凡纳滨对虾对多巴胺免疫响应的研究

研究凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)对多巴胺的免疫响应。结果表明:注射多巴胺对凡纳滨对虾血细胞数量、吞噬率和血淋巴酚氧化酶、溶菌、类α2-巨球蛋白活力影响显著(P<0.05),而对照组各免疫指标无明显变化。在实验时间内,多巴胺处理组各指标均呈峰值变化,3类血细胞、总血细胞数量和血淋巴类α2-巨球蛋白活力在3h时分别达到最小值和最大值,而血淋巴酚氧化酶、血细胞吞噬率和血淋巴溶菌活力于6h时分别达到最大值和最小值,同时各免疫指标变化与多巴胺的注射剂量具有明显的负、正相关性;其中颗粒细胞、半颗粒细胞数量和血淋巴酚氧化酶、类α2-巨球蛋白活力在12h后趋于稳定,透明细胞、总血细胞数量和吞噬率于18h后保持稳定,而溶菌活力在24h后保持平稳,稳定后各免疫指标均恢复至对照组水平。这说明多巴胺对凡纳滨对虾血细胞具有明显的调节作用,能在短时间内引起对虾免疫力的显著下降,并表现出明显的剂量效应性。     

凡纳滨对虾在盐度变化下免疫机能评价的研究

研究凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)在盐度变化下免疫机能的评价指标。结果表明:盐度变化对凡纳滨对虾血细胞数量、吞噬率和血淋巴酚氧化酶、溶菌、α2-巨球蛋白活力的影响显著(P<0.05),而对照组各免疫指标无明显变化。凡纳滨对虾在盐度变化1d内3类血细胞和总血细胞数量明显下降,1d后趋于稳定,且与盐度值呈正相关;血细胞吞噬率和血淋巴酚氧化酶、溶菌和类α2-巨球蛋白活力在3d内呈峰值变化,其中血细胞吞噬率、溶菌活力均于0.5d时达到最小值,血淋巴酚氧化酶、类α2-巨球蛋白活力分别于0.5d或1d时达到最大值,同时各免疫指标与盐度变化呈明显的正、负相关性,3d后均恢复至对照组水平。结合凡纳滨对虾在盐度变化下的免疫响应机制和免疫适应性,提出血细胞吞噬率和血淋巴溶菌活力可作为衡量对虾在盐度变化下免疫健康水平的指标。     

低溶解氧对凡纳滨对虾酚氧化酶原激活系统和相关免疫因子的影响

本文研究了凡纳滨对虾在低溶解氧条件下酚氧化酶原系统的激活机制。结果表明:低溶氧(1.5mg/L,3.0mg/L)胁迫对凡纳滨对虾血淋巴中多巴胺含量、血细胞数量、酚氧化酶原激活系统相关酶活力、血淋巴中类α2-巨球蛋白活力影响显著(P<0.05),且各指标表现出明显的时间效应性。在实验时间内,DO为3.0mg/L处理组,总血细胞、小颗粒细胞和透明细胞数量均在12h内降低而后趋于稳定,大颗粒细胞数量在24h内降低后保持稳定,DO为1.5mg/L处理组,总血细胞数量和三类血细胞数量均在24h内降低而后趋于稳定;DO为3.0mg/L和1.5mg/L处理组凡纳滨对虾血淋巴中多巴胺含量分别在24h、12h内呈峰值变化,至12h、6h时达到最大值,在24h、12h后恢复至对照组水平并趋于稳定;血细胞中酚氧化酶原活力分别在12h、6h时显著降低,且均在24h时趋于稳定;丝氨酸蛋白酶活力在6h时均显著降低,在24h时达到最低值,而后趋于稳定,蛋白酶抑制剂活力显著降低,但类α2-巨球蛋白活力48h内呈峰值变化,与对照组比较均显著升高,48h后趋于稳定。实验期内对照组DO为5.5mg/L各指标变化不显著。     

注射病原菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活力的影响

研究注射病原菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活力的影响。结果表明:注射哈维氏弧菌对凡纳滨对虾血淋巴中血蓝蛋白含量、肝胰脏内血蓝蛋白mRNA和p75、p77亚基表达以及血淋巴、血细胞、血蓝蛋白酚氧化酶活力的影响显著(P<0.05),而对照组无显著变化。血蓝蛋白含量和p75、p77亚基表达在0～24 h内呈峰值变化,其中血蓝蛋白含量在6 h内逐渐下降、且6 h时达到最低值,而p75、p77亚基表达在3 h内无明显变化,然后均表现为逐渐上升趋势,各指标在12 h时达到最大值,而且亚基表达与注射哈维氏弧菌浓度呈正相关,24 h后各指标趋于稳定,与对照组无显著差异。在注射哈维氏弧菌短时间内血蓝蛋白mRNA表达呈迅速上升趋势,其中注射6×106cells/mL处理组mRNA表达在6h内呈峰值变化,3 h时达到最大值,6～48 h内保持稳定,但仍明显高于对照组水平(P<0.05),而注射6×105cells/mL处理组mRNA表达量虽然增加,但只在6 h达到最大值时与对照组差异显著(P<0.05),其余时间均与对照组差异不显著。血淋巴、血细胞和血蓝蛋白酚氧化酶活力分别在12 h,24 h内呈峰值变化,其中血淋巴、血蓝蛋...     

生物絮团对养殖环境的清洁作用及对虾生理指标的影响

本文研究了生物絮团对养殖环境的清洁作用及对虾生理指标的影响。生物絮团实验梯度设置为0、5、10 ml/L,在实验开始后将凡纳滨对虾随机放入氨氮浓度(2.5±0.3)mg/L的实验水槽中,以不添加生物絮团组为对照组,分别于0,6,12,24,48h时取对虾血淋巴,鳃丝、肝胰脏样品并进行免疫和解毒代谢指标测定。结果表明:生物絮团能有效地吸收水中的氨氮,来提高虾体免疫活性和解毒代谢能力。各处理组水中氨氦随着时间的推移逐渐降低,24h之后维持在一个较低水平。各处理组虾体血液、肝胰脏、鳃丝中精氨酸酶活力、谷氨酰胺合成酶活力随着生物絮团将水体中氨氮的清除逐渐降低,在24h,凡纳滨对虾鳃丝、血淋巴、肝胰脏中谷氨酰胺合成酶在生物絮团处理组之间以及处理组和对照组相比均差异显著(P0.05),并且其活性下降程度与生物絮团浓度成正比。各处理组对虾血细胞数量,吞噬率,溶菌,抗菌活力在施加生物絮团后呈现先上升,后下降趋势,48h降低在一个较低水平。由此可见,生物絮团对养殖水体中氨氦有明显的清洁作用,并对凡纳滨对虾免疫指标和解毒代谢指标影响显著。     

凡纳滨对虾对温度变化的免疫响应

研究了温度对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)免疫力的影响。结果表明:温度对凡纳滨对虾血细胞数量、吞噬率、酚氧化酶原活力、血淋巴抗菌和溶菌活力的影响显著(F>F0.05),且无论向低温还是高温变化,温度变化值越大,各免疫指标变化亦越大。在6d内各指标呈峰值变化,但是达到峰值和趋于稳定的时间具有不同步性。血细胞数量至1d时达到最低值,3d或6d后保持稳定,酚氧化酶原活力至1d时达到最低值,向低温变化组于1d达到稳定;而向高温变化组于3d达到稳定,稳定后除了温度为18℃和21℃的处理组明显低于对照组外,其它各处理组与对照组差异不显著;溶菌、抗菌活力在0.5d或1d时达到最低值,3d后趋于稳定,其中向高温变化组与对照组差异不显著,向低温变化组与对照组差异显著,且温度越低,活力越低;血细胞吞噬率0.5d或1d达到最低值,1d或6d后保持稳定,稳定后各处理组血细胞数量和吞噬率均与温度成正相关。     

凡纳滨对虾血细胞体外免疫活性保存技术的研究

研究了凡纳滨对虾血细胞的体外免疫活性保存技术。结果表明:4种保存液(CM、AC、MBHSS、M199)对凡纳滨对虾血细胞数量、存活率和酚氧化酶原级联系统胞吐影响显著(P0.05),随着孵育时间的延长,4种保存液各处理组血细胞数量、存活率和丝氨酸蛋白酶原、酚氧化酶原活力逐渐下降,而酚氧化酶活力逐渐升高。在60min内CM处理组血细胞数量、存活率显著高于MBHSS和M199处理组,而CM与AC处理组在40min内无显著性差异,60min时CM处理组血细胞存活率明显高于AC处理组,而血细胞数量无显著差异;在0~20min内CM处理组丝氨酸蛋白酶原、酚氧化酶原活力均高于其它处理组,释放的酚氧化酶活力则低于其它处理组,而在40~60min内CM处理组与其它处理组各指标差异显著。同时在0~40min内CM处理组各指标无明显变化,60min时差异显著。由此可见,CM缓冲液可作为凡纳滨对虾血细胞体外免疫活性的保存液,而且体外实验应在40min内完成。     

多巴胺对凡纳滨对虾血细胞免疫作用效应途径的研究

本文通过血细胞体外培养,研究了多巴胺(DA)及多巴胺受体(DARs)拮抗剂对凡纳滨对虾血细胞信号转导通路和免疫防御效应的影响。结果表明:DA及DARs拮抗剂对凡纳滨对虾血细胞内信号通路因子(AC、PLC、cAMP、DAG、PKA、PKC)和免疫防御效应(酚氧化酶原活力、酚氧化酶活力、吞噬率及抗菌活力)影响显著(P <0.05)。在DA作用下血细胞第二信使合成酶(AC、PLC)、第二信使(cAMP、DAG)及蛋白激酶(PKA、PKC)含量显著升高;与DA处理组相比,DARs 1型拮抗剂对血细胞信号通路因子具有显著抑制作用,且表现出剂量效应,而DARs 2型拮抗剂引起AC、cAMP和PKA信号通路因子明显升高,PLC、DAG和PKC信号通路因子无显著变化。DA作用后血细胞酚氧化酶原活力、吞噬率及抗菌活力均显著降低,而胞吐酚氧化酶活力显著升高;与DA处理组相比,DARs 1型拮抗剂对血细胞上述免疫防御效应具有显著抑制作用,且呈剂量效应,而DARs 2型拮抗剂血细胞吞噬活力显著降低,而其他免疫防御效应无显著变化。混合DARs拮抗剂均与1型拮抗剂作用类似。综合上述研究结果得出,DA主要通过凡纳滨对虾膜上1型DAR激活AC-cAMP-PKA和PLC-DAG-PKC信号通路调控血细胞吞噬活力、proPO系统和免疫活性因子的胞吐,2型DARs抑制AC-cAMP-PKA信号通路,辅助调控吞噬作用。     

注射生物胺对凡纳滨对虾鳃丝离子转运酶活力和血淋巴渗透压的影响

本文研究了注射生物胺(多巴胺、5-羟色胺)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)离子转运酶活力和渗透压的影响。结果表明:注射生物胺(DA、5-HT)对凡纳滨对虾鳃丝总AT- Pase、Na -K -ATPase、V-ATPase活力的影响均显著(P<0．05)．而对HCO3--ATPase活力和渗透压的影响不显著(P>0．05),而对照组渗透生理指标无明显变化。注射DA组AT- Pase、Na -K -ATPase活力在6h内呈峰值变化,分别在1h、3h达到最大值,在6-12h时稳定在对照组水平,12h后逐渐升高,于36h时达到最大值后降低,而V-ATPase活力在实验时间内呈阶段式升高现象,在36h达最大值后降低;注射5-HT组ATPase、Na -K -ATPase活力随取样时间增加而降低．至9h达到最小值,9h后趋于稳定,V-ATPase活力在48h内与对照组差异不显著。注射DA、5-HT处理组血淋巴渗透压分别在6h、9h内呈明显的峰值变化．分别在1h、6h达到最大值,然后分别在6h、9h后趋于稳定,并恢复至对照组水平。     

中国对虾血淋巴中的抗菌、溶菌活力与酚氧化酶活力的测定及其特性研究

以海捕中国对虾亲虾为材料，对其血淋巴中的抗菌、溶菌活力及酚氧化酶活力进行测定，并研究经注射大肠杆菌、海洋弧 菌及酵母聚糖等糖等刺激物以后，其活性的变化规律等。结果表明，适当的免疫刺激可提高对虾自身的抗病能力、为免疫药物的研究制造等提供依据。     

盐度、pH突变对2种养殖对虾免疫力的影响

本文研究了盐度、p H突变对中国对虾、南美白对虾免疫力的影响。结果表明 :盐度、p H突变对 2种养殖对虾抗菌活力、酚氧化酶活力的影响是显著的 (P<0 .0 5)。而盐度突变对溶菌活力的影响显著 (P<0 .0 5) ,对低 p H突变影响明显 (P<0 .0 5) ,对高 p H突变影响不明显。随着盐度突变值和向低 p H、高 p H突变梯度的增加 ,2种养殖对虾的抗菌活力逐渐减小 ,酚氧化酶活力逐渐增大 ,而溶菌活力则随着盐度突变值和向低 p H突变梯度的增加呈逐渐下降。在同一实验梯度中 ,中国对虾的抗菌活力和溶菌活力要比南美白对虾的低 ,而其酚氧化酶活力则比南美白对虾的高。     

皱纹盘鲍经诱导后血淋巴中一些因子变化的研究

于１９９５年１１月在山东荣城大鱼岛鲍养养殖厂采集皱纹盘鲍，以大肠杆菌，弧菌为诱导物，将鲍分为三组分别进行注射，在注射后的５，１８，３２，５０ｈ分别取鲍血淋巴，测定其抗菌，溶菌，酚氧化酶和超氧化物歧化酶活力，并研究注射组各项活力的变化规律。实验结果表明，适当的刺激可增加皱纹盘鲍的抗病能力。     

中国对虾血淋巴抗菌活力的测定

采用溶藻胶弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ）、副溶血弧菌（Ｖ． ｐａｒａｈａｅｍ ｏｌｙｔｉｃｕｓ）、哈维氏弧菌（Ｖ．ｈａｒｖｅｙｉ）、嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍ ｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）对中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）血浆样品、血细胞溶解物（ＨＬＳ）样品的抗菌活力进行了测定。表明中国对虾血浆样品对四种细菌均表现出一定的抗菌活力。其中,三种弧菌活细胞数在孵育１ｈ 时呈现最低;嗜水气单胞菌活细胞数在孵育４ｈ 时最少。在三种弧菌中,血浆样品对哈维氏弧菌表现出的抗菌活力最强,而对副溶血弧菌表现出的抗菌活力最弱。血细胞溶解物样品对三种弧菌几乎没有表现出抗菌活力;嗜水气单胞菌在与血细胞溶解物样品孵育２ｈ 时,其活细胞数呈现最低,说明血细胞溶解物样品对该菌表现出了一定的抗菌活力。由此显示,抗菌活力在中国对虾血浆样品中表现得较强,而在血细胞溶解物样品中表现得较弱,血淋巴抗菌因子可以在短时间内对细菌表现出其最强的活力,但对不同种细菌其抗菌作用强弱不同。     

神经递质多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)对三种主要养殖对虾争胜行为的影响

本文采用肌肉注射和行为分析的方法,进行了注射多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)对对虾争胜行为的研究,比较分析了注射多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)对日本囊对虾(Penaeus japonicus)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)争胜行为的影响。多巴胺注射浓度为2×10~(-3)mol/L、2×10~(-4)mol/L,5-羟色胺注射浓度为2×10~(–5)mol/L、2×10~(–6)mol/L,以生理盐水为对照,各设3个平行组。检测注射1h后对虾体内的DA、5-HT含量,分析比较注射DA、5-HT前后及不同对虾种类争胜行为的差异。结果表明,注射多巴胺后三种对虾间的争斗显著增加,HDA比LDA更易激发对虾间的争斗,同种对虾在注射不同浓度多巴胺后与对照组差异均显著(P0.05);相较于对照组,南美白对虾、日本囊对虾、中国明对虾在注射低浓度多巴胺后,对虾平均争斗次数分别增加13.8%、11.1%、21.8%,高浓度多巴胺组分别增加91.0%、64.0%、68.5%;对虾平均争斗次数随着DA浓度的升高而增加;平均优势指数总体呈下降趋势。随着5-HT浓度的增加,对虾的平均争斗次数随之减少,相较于对照组,低浓度5-羟色胺组降幅超过50%,高浓度5-羟色胺组降幅超过270%以上。争斗次数表现为中国明对虾凡纳滨对虾日本囊对虾。平均优势指数随注射5-HT浓度的增加而小幅度上升。     

盐度、pH变化对凡纳滨对虾鳃丝Na+-K+-ATPase活力的影响

本文研究了盐度、pH变化对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)鳃丝Na -K -ATPase活力的影响.结果表明:盐度、pH变化对凡纳滨对虾鳃丝Na -K -ATPase活力的影响显著(F》F0.01).在盐度变化(30→5)3d内,各处理组鳃丝Na -K -ATPase活力随着处理时间的增加逐渐升高;至3～15d时,不同盐度下鳃丝Na -K -ATPase活力趋于稳定,与对照组相比酶活力明显升高(F》F0.05),而且盐度越低酶活力越大.在pH变化(7.0←8.0→9.5)3d内,各处理组鳃丝Na -K -ATPase活力随着处理时间的增加呈峰值变化,表现为向低pH和向高pH变化分别于9h和12h达到最大值,至3d时均恢复正常;在pH变化3～12d内,不同pH环境下鳃丝Na -K -ATPase活力无明显差异(F《F0.05).     

口服免疫型药物对养殖中国对虾病害防治作用的研究

于１９９２年８－９月在山东乳山县海阳所镇虾场，使用复合口服免疫药物防治中国对虾病害，在现场观察对虾的发病情况，生长及增重速度；在实验室测定对虾血淋巴中的抗菌、溶菌活力和酚氧化酶活力。研究，对虾服用“口服免疫型”药具有明显的抗病防病能力及促生长等作用。     

96孔酶标板法测定中国对虾血淋巴上清液抗菌活力和酚氧化酶活性的初步研究

用96孔酶标板法测量单尾中国对虾血淋巴上清液抗菌（Uα）应力和过氧化酶活性。实验表明，该法具有以下优点：1）可测定大批单尾对虾血淋巴上清液的抗菌活力，酚氧化酶活性；2）所需对虾血淋巴上清液微量化；3）用酶标仪读取酶的活性，减少了不同试验者人为读数时的误差；4）重复性高。