低温诱导太平洋牡蛎产生三倍体

用低温休克法诱导太平洋牡蛎产生三倍体。实验结果表明,２～７℃的低温均可获 得三倍体,其中４～５℃的效果较好,最优水平组合为,处理温度为４～５℃,处理时刻为受精 后１５ｍｉｎ,处理持续时间为１５ｍｉｎ,最高三倍体率为３６．８％。影响三倍体诱导率的３因素的顺序为处理持续时间→处理时刻→处理温度。     

低温诱导太平洋牡蛎产生三倍体

用低温休克法诱导太平洋牡蛎产生三倍体。实验结果表明,２￣７℃的低温均可获得三倍体,其中４￣５℃的效果较好,最优水平组合的,处理温度为４￣５℃,处理时刻为受精后１５ｍｉｎ,处理持续时间为１５ｍｉｎ,最高三倍体率为３６．８％,影响三倍体诱导率的３因素的顺序为处理持续时间→处理时刻→处理温度。     

太平洋牡蛎杂交三倍体与诱导三倍体的生长比较

本文以中国太平洋牡蛎二倍体自交作为对照,比较了诱导三倍体群体及其杂交三倍体的早期表型性状。通过对各试验组卵径、卵裂率、D幼率、D形幼虫大小、生长、存活率和倍性等指标进行测定,进一步评估了2种诱导方法的有效性。结果表明:与诱导三倍体群体相比,杂交三倍体表现出明显优势,D幼率、D形幼虫大小均大于诱导三倍体群体,且差异显著(P<0.05);稚贝期壳长和壳高生长也显著快于诱导三倍体群体(P<0.05)。至附着,杂交三倍体的存活率很高,显著优于诱导三倍体群体。就三倍体率而言,杂交三倍体达到100%,而诱导三倍体群体仅为51.00%±11.79%。由上得知,杂交三倍体更适合应用于大规模生产。     

太平洋牡蛎杂交三倍体与诱导三倍体的生长比较

本文以中国太平洋牡蛎二倍体自交作为对照,比较了诱导三倍体群体及其杂交三倍体的早期表型性状.通过对各试验组卵径、卵裂率、D幼率、D形幼虫大小、生长、存活率和倍性等指标进行测定,进一步评估了2种诱导方法的有效性.结果表明:与诱导三倍体群体相比,杂交三倍体表现出明显优势,D幼率、D形幼虫大小均大于诱导三倍体群体,且差异显著(P＜0.05);稚贝期壳长和壳高生长也显著快于诱导三倍体群体(P＜0.05).至附着,杂交三倍体的存活率很高,显著优于诱导三倍体群体.就三倍体率而言,杂交三倍体达到100％,而诱导三倍体群体仅为51.00％士11.79％.由上得知,杂交三倍体更适合应用于大规模生产.     

6-DMAP诱导太平洋牡蛎三倍体 5.孵化率和D幼畸形率与三倍体诱导率的关系

１９９６～１９９７年,在进行６－ＤＭＡＰ（６－二甲基氨基嘌呤）诱导太平洋牡蛎三倍体实验的同时,进行胚胎孵化率和Ｄ形幼虫畸形率与三倍体诱导率关系的研究。解剖法获取精卵,人工授精。三因素三水平Ｌ９（３４）正交试验、分组的实验结果表明：胚胎孵化率与三倍体诱导率间呈不显著的负相关（ｒ＝－０．０７４）,ｙ＝６４．９２５－０．０５６ｘ;Ｄ形幼虫畸形率与三倍体诱导率间呈显著的正相关（ｒ＝０．３８５,Ｐ＜０．０５）,ｙ＝１２．１３５＋０．２７２ｘ。三因素四水平Ｌ１６（４５）正交试验、分组的实验结果表明：胚胎孵化率与三倍体诱导率间呈不显著的负相关（ｒ＝－０．２１０）,ｙ＝７６．６１８－０．４７１ｘ;Ｄ形幼虫畸形率与三倍体诱导率间呈不显著的负相关（ｒ＝－０．０２２）,ｙ＝２３．１１５－０．０２９ｘ。讨论提出：在保证一定的三倍体诱导率的前提下,对获取的精卵进行离体促熟和必要的洗卵、缩短诱导持续时间,是提高胚胎孵化率和降低Ｄ形幼虫畸形率的重要措施。     

利用咖啡因和热休克诱导太平洋牡蛎三倍体

报道采用咖啡因和热休克相结合的方法 ,抑制受精卵第二极体释放诱导太平洋牡蛎三倍体的优化方案。实验结果表明 ,三倍体诱导率随着咖啡因浓度的增高而增高 ,D形幼虫的孵化率却随着咖啡因浓度的增高而降低 ;所进行 30～ 36℃热休克温度试验 ,其对三倍体诱导率影响不大 ,但对孵化率影响明显。在 2 3～ 2 5℃条件下 ,当 50 %受精卵出现第一极体时 ,用浓度为 2 g/ L的咖啡因 ,结合 33℃± 1℃的热休克 ,处理牡蛎受精卵 15min,三倍体诱导率达 80 %以上 ,孵化率在 4 5%左右。通过此法诱导的三倍体群幼虫的成活与生长情况与其二倍体群体无明显差异。     

诱导三倍体太平洋牡蛎群体发育过程中三倍体率的变化

借助染色体计数和流式细胞计数计对 6 - DMAP处理和冷休克两种诱导方法获得太平洋牡蛎 (Crassostrea gigas)三倍体群体在各个发育时期三倍体率进行了系统检测。结果发现 ,在 4～ 8细胞时期 ,6 - DMAP诱导三倍体率为 75 % ,冷休克诱导三倍体率为 5 0 % ,在发育至 D形幼虫期和稚贝期 ,两类三倍体群体的三倍体率均有所下降。如从 4～ 8细胞期发育至稚贝期 ,冷休克诱导群体下降了 5 3.0 8%以上 ,6 - DMAP诱导群体三倍体率下降了 2 7.36 %。养殖一年后 ,6 - DMAP诱导群体三倍体率仍保持在 6 0 %以上 ,而冷休克诱导群体三倍体率已下降至不足 10 %。这一结果说明 ,利用 6 - DMAP诱导来获得三倍体是比较理想的方法     

不同卵密度对太平洋牡蛎三倍体诱导效果影响的研究

本实验主要研究用70mg／L浓度的6－MDAP（二甲基氨基嘌呤）对太平洋牡蛎的受精卵进行三倍体诱导，研究受精卵的密度对诱导效果的影响，以及诱导后受精卵的孵化率和畸形率。实验结果表明：当受精卵的密度为4万个／ml时三倍体率最高，相应的孵化率最高，综合来看，4万/ml的卵密度是生产上较好的受精卵处理密度。     

高盐诱导太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)三倍体的初步研究

初步探讨了利用高盐抑制受精卵第2极体(PB2)的释放的方法诱导太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)三倍体。水温25℃条件下,分别进行不同高盐处理(盐度梯度为40、45、50、55、60、65、70、75、80)、不同处理时机(受精卵出现第一个PB1,30%和50%PB1,出现第一个PB2,50%PB2)和不同持续处理时间(10~25min)的实验,通过胚胎孵化率、三倍体诱导率及综合评价指数的分析表明,高盐诱导太平洋牡蛎三倍体的最适方案为:当50%受精卵出第一极体时,以盐度为65的高盐海水处理受精卵20min,三倍体诱导率最高达65.53%。     

香港巨牡蛎♀×太平洋牡蛎♂异源三倍体的初步研究

本文以香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和太平洋牡蛎(C.gigas)为研究对象,进行牡蛎异源三倍体研究试验。在水温25℃条件下,香港巨牡蛎剥离卵子于海水中浸泡促熟1.5h后,与太平洋牡蛎精子受精,获得最高卵裂率为(24.40±3.79)%。受精后20min,采用盐度为10的低渗海水处理杂交受精卵25min,可获得68.65%的异源三倍体幼虫,孵化率为12.71%。异源三倍体幼虫的存活率和生长率均未表现出优势。受精后第9天,异源三倍体幼虫的存活率仅为(0.116±0.023)%,平均壳长为(103.50±0.85)(m;对照组的存活率和壳长分别为(42.17±2.74)%和(123.25±8.60)μm。幼虫在附着变态前死亡。     

三倍体太平洋牡蛎生产性育苗与养成初报

本文总结了１９９８～１９９９年三倍体太平洋牡蛎育苗与养成情况。９８年在荣成三个８６３中试基地利用６－ＤＭＡＰ、冷休克及ＣＢ抑制表卵第二极体释放的方法诱导太平洋牡蛎三倍体,其中以６－ＤＭＡＰ效果较好,诱导三倍体率为６０．９％～９０．５％。共培育三倍体群牡蛎苗种４．１３亿,海上养殖２０００亩。三倍体群牡蛎的生长明显快于二倍体对照群体,体重增加１５．６５％～４１．８９％。１９９９年４～８月收获,三倍体群     

二倍体和三倍体太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)繁殖前后生化成分及氨基酸组成的比较研究

对太平洋蛎二倍体和三倍体在繁殖前后的几种生化成分和氨基酸组成进行了比较研究，为牡蛎的生理生化研究提供了基础数据。结果显示：太平洋牡蛎的总糖，糖原，脂肪和蛋白的含量与其繁密切相关，二倍体牡蛎在繁殖后的总糖，糖原，脂肪的含量比繁殖前分别降低了24．31％，30．37％，14．91％，三倍体分别降低了9．45％，7．17％，20．29％，而二倍体和三倍体牡蛎粗蛋白的含量在繁殖后较繁殖前分别增高了14．91％，12．285，表明了糖类和脂肪是牡蛎殖能量的主要来源，繁殖前三倍体牡蛎的糖原含量比二倍体高23．30％，繁殖后二倍体糖原含量明显降低，三倍体的糖原含量比二倍体高了73．83％，表明三倍体牡蛎由于可育性低而体内一直保持较高水平的糖原含量，从而在繁殖季节也保持了鲜美的口味。二倍体太平洋牡蛎与三倍体的氨基酸组成和含量的分析比较也表明，二倍体牡蛎的氨基酸组分在繁殖前后变化较大，而三倍体的氨基酸组分相对稳定。     

华贵栉孔扇贝的三倍体诱导及生长比较

分别用细胞松弛素Ｂ（ＣＢ，浓度０．５ｍｇ·Ｌ（－１））和低温（１０℃）处理诱导华贵栉孔扇贝Ｃｈｌａｍｙｓｎｏｂｉｌｉｓ产生三倍体。抑制第一极体的三倍体诱导率分别达到４４．１％和３１．８％；而抑制第二极体的三倍体诱导率分别为９０．２％和７２．７％（胚胎初期检查）。ＣＢ处理组幼虫的日增长率显著超过二倍体（ｐ＜０．０１）。养殖半年后，三倍体在壳高、壳长、壳宽和体重方面均显著大于二倍体（ｐ＜０．０１）；而养殖１３个月后，三倍体的肉重和闭壳肌重分别比二倍体增加３９．５％和６７．４％。在繁殖期，三倍体在外观上没有生殖腺。     

长牡蛎(Crassostrea gigas)代谢率的季节变化及其与夏季死亡关系的探讨

2002年6月—2003年9月,在中国北方重要养殖海区桑沟湾,采用呼吸瓶法现场研究了两种不同规格长牡蛎(Crassostrea gigas)的耗氧率、排氨率及氧氮比的季节变化,从代谢水平探讨了长牡蛎夏季死亡的原因。结果表明,长牡蛎的耗氧率、排氨率以及氧氮比均具有明显的季节变化(P<0.001)。三龄牡蛎的个体耗氧率7月份最高[2.86mgO2/(ind·h)],1月份最低[0.07mgO2/(ind·h)];个体排氨率8月份最高[6.45μmol NH4-N/(ind·h)],1月份最低[0.47μmolNH4-N/(ind·h)];一龄牡蛎个体耗氧率和排氨率的变化范围分别为0.01—1.38mgO2/(ind·h)和0.04—1.66μmol NH4-N/(ind·h)。三龄个体单位个体耗氧率、排氨率高于一龄牡蛎,而单位软体干重的耗氧率、排氨率则小于一龄个体。一龄个体的氧氮比变化范围为16.7—58.0,10月份最高,一月份最低;三龄个体的氧氮比变化范围为8.7—64.0,6—7月份较高平均为52.7,8月份产卵后迅速下降到14.7,氧氮比的剧降表明该阶段长牡蛎代谢消耗了大量的蛋白质,使其体质脆弱,可能是引起三龄牡蛎夏季大量死亡的原因之一。     

臭氧处理海水在太平洋牡蛎育苗上的应用研究

本文主要研究了用臭氧处理海水在经过连续充气暴气12h、24h、不经充气暴气的处理水及没经臭氧处理的正常海水，进行太平洋牡蛎受精卵的孵化和幼虫培育实验，结果表明：受精卵在经过24h暴气的处理，水瞬化率最高为94％，其次为没经过处理的正常海水为81％，暴气12h为19％，没经过暴气为0；幼虫培养在没经过处理的正常海水中生长最快，成活率为85％，其次为经24h暴气的处理水，成活率为80％，暴气12h为23％，没经过暴气为0，从而为臭氧处理海水在贝类育苗上的应用提供一定的指导。     

长牡蛎(Crassostrea gigas)微卫星克隆快速分离及特性分析

采用磁珠杂交选择和PCR筛选法，从长牡蛎DNA选择片段文库中，快速分离含有微卫星序列的阳性克隆。结果表明，在筛选的200个白色菌落中，56个克隆含有重复次数5以上的微卫星序列，其中41个(20．5％)有随机侧翼区，可以进行引物设计，12个缺乏足够的侧翼序列，3个为中断的微卫星序列。此外，还获得两个小卫星克隆。在获得的微卫星序列中，完全的占54．7％，不完全的占20．8％，复合的占24．5％。除探针中使用的CA重复单元外，还观察到CT、ACT、CGCA、CACT、GACT、GCAC、CCTTA和CCTCA的重复序列。微卫星重复次数主要集中在5-30次之间，占71．7％，最高为60次。本研究中构建的长牡蛎(CA)n富集微卫星文库将为以后开发未知微卫星标记提供帮助。     

二倍体和三倍体牡蛎的外观鉴别

对二倍体,三倍体僧帽牡蛎和太平洋牡蛎外套膜和生殖腺外部形态进行了周年观察。结果表明,从外套膜和生殖腺外观特征上的差异可鉴别出牡蛎二倍体和三倍体。１９９７年８月至１９９８年６月,分析了两种牡蛎样品２６６个,其鉴别准确率达９６．９９％。     

酸碱粗提配合超声破碎法制取可溶性长牡蛎(Crassostrea gigas)黑色素的研究

虽然牡蛎黑色素已经提取鉴定成功,但因为大部分实验需要用到黑色素的水溶液,而天然黑色素不溶于水,致使天然长牡蛎(Crassostrea gigas)黑色素的功效验证工作难以开展。本课题组探究总结出一套有效方法,对可溶性长牡蛎黑色素进行制取。首先选用酸碱法,从黑色长牡蛎中提取出天然长牡蛎黑色素,将其溶于氢氧化钠溶液中,利用超声细胞破碎仪进行处理,用盐酸中和至中性,离心取上清并干燥后得到一种黑色可溶性固体;再将该黑色固体分别用激光粒度测试仪、红外光谱仪和紫外光谱扫描仪进行检验后,发现天然长牡蛎黑色素经过超声降解处理后,颗粒粒度大幅下降,其溶解性大幅提高。红外光谱则显示出1630nm左右有明显的峰值,说明超声降解处理并未破坏真黑色素吲哚环等官能团;紫外吸光图谱的比较则显示天然长牡蛎黑色素破碎后,吸收峰仍然出现在210nm左右,但吸收值明显升高,说明超声降解法可以将难溶于水的天然长牡蛎黑色素降解为可溶于水的小颗粒可溶性黑色素,从而提高了紫外吸收值。可溶性牡蛎黑色素的制备成功对推动牡蛎黑色素的功能研究具有重要意义。     

雄性三倍体长牡蛎繁殖潜力的初步研究

国内外很多人做过三倍体长牡砺的诱导工作，但在三倍体性腺发育及配子活力方面的研究，目前仅见Ａｌｌｅｎ等１９８６年和１９９０年对三倍体的海螂和长蛎异常配子的发生报道。Ｃｏｘ１９９６年研究了悉尼岩牡蛎三倍体性腺发育情况，姜卫国等对三倍体合浦珠母贝的生殖腺进行了观察，李霞［１］对三倍体长牡蛎的性腺发育做了较系统的分析和总结。作者用流式细胞仪对长牡蛎Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ　ｇｉｇａｓ二、三倍体的性腺细胞进行了初步分析，回答了三倍体长牡蛎生殖潜力及性比方面的一些问题，为进一步研究三倍体长牡蛎的生长、繁殖、杂…