一种新的褐藻胶寡糖制备方法--氧化降解法

建立了一种新的褐藻胶寡糖的制备方法,即氧化降解法。通过褐藻胶来源的聚甘露糖醛酸(PM)在不同浓度的过氧化氢、不同温度和不同反应时间下降解优选降解条件。以包含3～11糖单体的寡糖混合物为目标产物,以相应的降解产物的平均分子质量为1500u为选择标准,获得氧化降解法的最佳条件：过氧化氢浓度5％,反应温度90℃,降解时间2h。以该条件降解PM获得的降解产物经圆二色谱、紫外光谱及红外光谱测定表明,制备的寡糖保持了甘露糖醛酸的结构特点。提示该方法可用于褐藻胶寡糖的制备。     

一个新的来自于弧菌QD-5并具有Poly-G内切功能的褐藻胶裂解酶的克隆和性质表征

Seven bacterial clones with alginate-utilizing activity were isolated from rotten kelp. By activity test, the Vibrio sp.QD-5 with the potential alginate-degrading capability was chosen to carry out the draft genome sequencing, and the result showed that the Vibrio sp. QD-5 containing an alginate lyase gene cluster. One of these genes, aly-IV,was cloned and characterized for the first time. After overexpression, Aly-IV, with a molecular mass of about62 kDa and a theoretical isoelectric point(pI) of 5.12, was purified to a specific activity of 1 256.78 U/mg and showed highest activity at 35°C in the Tris-HCl buffer at pH of 8.9. Moreover, the enzyme activity was enhanced by the metal ions of Na~+, K~+ and Mg~(2+) under certain concentration. Aly-IV degraded favorably polyG blocks in an endo-type, yielding monomer and dimer as the main products. Due to its high substrate specificity, Aly-IV could be used as a potential tool for production of polyG oligosaccharides with low degree of polymerization(DP) and for determining the fine structure of alginate.     

弧菌DS32褐藻胶裂解酶基因vralg1的异源表达和酶学性质研究

对从福建省东山湾沉积物样品中筛选到的菌株Vibrio sp. DS32的褐藻胶裂解酶基因vralg1进行克隆和异源表达,并对其酶学性质进行评估。以DS32基因组为模板,克隆褐藻胶裂解酶基因vralg1,构建了pET-vralg1重组表达载体,并在大肠杆菌中实现了异源表达,对重组酶VRALG1的酶学性质、底物特异性和完全降解产物等进行了测定。结果表明：重组酶VRALG1最适温度为35℃,在5～50℃范围内相对酶活力达到80%以上,最适pH为6.5～7.5,在pH为6.0～9.0范围内保温1 h后相对酶活力在90%以上;重组酶VRALG1最大反应速率为5.919 mmol/(L·min),米氏常数为3.712 mmol/L,最适条件下比活力为5.874 U/mg; K⁺、Cs⁺、Na⁺、咪唑和乙醇对酶活性影响较小,5 mmol/L或50 mg/mL浓度下相对酶活力保持90%以上,EDTA对酶的抑制作用明显,1 mmol/L浓度下可使酶完全失活;重组酶VRALG1对海藻酸钠和聚古罗糖醛酸具有较高的降解活性,TLC分析显示产物主...     

印尼热泉菌产热稳定褐藻胶裂解酶的酶学性质研究

以印尼热泉菌为材料,采用以褐藻酸钠为唯一碳源的培养基筛选产褐藻胶裂解酶的菌株,通过16S rDNA序列对产酶菌株进行种属鉴定,并通过硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析从高产酶菌株Aly-B5发酵液上清中纯化获得褐藻胶裂解酶,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明:高产酶菌株经鉴定为Bacillus属;聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)显示纯化的褐藻胶裂解酶Aly-B5分子量为45kDa,该酶最适作用温度为65°C,75°C时的半衰期为110min,最适pH为7.0;Zn~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)对酶活具有明显的抑制作用,但该酶对乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)并不敏感;同时,底物特异性实验表明Aly-B5是一种偏好降解聚古罗糖醛酸(poly G)的双功能裂解酶,降解产物主要是二糖。该酶优良的耐热性使其在海藻高值化利用领域具有潜在的应用前景。     

褐藻胶裂解酶产生菌Vibro sp．OY102的发酵条件优化

对海洋来源的Vibro sp．QY102的产褐藻胶裂解酶的发酵条件进行研究。结果表明，该菌株最适液体培养基成分为（w／v）：0．5％褐藻酸钠；0．4％蛋白胨；0．3％KH2PO4；0．7％K2HPO4·3H2O；2％NaCl；0．01％MgSO4·7H2O，pH=6．0。按3％的接种量接入培养基，30℃150r／min振荡培养120h，产酶达到10．2u／mL，为优化前的4．5倍。Mg^2＋是该菌株产酶所必需的，这在其他褐藻胶裂解酶生产菌株中未见报道。该菌株产酶发酵条件的研究，为褐藻胶裂解酶的大规模制备及应用奠定了基础。     

褐藻胶裂解酶产生菌Vibro sp.QY102的发酵条件优化

对海洋来源的Vibro sp.QY102的产褐藻胶裂解酶的发酵条件进行研究。结果表明,该菌株最适液体培养基成分为(w/v):0.5%褐藻酸钠;0.4%蛋白胨;0.3%KH2PO4;0.7%K2HPO4.3H2O;2%NaCl;0.01%MgSO4.7H2O,pH=6.0。按3%的接种量接入培养基,30℃150 r/min振荡培养120 h,产酶达到10.2 U/mL,为优化前的4.5倍。Mg2 是该菌株产酶所必需的,这在其他褐藻胶裂解酶生产菌株中未见报道。该菌株产酶发酵条件的研究,为褐藻胶裂解酶的大规模制备及应用奠定了基础。     

褐藻胶的生物合成途径与细胞学研究

生物合成的途径决定了褐藻胶分子水平的差异。要深刻地认识褐藻胶结构与功能的关系,必须研究其生物合成途径,才能提高褐藻胶的性能和品位,发挥生物多糖的潜在用途。     

寡糖的分离和结构分析方法

核酸、蛋白质、糖类是生命系统中的主要大分子物质。随着生物化学和分子生物学的发展，科学家们对核酸和蛋白质的研究逐渐深入，对其在决定生命规律方面的作用已有了初步的了解。但相比之下对生物多糖的研究较滞后，尽管糖类的生理意义同样至关重要。在生物体中生物多糖(polysaccharide)多是以糖缀合物(glycoconjugates，即多糖与非糖物质如脂类或蛋白质共价结合而成的糖复合物)的形式存在，如糖蛋白(glycoproteins)，糖脂(glycolipids)和蛋白聚糖(proteoglycan，即由蛋白质和糖胺聚糖通过共价键相连的化合物)。许多糖缀合物中由比较少数分子的单糖(2~14个)缩合形成的寡糖(oligosaccharide)部分具有惊人的多样性、复杂性和微不均一性，而使它与许多重要生理过程紧密相关并具有许多重要的生理功能。目前已知的一些重要功能有：糖蛋白的寡糖组分影响多肽链的正确折叠，防止蛋白水解，提高蛋白的稳定性和溶解性，决定它们在血液中的清除速率，在细胞中作为信息分子调节它们的分泌。糖缀合物中的糖链作为信息分子涉及多细胞生物生命的许多识别过程，如细胞-细胞间的相互作用，细胞的生长分化荷尔蒙-受体和抗原-抗体的相互作用等(Schachter1992；Paulson，1989)。糖缀合物已成为生命科学研究领域的科学前沿。糖的生物学正在受到越来越广泛的重视。糖链结构的阐明对深入理解糖缀合物的功能和结构的相关性具有重要意义。     

微泡菌QZHA1褐藻胶裂解酶MAAL1的酶学性质研究

为探究Microbulbifer sp. QZHA1褐藻胶裂解(Escherichia coli)酶MAAL1的酶学性质,将褐藻胶裂解酶基因maal1构建至pET-28a表达载体并利用大肠杆菌BL21(DE3)进行异源表达。研究发现：重组酶MAAL1与来源于Microbulbifer sp. ALW1菌株的褐藻胶裂解酶(WP＿23625014.1)同源性最高,为93.69%,且与PL7家族蛋白聚为一支;重组酶MAAL1最适温度为35℃,最适pH为7.5,在pH为5.5～10.5范围内保存24 h仍能保持60%以上的酶活力;MAAL1具备良好的耐有机溶剂特性,在测试的9种有机溶剂中,除异丙醇外,其他有机溶剂在添加量达到30%(体积分数)后,酶活力依然保持在59%以上;重组酶MAAL1最适条件下酶活力为4.3 U/mg,米氏常数(K_m)值为1.08 mg/mL,最大反应速率(V_max)为4.75 mg/(mL·min),催化常数(K_cat)值为4.52 s^-1;重组酶MAAL1对聚β-D-甘露糖醛酸(p...     

Vibrio sp.510产褐藻胶裂合酶的底物专一性分析

Vibrio sp.51 0具有很强的产生褐藻胶裂合酶的能力。本实验对该菌发酵产生的褐藻胶裂合酶经疏水色谱除去杂蛋白 ,再经灌注色谱分离得到 3个酶组分峰。经底物专一性检测 ,峰 1和峰 3对聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸均具降解作用 ,峰 2只对聚甘露糖醛酸有降解作用。园二色谱测定酶的二级结构 :峰 1结构最为复杂 ,以β-转角为最高 ,占 31 .5% ,无规线团占 2 7% ,α-螺旋占 2 5.8% ;峰2为β-折叠 ,占 95.5% ;峰 3以 60 %的α-螺旋和 40 %的无规线团形式存在。 3个分离峰的底物专一性和二级结构的差异证明了褐藻胶裂合酶蛋白的结构与功能之间的相关性。     

黄渤海海域贝类麻痹性贝毒的检测与分析

采用小白鼠生物测试法和高效液相色谱法对2002~2005年我国黄渤海海域采集的贝类样品进行了麻痹性贝毒毒性检测,结果显示大连海域的虾夷扇贝含有麻痹性贝毒,有毒样品均出现在5月和6月,部分虾夷扇贝样品的毒素含量已经超过食用安全标准。通过高效液相色谱法分析了有毒虾夷扇贝体内的毒素成分,共检出了6种麻痹性贝毒组分,主要以毒性较低的C1和C2毒素为主,GTX3和GTX2次之,STX和neoSTX含量很低。通过高效液相色谱法分析得到的各毒素组分毒性总和与小白鼠生物测试法毒性测试结果基本相当。     

太平洋牡蛎高产育苗技术的研究

本文主要从强化亲贝蓄养，加强洗卵和分池孵化工作入手，提高其孵化率，及时选幼；幼虫培养及时筛选不同规格幼虫，投附着基后严格管理等措施来提高其变态率，达到稳产、高产，取得单位水体出苗量平均为３８万多个／ｍ３的好效果和明显的经济效益。     

响应面法优化香港巨牡蛎蛋白酶解工艺的研究

以水解度为指标,比较了6种蛋白酶对香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)的水解效果。在单因素考察实验的基础上,采用Box-Behnken模型响应面设计,建立香港巨牡蛎蛋白酶解的二次回归模型,确定最佳的水解条件。实验结果表明,海产品专用蛋白酶对香港巨牡蛎蛋白的水解效果优于其他蛋白酶,该酶的最佳水解条件为:酶与底物比为5.93%,酶解时间为4.07 h,酶解温度为54.6℃。在此条件下,海产品专用蛋白酶酶解香港巨牡蛎蛋白的水解度达到25.73%±2.39%。本研究为香港巨牡蛎的开发和利用提供了理论依据。     

洋山港内及航道水域沉积环境分析

在洋山港内和航道水域进行沉积柱状取样,对这些沉积柱状样品分别进行沉积物粒度、^210Pb和^137Cs分析。结果表明,港内水域沉积物粒度总体较粗,砂和粉砂的含量平均近80％,粘土含量平均20％,平均粒径为5.62—6．22φ。航道和附近水域沉积物粒度比港内水域略细,砂和粉砂含量平均为75％,粘土含量平均为25％。^210Pb和^137Cs年代测年表明,港内水域的沉积速率为每年0．93—1．56cm,航道水域的平均沉积速率为每年0．66cm,航道南部水域沉积速率为每年2．71cm,北部水域平均沉积速率为每年1．77cm,局部地区处于冲刷侵蚀状态。总体来说,该海区沉积环境较为稳定,水动力作用较强,沉积速度缓慢,处于基本冲淤平衡的状态。     

海水中超低含量活性磷酸盐的Mg(OH)2共沉淀法测定研究

活性磷(正磷酸盐)是海洋浮游植物生长所必需的物质基础[1-8],磷的生物可利用性直接影响全球的初级生产力水平.磷在特定的海洋环境中还可能限制固氮作用,成为限制海洋初级生产力的重要因素[1,3,6].海水中磷酸盐含量的测定也是海洋污染调查的重要指标之一[4,9].农业和工业废水中磷的过度排放导致河口和近岸海水富营养化,引起浮游植物异常繁殖,造成“赤潮”现象[4].因此,海水中磷的准确测定对深入理解生物地球化学过程及海洋环境保护具有重要理论和实际意义[4-6,9].磷钼蓝分光光度法是海水中活性磷的经典测定方法,检测限为324 nmo1/dm3[5],但在一些寡营养盐海域,例如在南海、地中海     

Analyses of the Relationship Between Mucous Aggregates and Phytoplankton Communities in the Gulf of Trieste (Northern Adriatic Sea) by Multivariate Techniques

Abstract. Multivariate techniques (cluster analysis and Principal Component Analysis) applied on phytoplankton data collected in June, July, August, and September 1990, 1991, 1992, and 1993 in the Gulf of Trieste (Northern Adriatic Sea) highlighted a clear temporal pattern from 1990 to 1993. In the summer of 1991, phytoplankton communities showed a dramatic increase in the dinoflagellatddiatom ratio. In particular, during June and July 1991 only few specimens of diatoms ( Cylindrorhecu closreriurn. Probosciu alata, Nirzschio longissimu , and Nitzschiu spp.) were collected; this confirmed the diatom scarcity in the phytoplankton communities before and during the appearance of large mucous aggregates (mucilage) in July 1991 in the Gulf of Trieste. The differences observed between the structure of the phytoplankton communities inside the aggregates and in the ambient waters suggested two hypotheses: 1) the aggregates were not produced in the gulf, but were carried ints the gulf by the eastern bordering current; 2) the aggregates were produced by a few, scarce species with a high exudate production that are capable of quickly reaching a high reproductive rate within the aggregates.     

象山港牛鼻山水道潮流场的高频地波雷达观测与分析

作为LORCE计划中构建高频地波雷达观测网的试点,面向象山港牛鼻山水道,在六横岛郭巨山和白马礁各设置了1台OSM AR-S50高频地波雷达.在2台雷达合成表面流场有效区域的中间地带,利用Valeport旋桨式海流仪和ADCP定点开展了周日连续观测,以验证高频地波雷达合成表面流场的精度.对比定点流场和高频地波雷达对应数据...     

2015年7月珠江口逆温现象的观测与分析

根据珠江口2015年7月6日至17日航次的CTD（conductivity, temperature, and depth）观测结果,分析得到：珠江口附近海域存在海水的垂向逆温现象,逆温差平均值为0.42 oC,上界深度在1 m-6 m间,下界深度在3 m-10 m间,逆温层平均厚度约为4 m。根据时空分布差异的不同,逆温现象可区分为以下三种情况：（1）在狮子洋、太平水道和蕉门水道的出口汇集处,存在温、盐差异的不同水体的交互过程中,由于潮汐和径流的作用所形成的水平流场差异导致了垂向温度的逆转现象。（2）在珠江口西侧的盐度锋面区域附近,第一航段观测期间锋面内侧低盐水团的温度低于锋面外侧高盐水团约2 oC,此时可观测到逆温现象;但在同一区域的第二航段观测期间由于河口内表层水温的上升,导致了逆温现象消失。该区域盐度锋面附近的两个水团在锋面位置附近发生叠置,冲淡水覆盖于海水之上,两个水团的温、盐差异是温度逆转现象的主因。（3）香港西南侧的上升流区域与盐度锋面的相互作用导致了该区域逆温现象的产生。     

Cloning and Structural Analysis of Calmodulin Gene from the Mangrove Plant Sonneratia Paracaseolaris

Calmodulin is a calcium binding protein that modulates the activity of diverse groups of protein including some protein kinase, adenylate cyclases and ATPase. Here we use the total DNA of Sonneratiaparacaseolaris as the template ofthe polymerase chain reaction (PCR). The PCR primers have been designed and synthesized according to the 5-and 3-terminal oligonucleotide sequences of Calmodulin gene of plants in Genbank and ligated with cloning vector pBsk( ).The recombinant clones have been obtained from the selected medium. The results of DNA sequences analysis show that the nucleotide sequences of ORF share more than 85% homologies as compared with those ofcalmodulin genes of several other plants. Similar to rice and apple, the ORF is interrupted by an intron behind the 75th nucleotide.