二色裂江珧EST和SOD同工酶组织特异性研究

取二色裂江珧 (Pinna bicolor)的消化盲囊、肾脏、后闭壳肌肌肉、外套膜和鳃等 5种组织 ,用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳对酯酶 (EST)和过氧化物歧化酶 (SOD)同工酶在上述组织中的表达和分布进行了比较研究 ,并对酶谱表型及位点表达进行了分析。结果表明 ,二色裂江珧组织内的 EST和 SOD存在不同程度的组织特异性 ,EST共检测出 15条酶带 ,SOD检测出 8条酶带 ,且两种同工酶在消化盲囊中活性最高。推测 SOD由 2个座位编码 ,可分为 s- SOD二聚体和 m- SOD四聚体     

马氏珠母贝养殖群体两种规格个体的类胡萝卜素含量比较

以马氏珠母贝育种对照群体为实验材料,从群体中选择生长差异个体分别构成大规格与小规格子群体,测定两个子群体鳃、肝胰腺、闭壳肌、外套膜边缘膜与外套膜中央膜类胡萝卜素含量。结果表明:大规格与小规格子群体的鳃、肝胰腺、闭壳肌、外套膜边缘膜与外套膜中央膜的类胡萝卜素含量差异不显著(P0.05),大规格子群体各组织的类胡萝卜素含量略大于小规格子群体。大与小规格子群体肝胰腺的类胡萝卜素含量显著高于其它4种组织(P0.05)。子群体对类胡萝卜含量影响不显著(P0.05),组织对类胡萝卜含量影响显著(P0.05)。肝脏是马氏珠母贝类胡萝卜素转化及沉积的主要器官之一。     

马氏珠母贝细胞周期分裂基因CDC45基因特征、表达量与性状相关分析

采用RACE技术克隆了马氏珠母贝细胞周期分裂基因45(Pm-CDC45)全长序列,利用荧光定量PCR检测该基因在闭壳肌、鳃、性腺与外套膜组织的表达量,并估计基因表达量与金黄壳色第3代选育群体壳高性状的相关性。结果表明:Pm-CDC45基因序列全长为2 091 bp,5′非编码区(5′UTR)为157 bp,3′非编码区(3′UTR)为34 bp,其中开放阅读框为1 967 bp,编码655个氨基酸;Pm-CDC45在各组织的相对表达量存在显著差异(P0.05),其中闭壳肌表达量最高,鳃和性腺为其次,外套膜最低;Pm-CDC45基因相对表达量与选育群体壳高性状与存在显著的正相关(r=0.531,P0.05);马氏珠母贝Pm-CDC45为影响壳高性状基因。     

马氏珠母贝载脂蛋白-2基因的克隆与表达分析

以RACE技术克隆获得马氏珠母贝载脂蛋白-2(Pm-ApoL2)基因cDNA全长序列,以传统萃取法提取黄色与白色闭壳肌个体的类胡萝卜素,以荧光定量技术检测Pm-ApoL2基因在各个组织中的表达量及黄与白闭壳肌个体的Pm-ApoL2表达量。结果表明,Pm-ApoL2基因cDNA序列全长1 328 bp,开放阅读框(ORF)长705 bp,编码234个氨基酸,5′非翻译区(5′UTR)长342 bp,3′UTR长281 bp。Pm-ApoL2在肝胰腺中表达量最高,其后依次是外套膜、鳃、闭壳肌,其中肝胰脏表达量显著大于其它3个组织(P0.05)。黄、白色闭壳肌个体之间的类胡萝卜素含量和Pm-ApoL2的表达量都存在显著性差异(P0.05),且二者的类胡萝卜素含量与Pm-ApoL2表达量呈显著正相关。Pm-ApoL2基因为马氏珠母贝类胡萝卜素代谢候选基因。     

大珠母贝胰岛素相关肽受体基因的克隆与表达

【目的】克隆大珠母贝(Pinctada maxima)胰岛素相关肽受体PmIRR基因,并分析其在不同组织中的表达。【方法】利用c DNA快速末端克隆技术(RACE)获得大珠母贝PmIRR基因cDNA全长序列。荧光定量PCR技术分析PmIRR在闭壳肌、鳃、外套膜边缘区、套膜区、中央区、足和肝胰腺等组织的表达模式。【结果与结论】PmIRR基因全长6 009 bp,5′非编码区(UTR)615 bp、3′UTR 764 bp、开放阅读框(ORF)长4 629 bp、编码1 542个氨基酸。序列分析表明,PmIRR含有保守结构域Fu、3个FNⅢ结构域和Tyrkc结构域,并含有信号肽和2个跨膜结构域。PmIRR在大珠母贝各个组织存在差异表达,在鳃、肝胰腺和外套膜边缘区中显著高表达。     

镉、硒胁迫下华贵栉孔扇贝消化腺差异蛋白表达

【目的】应用蛋白组学技术解析镉（Cd）、硒（Se）胁迫对华贵栉孔扇贝（Chlamys nobilis）组织中蛋白表达的影响,为扇贝金属蓄积和耐受机制研究提供数据。【方法】将华贵栉孔扇贝置于分别含有Cd、Se、Cd+Se的海水中,采用非标记定量Label-free蛋白组学技术分析对照组和处理组扇贝消化腺的差异表达蛋白（differentially expressed proteins,DEPs）,并对其进行GO富集、KEGG通路富集和蛋白质相互作用网络分析。【结果】CT组的闭壳肌和外套膜中的Cd质量分数显著高于鳃、性腺和消化腺（P <0.05）。除闭壳肌外,在镉、硒、Cd+Se胁迫下扇贝其他组织中的Cd或Se质量分数均显著增加（P <0.05）。Se+Cd胁迫下扇贝闭壳肌、外套膜和消化腺中的Se质量分数显著降低（P <0.05）,说明扇贝中Se和Cd相互拮抗。共鉴定出887个DEPs;与对照组相比,Se组45个上调蛋白、9个下调蛋白,Cd组15个上调蛋白、10个下调蛋白,CdSe组13个上调蛋白、3个下调蛋白。生物信息学分析发现,Cd、Se胁迫的DEPs主要涉及参与细胞...     

管角螺不同组织同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺垂直板梯度凝胶电泳技术，对管角螺7种组织（外套膜、肌肉、肝脏、心脏、生殖腺和缠卵腺）的5种同工酶（EST、SOD、ME、MDH、LDH）进行了分析，结果表明：5种同工酶存在不同程度的组织特异性，SOD、EST、LDH在肝脏组织中有较高活性，而MDH、ME在心脏组织中活性较高。     

3种江珧同工酶遗传标记

通过对江珧科的栉江珧、旗江珧及二色裂江珧三物种的 5种组织 (消化盲囊、肾组织、外套膜、后闭壳肌和鳃组织 )进行垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术 ,研究江珧科的 SOD、EST同工酶酶谱 ,结果表明 ,不同种间的个体其酶谱表型有稳定的差异 ,同属的种间差异小于不同属的种间差异 ,即酶谱的差异程度与形态分类学中的亲缘关系相关。可利用其酶谱表型具有种特异性作为一种蛋白分子标记 ,应用于江珧物种尤其是经济品种的鉴定上     

月鳢不同组织中乳酸脱氢酶和酯酶同工酶的比较

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对月鳢十种组织中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和酯酶（ＥＳＴ）同工酶进行了比较研究,结果表明,月鳢组织内ＬＤ睡ＥＳＴ具有明显的组织特异性,ＥＳＴ由２个座位编码,ＬＤＨ则由Ｌｄｈ－ａ、Ｌｄｈ－ｂ全两个基因编码。     

月鳢不同组织中乳酸脱氢酶和酯酶同工酶的比较

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对月鳢十种组织中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和酯酶（ＥＳＴ）同工酶进行了比较研究,结果表明：月鳢组织内ＬＤＨ和ＥＳＴ具有明显的组织特异性,ＥＳＴ由２个座位编码,ＬＤＨ则由Ｌｄｈ－ａ、Ｌｄｈ－ｂ两个基因编码。     

二色裂江珧EST和SOD同工酶组织特异性研究

取二色裂江珧（Ｐｉｎｎａ ｂｉｃｏｌｏｒ）的消化盲囊、肾脏、后闭壳肌肌肉、外套膜和鳃等５种组织,用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳对酯酶（ＥＳＴ）的过氧化物歧化酶（ＳＯＤ）同工酶在上述组织中的表达和分布进行了比较研究,并对酶谱表型及位点表达进行了分析。结果表明,二色裂江珧组织内的ＥＳＴ和ＳＯＤ存在不同程度的组织特异性,ＥＳＴ共检测出１５条酶带,ＳＯＤ检测出８条酶带,且两种同工酶在消化盲囊中活性最高。推测Ｓ     

马氏珠母贝接头蛋白CIKS的基因克隆与组织表达分析

【目的】探究马氏珠母贝接头蛋白CIKS(PmCIKS)在马氏珠母贝免疫反应中的作用。【方法】采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得PmCIKS基因cDNA全长序列,运用生物信息学手段分析该序列,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测PmCIKS基因在马氏珠母贝7个组织中的表达模式。【结果】PmCIKS基因cDNA全长为1 987 bp,其中5′UTR长为228 bp,3′UTR长为148 bp,包含24 bp的ploy A,开放阅读框(ORF)为1 611 bp,编码536个氨基酸,预测其分子质量约为61.3 ku,等电点为7.01。物种间CIKS有较高的保守性。PmCIKS在马氏珠母贝肝胰腺、性腺、闭壳肌、鳃、血细胞、外套膜和足中均有表达,其中在血细胞中表达量最高。     

马氏珠母贝PmLec-8基因的克隆与表达分析

Lec-8(C-type lectin 8)属于C-型凝集素超家族,在机体抵抗微生物的感染过程起重要的作用。本研究采用RACE技术克隆出了PmLec-8基因cDNA全长序列,并且运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了PmLec-8基因在马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)不同组织中的表达模式。结果显示:PmLec-8基因序列全长737 bp,其中5′UTR长为36 bp,3′UTR长为113 bp,开放阅读框(ORF)为588 bp,编码195个氨基酸,预测其分子质量约为22.90 ku,等电点为5.17;PmLec-8具在一个糖类识别结构域(Carbonhydrate-recognition domain,CRD),符合典型的C型凝集素(C-type lectin)家族特征;多序列比对结果表明物种间Lec-8的同源性较低,4个半胱氨基酸残基高度保守;qRT-PCR数据分析表明,PmLec-8在马氏珠母贝肝胰腺、性腺、闭壳肌、鳃、血细胞和外套膜中均有表达,其中肝胰腺中表达量最高,其次是鳃,差异具统计学意义(P0.05)。     

马氏珠母贝Su(H)基因克隆与组织特异性表达

Su(H)基因(Suppressor of Hairless gene)对生物体细胞的分化、增殖和凋亡起重要的调控作用。根据马氏珠母贝(Pinctada martensii)转录组数据库中注释为Su(H)的unigene序列设计基因特异性引物,应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得了马氏珠母贝Su(H)[pm-Su(H)]基因cDNA全长序列。结果表明:pm-Su(H)基因全长3 830 bp,其中开放阅读框含有1 920 bp,编码640个氨基酸残基,5'UTR为1 568bp,3'UTR为342 bp,含有27 bp polyA;预测其分子质量为70.6 ku,等电点为7.38;多序列比对显示,pm-Su(H)与其他物种的Su(H)有较高的保守性,与牡蛎(Crassostrea gigas)的同源序列高达80%;荧光定量PCR分析表明,pm-Su(H)在马氏珠母贝闭壳肌、鳃、珍珠囊、外套膜、肝胰脏、性腺、足、血淋巴等8组织中均有表达,其中以性腺中表达量最高,其次是珍珠囊和外套膜。     

3种江珧同工酶遗传标记

通过江珧科的栉江珧、旗江珧及二色裂江珧三种物的５种组织（消化盲囊、肾组织、外套膜、后闭壳肌和鳃组织）进行垂直板状聚丙烯烯酰胺凝胶电泳分离技术,研究江珧科的ＳＯＤ、ＥＳＴ同工酶酶谱,结果表明,不同种间的个体其酶谱表型有稳定的差异,同属的种间差异小于不同种的种间差异,即酶谱的差异程度与形态分类学中的亲缘关系相关。可利用其酶谱表型具有种特异性作为一种蛋白分子标记,应用于江珧物种尤其是经济品种的鉴定上。     

褐菖鲉同工酶的组织特异性及群体遗传结构

用聚丙烯酰胺垂直板不连续凝胶电泳法对湛江海域褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)心、肝、肾、性腺、肌肉、鳃、眼、脑等8种组织的12种同工酶(ADH、a-AMY、CAT、EST、GDH、LDH、MDH、ME、POD、PPO、SDH、SOD)进行分析。结果表明,12种同工酶均有明显的组织特异性。经筛选,对肝脏和眼的8种同工酶(ADH、EST、LDH、MDH、ME、POD、SDH、SOD)进行群体遗传结构分析,共记录了18个基因位点,其中呈多态性的基因位点有5个(Adh-1、Est-2、m-Pod-1、s-Pod-1、s-Sod-1),多态位点比例(P)为27.78%,平均有效等位基因数(Ae)为1.238 8,平均观测杂合度(Ho)值为0.1401。     

南海海域4种笛鲷的微卫星DNA分析

摘要：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，从20对西大西洋笛鲷（Lutjanus campechamus）的微卫星引物中筛选适用于红鳍笛鲷（L．erythopterus）、勒氏笛鲷（L.russellii）、紫红笛鲷（L.argentimaculatus）和约氏笛鲷（L.johnii）基因组分析的微卫星引物，分析4种笛鲷的遗传多样性及系统发生。经反应条件的优化，从20对引物中筛选出17对可稳定扩增出特异片段的引物。通过测序证实扩增产物含微卫星位点后，以该17对引物对4个种的群体进行遗传多样性分析。其中16对可在约氏笛鲷、勒氏笛鲷、紫红笛鲷基因组中扩增出重复性好的特异性条带，分别有65％、65％、60％呈现出种内多态：15对可在红鳍笛鲷中扩增出重复性好的特异性条带，并且全部呈现出种内多态。四种笛鲷中，红鳍笛鲷的多态性最高，高度多态基因座占检测座位的66．67％；勒氏笛鲷的多态性最低，低度多态基因座占43．75％。获得3个种间特异性分子标记。用风和DA两种方法计算4种笛鲷的遗传距离，构建了系统发生树。     

马氏珠母贝热休克蛋白HSP60基因的克隆与表达分析

运用cDNA末端快速扩增（RACE）技术,克隆马氏珠母贝（Pinctadamαrtensii）热休克蛋白HSP60基因 cDNA全序列。序列全长2495坤,开放阅读框（ORF） 1734坤,编码577个氨基酸,预测的分子量约为61.79阳, 理论等电点为5.4905＇非翻译区（ 5＇UTR）长150坤, 3＇非翻译区（3＇UTR）长611 bp。同源性比对分析结果,马 氏珠母贝HSP60基因与与太平洋长牡妨（Crωsos仰a gIgω）和光滑双蹄螺（Biomphalaria glabrata）的同源性较 高,达到75%。氨基酸序列分析显示,马氏珠母贝HSP60氨基酸序列具有典型的rnt-HSP60特征序列、C-末端典型的GGM重复基序和一个ATP结合结构域。荧光定量数据分析发现,该基因在闭壳肌、外套腹、血淋巴、肝膜腺、性腺、躁、等6个组织中具有表达,在肝膜腺中表达量最高,腮中次之,而在血液和闭壳肌中仅有少量表达;在脂多糖剌激后,该基因表达水平上调,12 h后达到最大值,之后又逐渐下调,均高于对照组,差异具统计学意 义（P〈0.05）。     

马氏珠母贝Perlucin基因序列特征及其SNP与耐低温性状的关系

【目的】克隆马氏珠母贝（Pinctada fucata martensii）新的凝集素分子基因,命名为Perlucin,研究在低温胁迫下马氏珠母贝Perlucin的表达以及与抗低温性状相关的单核苷酸多态性（SNP）位点。【方法】根据马氏珠母贝基因组中Perlucin基因序列设计引物,克隆Perlucin基因全长;用生物信息学方法分析Perlucin的结构和理化特征;设计17和22℃（对照）2个温度组,对马氏珠母贝进行低温胁迫实验,用实时荧光定量PCR检测低温胁迫下Perlucin表达量的变化;筛选和比较分析马氏珠母贝耐低温选育系（R）F3和北部湾野生群体（W）的Perlucin外显子区的SNP位点和单倍型。【结果】马氏珠母贝Perlucin全长631 bp,编码152个氨基酸;包含1个信号肽和1个C型凝集素结构域。同源分析表明,马氏珠母贝Perlucin与紫贻贝（Mytilus galloprovincialis）Perlucin的亲缘性最近。Perlucin在鳃中表达量最高,其次为足和肝胰腺。低温胁迫时,鳃组织中Perlucin基因在17℃低温组的表达量呈先升高后降低的趋势,在12 ...     

马氏珠母贝外套膜中央膜与边缘膜荧光定量PCR分析中内参基因的筛选

为筛选能在马氏珠母贝外套膜边缘膜与中央膜区域稳定表达的内参基因,应用荧光定量PCR 技术,对3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、β-肌动蛋白（β-actin）、胆色素原脱氨酶（PBGD）、微管蛋白（TUB）、TATA 盒结合蛋白（TBP）、磷脂酶A2（PLA-2）、葡萄糖苷酶（GUSB）、18S 核糖体rRNA（18SrRNA）等8 个常用的内参基因在马氏珠母贝外套膜边缘膜与中央膜区域的表达情况进行分析,并利用geNorm、NormFinder、BestKeeper 及RefFinder 软件对8 个内参基因的表达稳定性进行分析.结果表明：8 个内参基因均可获得特异性扩增产物,但稳定性各异, 其在外套膜边缘膜和中央膜区的表达稳定性顺序依次为PBGD/TBP〉TUB〉GUSB〉18SrRNA〉PLA-2〉GAPDH〉 β-actin;在荧光定量PCR 中,PBGD 和TBP 在马氏珠母贝外套膜边缘膜和中央膜区的表达比较稳定,为研究贝壳矿化机制中理想的内参基因.