受到破坏,最终导致菌体死亡。     

复方中草药对吉富罗非鱼生长及肠道菌群的影响

将A、B、C三种复方中草药分别按质量分数1.5%的比例添加到罗非鱼商品饲料中,喂养初始体重约16.58±0.48g的吉富罗非罗28d,通过测定罗非鱼的增重率、饲料系数、肠道菌群等指标,研究三种复方中草药制剂对罗非鱼生长性能及肠道菌群的影响。结果显示:三种复方中草药制剂对罗非鱼的增重率、成活率、饲料系数等生长性能指标虽无显著影响(P>0.05),但与对照组相比,添加1.5%的复方中草药制剂C可使吉富罗非鱼的增重率提高10.82%,饲料系数降低4.71%,蛋白质效率提高15.68%;三种复方中草药制剂均可显著促进罗非鱼肠道细菌、双歧杆菌、乳酸杆菌的生长(P<0.05),C方中草药制剂还可显著抑制大肠杆菌生长(P<0.05)。结果表明,C方中草药制剂可显著促进罗非鱼肠道中乳酸杆菌等有益菌群的增殖,抑制大肠杆菌生长,从而有效促进罗非鱼生长。     

一种复方中草药饲料添加剂在红笛鲷网箱养殖中的应用

将黄芪、当归、甘草和山楂等粉碎后按一定比例配伍制成复方中草药饲料添加剂后,按质量分数0.5%、1.0%、1.5%和2.0%添加到基础饲料中,连续投喂红笛鲷(体重234.95±19.26 g,体长24.76±1.42 cm)56 d,研究复合中草药制剂对红笛鲷生长、成活、免疫和抗病力的影响。结果表明,基础饲料中添加本复方中草药饲料添加剂能够显著促进红笛鲷的生长,增强其血清中的抗菌活力和溶菌酶活力,提高红笛鲷成活率及其对溶藻弧菌的免疫保护率,其中以添加1.5%(质量分数)和连续饲喂28 d效果为最佳(P<0.01)。     

异育银鲫气单胞菌病原菌鉴定和药敏试验

从患病异育银鲫体内分离到5株可疑菌株,经API 20NE细菌生化鉴定,YCS07-03和YZ07-11株鉴定率为99.2%和99.3%。注射感染中5×108 CFU.mL-1剂量组表现出较强的致病性,12 d死亡率100%。菌株在营养肉汤培养液中呈均匀混浊状;在营养琼脂平皿中呈灰白色半透明菌落;在血琼脂培养基中呈光滑灰白色菌落,YZ07-11株出现透明的β溶血环;在TCBS培养基呈黄色菌落;在SS和麦康凯培养基中形成无色透明的扁平菌落。经负染电镜观察,菌株两端圆,呈直杆状,无芽孢,极生单鞭毛,菌株大小(短径×长径)分别为1.53μm×2.71μm和0.80μm×2.12μm。菌株经生化实验鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。试验结果表明:菌株对丁胺卡那霉素、头孢噻肟、庆大霉素、左氟沙星、复合磺胺、氟嗪酸、洛美沙星、复方新诺明、链霉素和新霉素均产生高度敏感;对万古霉素为中度敏感;氨苄青霉素、羧苄青霉素、强力霉素和青霉素产生耐药。     

Antibacterial activity of extracts from <Emphasis Type="Italic">Zostera marina</Emphasis> against pathogens of <Emphasis Type="Italic">Apostichopus japonicus</Emphasis> skin ulceration disease

The purpose of this study was to investigate the antibacterial activity of extracts from Zostera marina against the pathogens of Apostichopus japonicus skin ulceration disease. When 95% ethanol (v/v) solvent was used to extract Zostera marina at 50°C, aqueous extract (ZA) showed obvious bacteriostatic effects on the tested bacterial strains (inhibition halo diameters between 8.23 mm and 13.62 mm), whereas the ethyl acetate extract (ZE) was almost inactive. The minimal inhibitory concentration (MIC) of ZA against four pathogens were homogeneous at 12.8 g L⁻¹. ZA components were analyzed by thin layer chromatography (TLC) assay and six fractions were obtained. In another study, the six fractions showed inhibitory effects against the tested bacteria while their functions seemed to counteract the ZA activity.     

A Study on the Meat and Bone Meal and Poultry By-product Meal as Protein Substitutes of Fish Meal in Practical Diets for Litopenaeus vannamei Juveniles

1　Introduction　Proteinisanimportantnutritionalingredientofaquaticfeed .Thehighproteinneedsoffish ,shrimpandmostotheraquaticanimalsissuppliedmainlybyfishmeal (WilliamsandBarlow ,1996 ) .Recently ,thefishmeal,asamainproteinsourceofaquaticfeedisshort suppliedintheinternationalmarketanditspriceisbecominghigherandhigher .Therefore ,itisnecessarytofindsubstitutesoffishmealasaproteinsourceofaquaticfeed .　Someotheranimalby productmealssuchasmeatandbonemeal (MBM )andpoultryby productmeal(PBM )ha…     

3种免疫途径对嗜水气单胞菌灭活疫苗保护作用的影响

应用间接ELISA方法,研究经嗜水气单胞菌疫苗浸泡、口服、注射免疫后鳜皮肤、肠道黏液和血清中抗体的变化关系,揭示鳜对3种免疫途径的免疫应答效果。结果显示:黏液抗体产生快(7 d达到峰值),但持续时间短,抗体水平低(213);血清抗体产生慢(28 d方达峰值),但持续时间长,抗体水平高(225)。不同方式免疫鳜后均产生远高于对照组的抗体滴度(P<0.05)。注射组产生的抗体水平高(225),免疫保护率最理想(70.6%);口服组相对另两个实验组,其抗体峰值(215)和免疫保护率(41.2%)均较低;浸泡组在皮肤黏液产生水平和溶菌酶含量方面,产生较好的免疫效应,分别为213和178μg/mL,但相对保护率仅为47.1%,低于注射组的70.6%。浸泡和口服组可诱发局部黏膜免疫,在抗体动态变化方面表现出相似的规律且峰值时间早于注射组。初步推断浸泡和口服可以直接刺激鱼体黏膜组织产生局部的特异性抗体。     

波吉卵囊藻对抗生素的敏感性及其无菌化培养

研究了青霉素、链霉素、庆大霉素和卡那霉素对波吉卵囊藻生长的影响,采用4种方法添加抗生素获得无菌藻株,比较波吉卵囊藻除菌前后的生长特点。结果表明:青霉素和链霉素浓度为1000IU/mL时,对波吉卵囊藻生长无明显影响;庆大霉素和卡那霉素浓度达500IU/mL时,对波吉卵囊藻生长无明显影响。微藻培养液中细菌对抗生素敏感性实验表明,除青霉素外,链霉素、庆大霉素和卡那霉素均对藻液中细菌有明显抑制作用。采用4种方法添加抗生素,均可获得无菌藻株。与未除菌时相比,无菌的波吉卵囊藻不易老化。