硒对华贵栉孔扇贝碱性磷酸酶的酶动力学及理化性质研究

探讨了微量硒(Se~(4+))对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis(Reeve))碱性磷酸酶(AKP)的作用。以催化动力学原理研究了不同缓冲系统中微量硒时AKP的影响。结果表明,Se~(4+)对谈酶的作用与酶所处的环境有关。在0.05 mol/L Na_2CO_3-NaHCO_3(pH 9.0)缓冲溶液中Se~(4+)浓度小于12.5 mmol/L时呈现出激活作用;Se~(4+)浓度大于12.5 mmol/L时呈现出非竞争性的抑制作用,其抑制常数为6.81×10~(-2)mol/L。在0.05 mol/L Tris-HCl缓冲系统(pH 9.0)中,微量Se~(4+)对AKP具有强烈竞争性抑制作用,其抑制常数为3.79×10~(-1)mol/L。经紫外吸收光谱、荧光发射光谱和圆二色谱的实验表明,微量Se~(4+)与AKP作用后,该酶的构象已发生了变化。研究发现海水环境中若含有微量Se~(4+)(SeO_3~(2-)),可以促进扇贝AKP的水解。利于贝类的生长发育和外壳的形成,并有益于贝类的繁殖。     

硒化壳聚糖对栉孔扇贝血细胞中部分免疫因子的影响

取人工养殖栉孔扇贝(Chlamys farreri)的血淋巴,体外加入不同浓度的硒化壳聚糖,作用1h后采用生化方法分别测定栉孔扇贝血细胞中的髓性过氧化物酶(MPO)和非特异性酯酶(NSE)的活力,以及过氧化氢(H2O2)和活性氧的含量。结果表明:加入硒化壳聚糖后,栉孔扇贝血细胞中依赖卤素的MPO、不依赖卤素的MPO、α-醋酸萘酯酶和α-丁酸萘酯酶的活力均为实验组显著高于对照组,过氧化氢和活性氧的含量也为实验组显著高于对照组。说明硒化壳聚糖对栉孔扇贝血淋巴中多种参与免疫防御的酶的活力和具有杀菌作用的免疫因子的含量均具有明显的提高作用,因而硒化壳聚糖对栉孔扇贝的免疫功能具有明显的增强作用。     

中国对虾血细胞酶细胞化学的初步研究

运用电镜酶细胞化学技术 ,对中国对虾 (Penaeus chinensis)的血细胞和血清中的酚氧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和过氧化物酶的酶活性部位进行标记。实验结果显示 :酚氧化酶主要以酶原形式存在于大颗粒细胞的颗粒体中 ,酸性磷酸酶和碱性磷酸酶以酶原形式存在于小颗粒细胞的颗粒体中。健康虾和患病虾血细胞中酶活性的表现形式不尽相同 ,在病理情况下 ,颗粒细胞能以细胞解体的方式 ,排出细胞内的颗粒 ,转化成有活性的酶 ,以此提高血淋巴中这几种酶的活性。透明细胞可以吞噬排放颗粒后的颗粒细胞 ,透明细胞中由高尔基体合成的酸性磷酸酶等溶酶体酶主要用于透明细胞的细胞内消化作用。研究认为 :3种血细胞因含有不同的免疫酶以及酶的作用方式不同而具有不同的免疫功能     

栉孔扇贝(Chlamys farreri)晶杆的形态结构和组织化学研究

利用石蜡切片法、扫描和透射电镜技术及组织化学方法,对栉孔扇贝的晶杆进行了研究.晶杆分头部和杆部,横切面呈同轴圆环状,无细胞结构,头部边缘呈溶化状态,内含大量的吞噬细胞和嗜曙红颗粒,杆部表面有球状分泌颗粒.晶杆的电子密度较低,偶尔有带状高电子密度区、电子致密颗粒和电子透明小泡.晶杆内含粘蛋白、酸性粘多糖和蛋白质,无酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、脂酶及酯酶活性.栉孔扇贝的晶杆无贮存食物的功能,大小与贝体的性别无关,长时间暴露的在空气中,晶杆消失     

栉孔扇贝(Chlamys (Azumapecten) farreri) 消化盲囊的组织学和组织化学的研究

运用石蜡切片法、透射电镜技术及组织化学方法，对栉孔扇贝的消化盲囊进行了研究。结果表明消化盲囊的腺上皮由消化(吸收)细胞和分泌细胞组成，消化(吸收)细胞顶端有微绒毛，细胞内有酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、脂酶和酯酶活性，还含有糖原和脂肪。是进行食物的细胞内消化和营养物质吸收的主要场所，并有储存能量的功能；分泌细胞内含粗面内质网、高尔基体和分泌颗粒，具有酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性。并含有丰富的RNA和蛋白质，有分泌消化酶的功能；消化盲囊导管上皮细胞顶端有纤毛和微绒毛，细胞内有酸性磷酸酶、碱性磷酸酶及脂酶活性，也能分泌消化酶。消化(吸收)细胞浅部的细胞质及其释放到盲囊腔中的胞质团中含铁；各部位不含钙。     

中国对虾酸性和碱性磷酸酶的特性研究

磷酸酶,又称正磷酸单酯水解酶,是一种能催化各种含磷化合物水解的酶类,根据它们起催化作用的最适pH特性,又可分为酸性磷酸酶(EC 3.1.32)和碱性磷酸酶(EC3.1.31)两类。磷酸酶具有非常重要的生理功能,它广泛存在于各种动物体内,是动物体内重要的解毒体系,并且在动物机体的骨化过程及在磷化物和其它一些营养物质的消化、吸收和转运过程中都起着重要作用。此外,通过催化磷蛋白的水解,磷酸酶在细胞调节过程中也具有一定作用。尽管磷酸酶的研究有很久的历史,但绝大多数的研究几乎都集中在陆生的高等脊椎动物哺乳类身上。在无脊椎动物体中这方面研究的很少,而有关甲壳类动物磷酸酶的研究文献几乎没有。     

扇贝裙边酶水解工艺条件的研究

扇贝在加工完干贝后,大量的含有较高营养价值的扇贝裙边有待利用。本文就扇贝裙边利用不同蛋白酶的水解工艺条件进行了较深入的探讨,以期找出扇贝裙边酶水解的最佳工艺条件。     

海洋中碱性磷酸酶及其活性的研究进展

为加深对海洋生物地球化学循环过程和海洋生态系统功能的认知,并为相关研究提供科学依据,文章综述海洋中碱性磷酸酶及其活性的研究进展,并提出展望。研究结果表明：碱性磷酸酶主要来源于浮游植物、浮游动物和细菌,通常根据滤膜孔径等进行分类,对于海洋碳、氮、磷循环和调节生物群落组成具有重要意义;碱性磷酸酶活性通常采用水解荧光模拟底物法定量研究,并在全球海洋范围具有一定的水平、垂直和季节分布特征,影响碱性磷酸酶活性的典型环境因子包括太阳辐射、海水温度、河流输入、上升流、溶解态有机磷、溶解态无机磷、溶解态无机氮、金属离子以及病毒裂解、浮游动物捕食和排遗作用等。     

栉孔扇贝血细胞数量变化与生长的关系

于2009年3月至2010年1月期间,每月中旬分别从青岛和威海两地区采集人工养殖和野生的栉孔扇贝(Chla-mys farreri)。采集的扇贝经壳长测量后,于闭壳肌血窦中取血,离心,重悬,超声波破碎后制得血细胞破碎液。从抗栉孔扇贝血细胞的单克隆抗体库中筛选出1株与颗粒血细胞和透明血细胞均能结合,并能与血细胞多个蛋白结合的单克隆抗体作为酶联免疫吸附法(ELISA)中的第一抗体;第二抗体为碱性磷酸酶标记的羊抗鼠抗体。将血细胞破碎液包被于酶标板孔中,经一抗、二抗孵育后,显色读数,分析血细胞数量与生长的关系。结果表明:两地区人工养殖和野生扇贝的壳长均由3月的2 cm左右增长到了次年1月的7 cm以上,其中4～7月增长较快,而8～1月相对缓慢。两地区人工养殖和野生扇贝的血细胞数量于3～6月间均维持在较高的水平,6月达到最高峰,随后急剧下降,并于8或9月达到最低值,此后10～1月有所回升,但仍显著低于3～6月的水平。结论认为:栉孔扇贝血细胞数量与生长的关系在两地区、两扇贝品种间差别不大;但3～6月栉孔扇贝生长较快,血细胞数量相对高;而8～10月栉孔扇贝生长缓慢,其血细胞数量较低。     

黄、东海春季海水胞外酶活性水平分布特征研究

海水胞外酶活性可以指示有机物的分布特征以及微生物的营养状况。我们测定了2017年3月25日至4月15日黄海和东海44个大面站以及2018年4月28日至29日胶州湾湾口附近海域10个站位表层海水中的8种胞外酶活性并研究了其分布特征。2017年春季黄、东海表层海水中碱性磷酸酶和脂肪酶活性较高,高值区出现在苏北沿岸和南黄海中部,碱性磷酸酶与磷酸盐浓度之间呈正相关。其余6种酶(肽酶、几丁质酶、纤维素酶、α-D-葡萄糖苷酶、β-D-半乳糖苷酶、木糖苷酶)活性高值区出现在长江口以东的外海,东海的β-D-半乳糖苷酶、木糖苷酶平均酶活性显著高于黄海。8种酶活性平均值排列顺序由大到小为:碱性磷酸酶、脂肪酶、肽酶、几丁质酶、α-D-葡萄糖苷酶、β-D-半乳糖苷酶、纤维素酶、木糖苷酶,其中α-D-葡萄糖苷酶和β-D-半乳糖苷酶的活性基本一致。2018年春季胶州湾附近海域海水中碱性磷酸酶、脂肪酶、木糖苷酶活性分布为近岸高于远岸,几丁质酶活性为近岸低于远岸。8种酶活性平均值排列顺序由大到小为:碱性磷酸酶、脂肪酶、肽酶、木糖苷酶、α-D-葡萄糖苷酶、β-D-半乳糖苷酶、几丁质酶、纤维素酶,其中几丁质酶和纤维素酶的活性基本一致。黄海的碱性磷酸酶和脂肪酶平均酶活性均显著高于东海和胶州湾附近海域。糖类水解酶(几丁质酶、纤维素酶、α-D-葡萄糖苷酶、β-D-半乳糖苷酶、木糖苷酶)平均酶活性在黄海最低。本文的结果对于理解中国近海海水有机碳的分布、浮游植物及异养细菌对有机碳的降解具有重要意义。     

海湾扇贝(Argopecten irradians Lamarck)"性腺萎缩症"的组织病理学研究

利用组织学与组织化学染色方法,在光镜下研究了患"性腺萎缩症"海湾扇贝的组织病理学变化.结果表明,患病贝生殖细胞肿胀或萎缩,发育滞后;消化盲囊、鳃等器官组织也呈现明显的病理学变化特征,主要表现为结构紊乱,细胞变形、脱落甚至溃散,血细胞增生,出现强嗜碱性包涵体等异常结构.组织化学研究显示消化盲囊及消化道中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶含量下降;鳃、外套膜中多糖类物质含量增加等.     

菲律宾蛤仔消化系统的组织学和组织化学研究

用组织学和组织化学方法对菲律宾蛤仔的消化系统进行了研究。消化腺腺上皮由消化细胞和嗜碱性细胞组成。消化细胞呈现蛋白酶、非特异性酯酶、脂酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性 ,表明能进行细胞内消化。嗜碱性细胞含丰富的RNA和蛋白质。消化道粘膜上皮由纤毛柱状细胞和少量的粘液细胞组成。晶杆囊基部与肠相连。肠纤毛柱状细胞呈现蛋白酶、非特异性酯酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性。     

华贵栉孔扇贝稚贝生态的初步观察

近年来,国内外有关扇贝人工育苗与养殖研究的报道很多,但扇贝稚贝生态的报道甚少。作者根据几年来对华贵栉孔扇贝稚贝移动的观察,对光反应和对比重的适应等方面的实验结果报道如下。     

栉孔扇贝血细胞数量变化与生长的关系

于2009年3月至2010年1月期间,每月中旬分别从青岛和威海两地区采集人工养殖和野生的栉孔扇贝(Chla-rays farreri).采集的扇贝经壳长测量后,于闭壳肌血窦中取血,离心,重悬,超声波破碎后制得血细胞破碎液.从抗栉孔扇贝血细胞的单克隆抗体库中筛选出1株与颗粒血细胞和透明血细胞均能结合,并能与血细胞多个蛋白结合的单克降抗体作为酶联免疫吸附法( ELISA)中的第一抗体;第二抗体为碱性磷酸酶标记的羊抗鼠抗体.将血细胞破碎液包被于酶标板孔中,经一抗、二抗孵育后,显色读数,分析血细胞数量与生长的关系.结果表明:两地区人工养殖和野生扇贝的壳长均由3月的2cm左右增长到了次年1月的7cm以上,其中4～7月增长较快,而8～1月相对缓慢.两地区人工养殖和野生扇贝的血细胞数量于3～6月间均维持在较高的水平,6月达到最高峰,随后急剧下降,并于8或9月达到最低值,此后10～1月有所回升,但仍显著低于3～6月的水平.结论认为:栉孔扇贝血细胞数量与生长的关系在两地区、两扇贝品种间差别不大;但3～6月栉孔扇贝生长较快,血细胞数量相对高;而8～10月栉孔扇贝生长缓慢,其血细胞数量较低.     

菲律宾蛤仔消化系统的组织学和组织化学研究

用组织学和组织化学方法对菲律宾蛤仔的消化系统进行了研究。消化腺腺上皮由消化细胞和嗜碱性细胞组成，消化细胞呈现蛋白酶、非特异性酯酶 、脂酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性，表明能进行细胞内消化，嗜碱性细胞含丰富的RNA和蛋白质，消化道粘膜上皮由纤毛柱状细胞和少量的粘液细胞组成，晶杆囊基部与肠相连，肠纤毛柱状细胞呈现蛋白酶、非特异性酯酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性。     

菲律宾蛤仔消化系统的组织学和

用组织学和组织化学方法对菲律宾蛤仔的消化系统进行了研究.消化腺腺上皮由消化细胞和嗜碱性细胞组成.消化细胞呈现蛋白酶、非特异性酯酶、脂酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性,表明能进行细胞内消化.嗜碱性细胞含丰富的RNA和蛋白质.消化道粘膜上皮由纤毛柱状细胞和少量的粘液细胞组成.晶杆囊基部与肠相连.肠纤毛柱状细胞呈现蛋白酶、非特异性酯酶、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性.     

硒化卡拉胶和酵母葡聚糖对栉孔扇贝血淋巴中两种水解酶活力的影响

对栉孔扇贝分别注射硒化卡拉胶和酵母葡聚糖后，采用生化方法，于1h,15h和30h分别测定栉孔扇贝血清和血细胞中2种参与免疫防御的水解酶酸性磷酸酶（ACP）和溶菌酶的活力，结果表明，注射硒化卡拉胶后，栉孔扇贝血清和血细胞中ACP活力在1h和30h时均为实验组显著高于对照组，溶菌酶活力也均在1和30h时实验组显著高于对照组，注射酵母葡聚糖后，ACP活力在1h,15h和30h时均为实验组极显著地高于对照组，溶菌酶活力则均为实验组与对照组差异不显著，说明硒化卡拉胶对栉孔扇贝血淋巴中ACP和溶菌酶的活力均有增强作用，而酵母葡聚糖仅对其ACP活力有增强作用。     

栉孔扇贝对氮杂螺环酸毒素代谢解毒的生理应激响应

将栉孔扇贝（Chlamys farreri）暴露于分离自我国近海的一株氮杂螺环酸毒素（azaspiracids,AZAs）产毒藻——腹孔环胺藻（Azadinium poporum,AZDY06株,主产AZA2）,研究了栉孔扇贝对AZAs的代谢解毒效应以及代谢过程中血细胞数量、抗氧化酶活性及细胞超微结构变化等生理应急响应。结果发现,栉孔扇贝对AZDY06所产的AZA2具有一定的代谢解毒能力,可将AZA2转化成AZA6、AZA12、AZA19和AZA23等4种极性较强且毒性较低的代谢产物。代谢解毒过程中,栉孔扇贝血细胞数量、关键抗氧化酶活性及靶器官细胞超微结构均出现一定的应激效应,且总体表现出明显的剂量-效应关系。栉孔扇贝血细胞数量对AZAs表现出较强的应激反应,且随实验过程出现较大波动,最高可达对照组的2—3倍;抗氧化系统酶如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化物酶（POD）和酸性磷酸酶（ACP）活性也出现不同程度的变化：GSH-Px与POD在整个蓄积代谢过程中均表现出持续激活状态,且血液中这两种酶活性最高,可达内脏和鳃中的20倍以上;SOD活性与扇贝中AZAs含量有一定关系,AZAs含量为74.2—168.2μg AZA1 eq/kg时为诱导状态,过高或过低剂量均表现为抑制效果;而ACP对AZAs的应激表现也十分敏感,但代谢过程中大部分时间为被持续抑制状态。此外,AZAs还导致栉孔扇贝内脏和鳃细胞超微结构出现空泡化、核固缩等病理性变化;实验后期,低暴露组细胞结构出现一定的自我修复现象,而高暴露组则无此现象。本研究可为进一步深入探索AZAs的解毒机制,对其进行风险评价并制定限量标准提供科学依据。     

温度和盐度对华贵栉孔扇贝免疫相关酶的联合效应

为研究温度和盐度对华贵栉孔扇贝免疫相关酶活力的联合效应,采用中心复合设计(CCD)和响应曲面分析法(RSM)进行试验,在实验室条件下研究了温度(19~31℃),盐度(22~38)对华贵栉孔扇贝酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、谷胱甘肽还原酶(GR)三种免疫相关酶活性的联合效应,旨在考察温度与盐度对ACP,AKP和GR活性的影响及华贵栉孔扇贝免疫水平较高时的最佳温度和盐度组合,为华贵栉孔扇贝人工养殖所需条件提供理论基础。结果表明:温度的一次效应和二次效应对ACP,AKP和GR活力影响显著(P0.05);盐度的一次效应和二次效应对ACP,AKP和GR的活力影响显著(P0.05);温度和盐度的交互作用对ACP,AKP和GR活力的影响显著(P0.05)。采用响应曲面法,建立了温度和盐度对华贵栉孔扇贝ACP,AKP和GR活性影响的模型方程,该模型方程决定系数分别为0.986 6,0.981 3和0.957 6(P0.01),预测系数分别为0.934 5,0.888 0和0.738 4,表明该模型可以用于预测华贵栉孔扇贝ACP,AKP和GR活力变化。通过模型优化和验证实验,得到在温度24.30℃、盐度30.55时,ACP和AKP活力达到最小值,分别为170.43,181.74U/mg,而GR活力最大为0.34U/mg,满意度达0.95。     

扇贝边中酸性粘多糖的提取

通过蛋白酶水解和乙醇沉淀,从扇贝柱加工下脚料(扇贝边)中提取酸性粘多糖。用正交实验优选出酶解条件,当乙醇沉淀时,对乙醇浓度作了选择。用所选酶解条件水解扇贝边,水解液经脱色处理后,用60％(V/V)乙醇沉淀得粗制粘多糖,经精制后得到粘多糖3.2×10~(-4)(W/W)(相对于鲜冻原料)。