台湾海峡野生牙鲆人工育苗技术研究

报道了2004年3月对产自台湾海峡的野生牙鲆(Paralichthys olivaceus)进行人工育苗的研究结果。共获153万粒受精卵,孵出仔鱼140.8万尾,孵化率达92%,在育苗水温为20~24℃,海水盐度为26~31的条件下,经63 d培育,育出全长3.8~5.5 cm的幼鱼53.39万尾,成活率为37.9%。     

牙鲆(Paralichthys olivaceus)与大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精前期微管骨架的免疫荧光观察

利用免疫荧光显微技术研究观察了牙鲆和大菱鲆正常二倍体受精卵从胚盘形成到4-细胞期微管骨架的动态变化过程,获得了一系列中心体、纺锤体及核的变化图像。牙鲆和大菱鲆正常发育的受精卵中微管骨架结构-纺锤体和中心体的动态变化过程基本相似,纺锤体及微管的形态结构也基本相似,大部分受精卵的微管骨架结构随卵裂呈现明显的周期性变化。在相同培育温度下,大菱鲆受精卵的胚盘形成时间要比牙鲆受精卵的胚盘形成时间晚10min左右,这与解剖镜下现场观察的结果相一致。首次利用免疫荧光显微技术从分子细胞生物学角度对牙鲆和大菱鲆进行细胞学观察,为进一步对其进行染色体操作提供分子细胞学依据。     

大菱鲆育苗期的细菌病研究

检测出大菱鲆(Scophthlmus maxims)幼体发育过程中3种病原菌,即仔鱼期病原菌两种：链球菌(Streptococcus equisimilis)和溶藻弧菌(Vibrio alyinolyticus),稚鱼期一种病原菌即副溶血弧菌(Vibio parahaemolyticus),并进行药物敏感试验,利用药物青霉素,呋喃唑酮、四环素进行有效治疗,使育苗成活率达到24％,高于目前国外平均水平。     

海水工厂化养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)和褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)腹水病病原菌的分离与鉴定

从患腹水病大菱鲆和褐牙鲆成鱼体内分离到两株致病作用强的病原菌FS1和FS2,经人工感染实验表明菌株FS1和菌株FS2为腹水症的致病菌。采用常规的生理生化鉴定方法及梅里埃全自动微生物分析系统(VITEK32),结合分子生物学方法进行病原菌的鉴定。结果表明,菌株FS1和菌株FS2分别为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)和溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)。菌株FS116SrRNA基因序列与迟缓爱德华氏菌的同源性达99%;菌株FS2的16SrRNA基因序列与溶藻弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌等的同源性均达99%。为最终确定菌株FS2的分类地位,测定了其HSP60基因序列,进行网上同源性比对。分析结果表明,菌株FS2与溶藻弧菌的同源性达99%,而与其他弧菌HSP60基因的同源性均低于91%。这两种致病菌混合感染或分别感染均可造成养殖鲆鱼腹水病。     

牙鲆的营养需求研究与饲料应用

20世纪90年代我国开始进行牙鲆（Paralichthys olicaceus）人工育苗和人工养殖,1992年以后牙鲆人工养殖发展迅速,目前山东、辽宁、河北、江苏、浙江、甚至福建沿海等地都开展了牙鲆的人工养殖。     

台湾海峡野生牙鲆人工繁殖和育苗技术研究

2003年12月至2004年5月对台湾海峡的野生牙鲆进行了亲鱼的驯养、促熟产卵及人工育苗技术研究.结果表明,活的鲻鱼苗可用于牙鲆亲鱼的诱食;当水温达到16.2~19.5℃时,牙鲆可自然产卵,产卵盛期为3月中旬至4月上旬.4月份受精率高达86%.在驯养过程中亲鱼未发生死亡.本实验共用受精卵约153万粒,孵出仔鱼140.8万尾,孵化率达92%.经63d培育,育出全长3.8~5.5cm幼鱼53.4万尾,成活率37.9%.育苗水温为20~24℃,海水盐度为26~31.     

大菱鲆红体病虹彩病毒体外增殖条件的研究

探讨大菱鲆病毒疫苗的研制,以牙鲆鳃细胞(FG细胞)为增殖体系,利用细胞病变效应(CPE)为判断指标,对大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)的体外最适增殖条件等进行了研究。结果表明,病毒接种量、病毒吸附时间、细胞培养条件对TRBIV的体外增殖均有明显的影响,以0.2 mL病毒液接种FG细胞、吸附2 h、用含10%胎牛血清的MEM培养液于22℃培养时,病毒的增殖速度最快。研究还发现,病毒的收获时间和病毒液冻融次数对所得病毒的感染力均有显著影响,在最佳增殖条件下,病毒在FG细胞中增殖至第4天时进行收获,且只冻融1次,其感染活性最强,反复冻融后病毒的感染活性会显著降低。     

牙鲆染色体组型的研究

牙鲆Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓｏｌｉｖａｃｅｕｓ（ＴｅｍｍｉｎｃｋｅｔＳｃｈｌｅｇｅｌ）属蝶形目（Ｐｌｅｕｒｏｎｅｃｔｉｆｏｒｍｅｓ）、牙鲆科（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｉｄａｅ）。牙鲆为近海温水性底层鱼类，在我国沿海分布很广，具有很高的经济价值。有关牙鲆的核型研究在国内尚未见报道。弄清这种鱼类的核型，对于了解其细胞遗传学特征、研究其种群遗传学以及牙鲆在分类和系统演化中的地位有着重要意义。１材料与方法实验材料采用青岛近海垂钓获得的活鱼７尾（雌３尾、雄４尾）。染色体制备采用ＰＨＡ体内注射法［１］。于活鱼…     

夏牙鲆(♂)与牙鲆(♀)人工杂交的细胞遗传学初步研究

于2004年11～12月在青岛薛家岛养鱼场采用夏牙鲆(Paralichthysdentatus)的精子与牙鲆(Paralichthysolivaceus)的卵子实施了多次人工杂交实验,并进行了父本母本鱼类个体、子代的染色体制片观察和细胞中DNA相对含量的流式细胞仪检测。结果表明,夏牙鲆染色体数为48,核型为2n=48t、臂数NF=48;子代的染色体数和核型与父母本的一样,也为2n=48t;子代的细胞中DNA的相对含量也表明其为二倍体。因此,可以明确其为杂交的后代,而不是雌核发育。     

山东省威海市牙鲆增殖放流试验研究

根据１９９９年在山东省威海市进行的牙鲆增殖放流试验,探讨了在该地区增殖放流的可行性及剪景,并且对比了网箱养殖、池塘养殖和放流增殖三种方式的经济效益,认为该地区适宜放流增殖并有明显的经济效益,应予以推广。     

牙鲆嗅上皮超微结构研究

扫描电镜和透射电镜研究显示：牙鲆Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓｏｌｉｖａｃｅｕｓ嗅上皮的边缘为非感觉区，内侧为连续的感觉区，属嗅觉鱼类。非感觉区由表皮细胞、粘液细胞及基底细胞等组成，表皮细胞在游离面相互连接形成似指纹状的嵴的结构。感觉区由纤毛感觉细胞、微绒毛感觉细胞、纤毛非感觉细胞、支持细胞及基底细胞等组成。     

大菱鲆(Scophthalmus maximus)细菌性疾病的研究现状

由弧菌科的细菌和其引发的细菌性疾病被认为是目前大菱鲆养殖业的主要危害之一。本文详细介绍了弧菌属的病原及一些典型的发病症状。对其他科属的一些病原菌，也作了相应描述，但它们的致病力相对弧菌科的病原菌致病力要弱，危害范围要小。最后简单介绍了目前细菌病几种可行的防治方法和思路。     

假雄牙鲆消化器官中碱性磷酸酶比活性的研究

碱性磷酸酶(alkaline phosphatases)是一种内源性酶，几乎存在于所有动物的细胞膜(plasma membrane)中，它在许多代谢活动中，如动物的生长、蛋自质的合成、营养成分的转运、类固醇的生成等方面都发挥着重要的作用(Ram et al.，1985)。因此，对于碱性磷酸酶的研究，有利于了解鱼类的消化生理，并有助于更深刻地理解鱼类体内营养成分的吸收和转运机制。假雄牙鲆是在雌性牙鲆的一定生长发育阶段，用人工诱导的方法使之性转化所获得的。对于假雄牙鲆的生理、生化特性的研究，至今还未见正式报道。本实验以一年龄假雄牙鲆为研究对象，研究了不同消化器官中碱性磷酸酶的比活性，并初步探讨了在不同发育时期碱性磷酸酶比活性的变化，从而能够更深刻地理解假雄牙鲆体内营养成分消化与吸收的过程和机制，并有助于牙鮃的人工培育。     

牙鲆(Paralichthys olivaceus)β诺达病毒衣壳蛋白重组表达及复性条件优化 组表达及复性条件优化

β诺达病毒利用其缺乏校正功能的聚合酶进行基因组复制, 易导致突变, 因而具有广泛的宿主感染性, 而且可引发致死率极高的病毒性神经坏死症, 需要有针对性地研究检测及防御方法。本研究以感染牙鲆(Paralichthys olivaceus)的β诺达病毒为对象, 利用引物设计, 将His标签编码序列连接到完整病毒衣壳蛋白C端, 构建原核表达载体; 采用SDS-PAGE及质谱对表达产物进行分离和鉴定; 重组衣壳蛋白经镍离子亲和柱纯化后进行复性条件的正交优化。结果表明4个肽段经质谱鉴 定与预期一致; 纯化产物产量可达36mg/L; 4°C条件下, 复性缓冲液中尿素和PBS的最适浓度为0.8mol/L和0.05mol/L。本研究建立的制备方案可为研制相关疫苗以及开发针对该病毒的快速检测产品等提供有价值的参考。     

养殖牙鲆细菌性病原分离与鉴定

牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国北方沿海地区的重要经济养殖品种，目前已形成工厂化生产规模。随着养殖密度的增加以及海水污染程度的日益严重，养殖牙鲆出现了各种疾病(曲凌云等，2000； Mo Zhaolan et al.，2001).造成了巨大的经济损失。 1999~2000年，山东省荣成、威海、青岛胶南及黄岛地区养殖牙鲆大面积发病，疾病发生时间多在每年的6~11月.病鱼多为3~10月龄。本文作者对以上牙鲆发病地区进行了临床病症的调查，并进行了病原的分离和初步鉴定。     

牙鲆的疾病

综述当前国内外报道的养殖牙鲆危害严重的主要疾病及其防治方法。按牙鲆的病毒病、细菌病、寄生原虫病、吸虫病等顺序分别叙述了各主要病害，尤其对危害严重的病害种类如：牙鲆弹状病毒病、肠道白浊病、鳗弧菌病、腹胀病、腹水病、牙鲆出血性败血病等进行了较为详细的记述，以期对牙鲆疾病的研究提供参考材料     

牙鲆中孵化腺细胞的发育研究(英文)

在硬骨鱼类的孵化过程中,卵膜(壳)的裂解是由孵化腺细胞分泌的孵化酶完成的。为了探索鲆鲽类牙鲆Paralichthys olivaceus胚胎在孵化过程中孵化腺细胞的分化及变化规律,本文利用高碘酸-雪夫染色反应(PAS)研究了P.olivaceus胚胎在孵化过程中孵化腺细胞的分化及变化规律。结果表明,典型的孵化腺细胞于孵化前15小时出现,位于胚胎的前中部。孵化腺细胞的数量和体积均在孵化前达到最大值,而且,均位于胚胎头部和背部表面。一旦孵化结束,孵化腺细胞的数量和体积均急剧下降,并于孵化后13小时消化。     

牙鲆(Paralichthys olivaceus)外周血单个核细胞的离体培养和电生理特征研究

利用细胞分层液(比重为1.083)进行养殖牙鲆外周血单个核细胞(包括淋巴细胞和单核细胞)的分离、纯化及培养,并采用膜片钳技术观察了单核细胞膜的电生理特征.结果表明,牙鲆外周血单个核细胞在添加PHA(30(u)g/ml)的M199(20?S)培养液中,于25clC塑料培养(Costar,美国)中能够贴壁生长传至6代,存活30天以上.单核细胞呈不规则圆形,细胞长径为(12.30±0.62)μm,短径为(10.29±1.05)μm,并具有较强的吞噬活性,吞噬率(PP)和吞噬指数(PI)分别达到(61.9士3.05)%和1.58±0.51;淋巴细胞多呈圆形或椭圆形,细胞长径为(8.50±0.82)μm,短径为(7.46±1.07)μm,吞噬率和吞噬指数分别达到(42.1±2.33)%和3.17±1.57.膜片钳研究结果表明,牙鲆单核细胞适宜进行膜片钳研究,记录的细胞均表达电压门控钠、钾、钙离子通道.