单体全三倍体太平洋牡蛎育苗技术的研究

本文利用四倍体太平洋牡蛎雄贝与二倍体雌贝杂交生产出的全三倍体牡蛎,幼虫经常规方法培育至60%出现眼点幼虫时,投放聚乙烯塑料纸、废旧筛绢网和聚乙烯波纹板作附着基,经过附着变态后,当达到2～3 mm时,可脱基生产单体牡蛎,也可中间培育至10 mm边脱基边出售到养殖单位进行养殖,采用此法生产的单体牡蛎方法简便,成本低,脱基致残率极低,是一种生产单体牡蛎好方法之一.2005-2006年在50m3水体中生产单体牡蛎1000万粒 (1cm),单位水体出苗量为20万粒/m3.     

低温诱导太平洋牡蛎产生三倍体

用低温休克法诱导太平洋牡蛎产生三倍体。实验结果表明,２～７℃的低温均可获 得三倍体,其中４～５℃的效果较好,最优水平组合为,处理温度为４～５℃,处理时刻为受精 后１５ｍｉｎ,处理持续时间为１５ｍｉｎ,最高三倍体率为３６．８％。影响三倍体诱导率的３因素的顺序为处理持续时间→处理时刻→处理温度。     

低温诱导太平洋牡蛎产生三倍体

用低温休克法诱导太平洋牡蛎产生三倍体。实验结果表明,２￣７℃的低温均可获得三倍体,其中４￣５℃的效果较好,最优水平组合的,处理温度为４￣５℃,处理时刻为受精后１５ｍｉｎ,处理持续时间为１５ｍｉｎ,最高三倍体率为３６．８％,影响三倍体诱导率的３因素的顺序为处理持续时间→处理时刻→处理温度。     

太平洋牡蛎杂交三倍体与诱导三倍体的生长比较

本文以中国太平洋牡蛎二倍体自交作为对照,比较了诱导三倍体群体及其杂交三倍体的早期表型性状。通过对各试验组卵径、卵裂率、D幼率、D形幼虫大小、生长、存活率和倍性等指标进行测定,进一步评估了2种诱导方法的有效性。结果表明:与诱导三倍体群体相比,杂交三倍体表现出明显优势,D幼率、D形幼虫大小均大于诱导三倍体群体,且差异显著(P<0.05);稚贝期壳长和壳高生长也显著快于诱导三倍体群体(P<0.05)。至附着,杂交三倍体的存活率很高,显著优于诱导三倍体群体。就三倍体率而言,杂交三倍体达到100%,而诱导三倍体群体仅为51.00%±11.79%。由上得知,杂交三倍体更适合应用于大规模生产。     

太平洋牡蛎杂交三倍体与诱导三倍体的生长比较

本文以中国太平洋牡蛎二倍体自交作为对照,比较了诱导三倍体群体及其杂交三倍体的早期表型性状.通过对各试验组卵径、卵裂率、D幼率、D形幼虫大小、生长、存活率和倍性等指标进行测定,进一步评估了2种诱导方法的有效性.结果表明:与诱导三倍体群体相比,杂交三倍体表现出明显优势,D幼率、D形幼虫大小均大于诱导三倍体群体,且差异显著(P＜0.05);稚贝期壳长和壳高生长也显著快于诱导三倍体群体(P＜0.05).至附着,杂交三倍体的存活率很高,显著优于诱导三倍体群体.就三倍体率而言,杂交三倍体达到100％,而诱导三倍体群体仅为51.00％士11.79％.由上得知,杂交三倍体更适合应用于大规模生产.     

利用四倍体与二倍体杂交规模化培育全三倍体太平洋牡蛎苗种

利用引进美国的四倍体太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)雄贝与我国的二倍体雌贝杂交，规模化培育全三倍体牡蛎苗种。杂交组的平均受精率为48．27％，对照组为80．53％，杂交组较低的受精率可能与四倍体雄贝的精子活力及精子数量有关。杂交组的孵化率、幼虫成活率和变态率分别为81．10％，42．3％和1．82％，对照组分别为79．96％，37．0％和1.80％。杂交组共培育出稚贝1200万粒。不同时期取样的流式细胞仪分析结果表明，杂交组的三倍体率为100％。     

利用咖啡因和热休克诱导太平洋牡蛎三倍体

报道采用咖啡因和热休克相结合的方法 ,抑制受精卵第二极体释放诱导太平洋牡蛎三倍体的优化方案。实验结果表明 ,三倍体诱导率随着咖啡因浓度的增高而增高 ,D形幼虫的孵化率却随着咖啡因浓度的增高而降低 ;所进行 30～ 36℃热休克温度试验 ,其对三倍体诱导率影响不大 ,但对孵化率影响明显。在 2 3～ 2 5℃条件下 ,当 50 %受精卵出现第一极体时 ,用浓度为 2 g/ L的咖啡因 ,结合 33℃± 1℃的热休克 ,处理牡蛎受精卵 15min,三倍体诱导率达 80 %以上 ,孵化率在 4 5%左右。通过此法诱导的三倍体群幼虫的成活与生长情况与其二倍体群体无明显差异。     

二倍体和三倍体太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)繁殖前后生化成分及氨基酸组成的比较研究

对太平洋蛎二倍体和三倍体在繁殖前后的几种生化成分和氨基酸组成进行了比较研究，为牡蛎的生理生化研究提供了基础数据。结果显示：太平洋牡蛎的总糖，糖原，脂肪和蛋白的含量与其繁密切相关，二倍体牡蛎在繁殖后的总糖，糖原，脂肪的含量比繁殖前分别降低了24．31％，30．37％，14．91％，三倍体分别降低了9．45％，7．17％，20．29％，而二倍体和三倍体牡蛎粗蛋白的含量在繁殖后较繁殖前分别增高了14．91％，12．285，表明了糖类和脂肪是牡蛎殖能量的主要来源，繁殖前三倍体牡蛎的糖原含量比二倍体高23．30％，繁殖后二倍体糖原含量明显降低，三倍体的糖原含量比二倍体高了73．83％，表明三倍体牡蛎由于可育性低而体内一直保持较高水平的糖原含量，从而在繁殖季节也保持了鲜美的口味。二倍体太平洋牡蛎与三倍体的氨基酸组成和含量的分析比较也表明，二倍体牡蛎的氨基酸组分在繁殖前后变化较大，而三倍体的氨基酸组分相对稳定。     

长牡蛎(Crassostrea gigas)微卫星克隆快速分离及特性分析

采用磁珠杂交选择和PCR筛选法，从长牡蛎DNA选择片段文库中，快速分离含有微卫星序列的阳性克隆。结果表明，在筛选的200个白色菌落中，56个克隆含有重复次数5以上的微卫星序列，其中41个(20．5％)有随机侧翼区，可以进行引物设计，12个缺乏足够的侧翼序列，3个为中断的微卫星序列。此外，还获得两个小卫星克隆。在获得的微卫星序列中，完全的占54．7％，不完全的占20．8％，复合的占24．5％。除探针中使用的CA重复单元外，还观察到CT、ACT、CGCA、CACT、GACT、GCAC、CCTTA和CCTCA的重复序列。微卫星重复次数主要集中在5-30次之间，占71．7％，最高为60次。本研究中构建的长牡蛎(CA)n富集微卫星文库将为以后开发未知微卫星标记提供帮助。     

提高太平洋牡蛎三倍体诱导率的几项技术措施

本文根据1996－2000年从事牡蛎三倍体育苗与养殖技术研究的生产试验中，主要从加强亲贝蓄养，让亲贝充分成熟；卵子的离体海水促熟培育，让卵子发育同步；洗卵处理；受精卵密度的掌握；三倍体诱导参数；外部环境条件等六方面探讨了如何提高牡蛎三倍体诱导率，以满足规模化生产的需要，推动牡蛎三倍体养殖业的发展。     

臭氧处理海水在太平洋牡蛎育苗上的应用研究

本文主要研究了用臭氧处理海水在经过连续充气暴气12h、24h、不经充气暴气的处理水及没经臭氧处理的正常海水，进行太平洋牡蛎受精卵的孵化和幼虫培育实验，结果表明：受精卵在经过24h暴气的处理，水瞬化率最高为94％，其次为没经过处理的正常海水为81％，暴气12h为19％，没经过暴气为0；幼虫培养在没经过处理的正常海水中生长最快，成活率为85％，其次为经24h暴气的处理水，成活率为80％，暴气12h为23％，没经过暴气为0，从而为臭氧处理海水在贝类育苗上的应用提供一定的指导。     

长牡蛎两个Dmrt家族基因的时空表达

本文以长牡蛎27个幼虫发育阶段个体以及成体的5个组织织作为实验材料,采用实时荧光定量PCR技术对Dmrt家族中的2个基因（CgDsx和CgDmrtA2）的主要对长牡蛎Dmrt家族中的2个基因（CgDsx和CgDmrtA2）在幼虫时期和成体组织中的表达模式以及在性别决定中可能发挥的作用进行了研究。采用实时荧光定量PCR技术对幼虫27个发育阶段以及成体5个组织的表达进行了测定。结果表明,长牡蛎CgDsx基因在胚胎发育初期有大量表达,其中囊胚期到担轮幼虫初期表达量最高从囊胚期到担轮幼虫初期表达量最高,其后之后表达量开始降低,在D形幼虫后期之后一直维持在极低的表达水平,此后仅在成体的雄性性腺中具有高度表达。该结果表明由此可见,CgDsx 可能也对早期胚胎发育起一定调控作用,除了同时参与了性别决定外,可能也对早期胚胎发育起一定调控作用。CgDmrtA2在长牡蛎所有组织中均有表达,各组织间表达差异不显著,在长牡蛎D形幼虫至壳顶后期表达量较高,表明其参与了胚胎中后期的发育过程说明它参与了胚胎中后期的发育过程,可能与神经的形成相关,但是其具体功能还需要进一步研究。     

两种方法诱导太平洋牡蛎三倍体在生产上的应用效果

本文就太平洋牡蛎三倍体育苗中，常用的低温休克法和6－DMAP法进行了生产性试验比较。其结果为：在三倍体诱导率方面，低温休克的三倍体率低且不稳定，6－DMAP法诱导三倍体率高且稳定；在生长方面，低温休克法诱导的三倍体在养成期的生长和成活均差于6－DMAP法诱导的，三倍体率差异明显，但在幼虫期二者差异不显著。     

太平洋牡蛎受精过程中的精核扩散与成熟分裂

光镜下观察了太平洋牡蛎受精过程中的原核形成和成熟分裂。受精前,卵子处于第一次成熟分裂前期（即生发泡阶段）。精子入卵后开始进行成熟分裂,过程如下：（1）生发泡破裂前精核只进行轻微增大。（2）生发泡破裂,精核迅速去致密,体积迅速增大。（3）第一次成熟分裂结束,精核扩散速度减慢,核内染色体致密环状结构。（4）第二次成熟分裂结束,精核膨胀到最大程度。（5）两性原核形成,准备进行第一次卵裂。在整个受精过程中,核仁一直存在,其体积逐渐减小;有多精入卵并有多个精原核同时形成的现象。     

雄性三倍体长牡蛎繁殖潜力的初步研究

国内外很多人做过三倍体长牡砺的诱导工作，但在三倍体性腺发育及配子活力方面的研究，目前仅见Ａｌｌｅｎ等１９８６年和１９９０年对三倍体的海螂和长蛎异常配子的发生报道。Ｃｏｘ１９９６年研究了悉尼岩牡蛎三倍体性腺发育情况，姜卫国等对三倍体合浦珠母贝的生殖腺进行了观察，李霞［１］对三倍体长牡蛎的性腺发育做了较系统的分析和总结。作者用流式细胞仪对长牡蛎Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ　ｇｉｇａｓ二、三倍体的性腺细胞进行了初步分析，回答了三倍体长牡蛎生殖潜力及性比方面的一些问题，为进一步研究三倍体长牡蛎的生长、繁殖、杂…     

长牡蛎(Crassostrea gigas)贝壳与外套膜中黑色素的提取和鉴定

为了提取和鉴定长牡蛎(Crassostrea gigas)贝壳与外套膜中的黑色物质,选取贝壳与外套膜颜色均为黑色的长牡蛎,将贝壳及外套膜进行粉碎、盐酸水解、水浴加热、乙醚抽脂,从3份贝壳中提取出3份黑色固体物质,从3份外套膜中提取出3份黑色固体物质,将提取的黑色固体溶解于0.01m L/L氢氧化钠水溶液中,在150—500 nm的范围内测定紫外吸收光谱,发现其最大吸收峰在210 nm左右,随着波长增加,其吸光值迅速大幅度下降,与公认的黑色素紫外吸收光谱特征一致,从而首次确定长牡蛎贝壳与外套膜中的黑色物质为黑色素。