海洋微藻中EPA和DHA的超临界CO2提取方法研究

用超临界ＣＯ２萃取海洋微藻中的ＥＰＡ和ＤＨＡ,选用乙酸乙酯为改性剂,通过正交试验确定了工作压力、温度、ＣＯ２消耗量和改性剂添加量等工艺条件撮优化组合,对日本小球藻Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｈｉｒａｌａｉｉ,钝顶螺旋藻Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ和亚心形扁藻Ｐｌａｔｙｍｏｎａｓ ｓｕｂｏｒｄｉｆｏｒｍｕｓ进行提取试验,并与直接酯化法,Ｂｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ法、索氏抽提法和乙醇－乙烷法等溶剂法作对比     

海藻中EPA,DHA萃取技术的比较研究

在优化条件下比较了溶剂法（SE）、超声强化溶剂法（USE）、超临界CO2法（SFE）及超声强化超临界CO2法（USFE）从海藻中提取EPA和DHA。研究表明，超声对溶剂提取和超临界流体萃取过科都具有强化作用。超声强化溶剂提取过程，使提取时间缩短1h，提取温度低10℃，EPA，DHA提取率分别提高16．61％，16．41％，而且溶剂用量少。超声强化超临界萃取过程，萃取系统的压力降低了5MPa、萃取温度和萃取时间分别由45℃，210min降至35℃，180min，EPA和DHA萃取率分别提高15．09％和15．96％。UV与GC-MS分析结果表明，实验条件下，超声场的加入没有改变EPA，DHA的结构。     

饵料对网纹藤壶幼虫发育和附着的影响

研究了亚心形扁藻Platymonas subcordiformis、小球藻Chlorella sp.对网纹藤壶Balanus reticulatus幼虫发育和附着的影响。结果表明,在幼虫存活率以及金星幼虫和Ⅵ期无节幼虫所占比例方面,旺盛期亚心形扁藻对网纹藤壶幼虫的投喂效果均明显优于小球藻;旺盛期亚心形扁藻培养的金星幼虫附着率明显高于老化扁藻(p0.01)。因此,以旺盛期亚心形扁藻作为幼虫培养饵料应更有利于藤壶幼体的生长发育。     

塔玛亚历山大藻对两种单细胞藻生长的影响

本文研究了塔玛亚历山大藻(ATCI01品系)细胞再悬浮液、细胞破碎液、上清液、藻壳液、过滤液对亚心形扁藻悬浮性的影响,以及塔玛亚历山大藻与亚心形扁藻和小球藻之间的相互作用.结果发现,含有塔玛亚历山大藻成分的实验溶液均能在短时间内造成亚心形扁藻失去鞭毛形成胞囊而下沉,其中再悬浮液的影响最大.但亚心形扁藻受到的这种不利影响,一般在一周后即开始恢复.小球藻生长几乎不受塔玛亚历山大藻的影响,混合培养水体中的小球藻生长曲线与单种培养的几乎一致,其悬浮性也无明显改变.与亚心形扁藻进行混合培养的塔玛亚历山大藻(ATCI01品系和ATHK品系)均表现出培养前期增殖曲线与单种培养类似,但在一周后混合培养的塔玛亚历山大藻的增殖曲线开始下降,这一时间恰好与扁藻细胞密度开始增加的时间相一致.而与小球藻的混合培养的塔玛亚历山大藻在培养前期与单种培养一致,后期则种群数量有所下降.     

3种海藻单一或混合投喂对卤虫的饵料效果研究

用亚心形扁藻、绿色巴夫藻、极大螺旋藻为基本饵料,以纯投单胞藻或单胞藻中添加螺旋藻的方式来培养卤虫。结果表明:不同饵料搭配养殖卤虫的效果差异明显。纯扁藻和绿色巴夫藻搭配扁藻的养殖效果比较理想,卤虫成活率高,生长快速,生殖力大。极大螺旋藻养殖效果差。     

天然胶体对微藻生长的效应

利用错流超滤技术提取天然胶体,研究了胶体的有机碳浓度、粒径和来源对海水小球藻(Chlorellaspp.)、亚心形扁藻(Platymonassubcordiformis)和球等鞭金藻(Isochrysisgalbana)生长的影响。结果表明,当粒径为10kDa—0.2μm、胶体有机碳浓度为4.8—238.4μmol/L时,胶体使小球藻、扁藻和金藻的生长率分别提高了4.0%—7.0%、19.1%—28.9%和2.9%—8.7%。海水小球藻生长率的相对增长百分数(Y)值与胶体有机碳浓度(CCOC)呈线性正相关;亚心形扁藻和球等鞭金藻的Y与CCOC呈多项式相关;胶体对扁藻生长的刺激作用大于球等鞭金藻和海水小球藻。粒径为10kDa—0.2μm的胶体对3种藻的促进作用大于1—10kDa的胶体。河口、河流和生源胶体使小球藻的生长率提高1.5%—14.1%,不同来源的3种胶体对海水小球藻的促进作用依序是河流胶体>生源胶体>河口胶体。以上结果表明,天然胶体含有微藻生长所必需的营养元素,对微藻的生长有显著的刺激作用。     

海水钝顶螺旋藻藻胆蛋白的初步研究

对海水钝顶螺旋藻Spirulina platensis Geitler藻胆蛋白进行分离、纯化及光谱测定,其种类和吸收光谱与淡水钝顶螺旋藻相似。光强和氮源是影响藻胆蛋白的重要因子,低光强可诱导海水钝顶螺旋藻藻胆蛋白含量大幅度(19.7％)增加;氮源不足或缺乏可导致藻胆蛋白大量降解,随后补充氮源则可使藻胆蛋白含量得到恢复,因而证明藻胆蛋白在海水钝顶螺旋藻中亦可起“氮库(nitrogen pool)”的作用。海南三亚室外生产的海水钝顶螺旋藻干品的藻胆蛋白含量随季节呈现周期性变化,光强可能是主要的影响因子。     

对二甲苯和苯乙烯对海洋微藻生长和光合能力的影响

为了探讨对二甲苯和苯乙烯对海洋微藻的毒性效应,本研究以三角褐指藻和亚心形扁藻为材料,分别比较了不同浓度的对二甲苯和苯乙烯胁迫对微藻生长以及叶绿素含量的影响,并计算对二甲苯和苯乙烯对三角褐指藻和亚心形扁藻96hEC50。研究表明,对二甲苯和苯乙烯对三角褐指藻和亚心形扁藻生长的抑制呈显著的剂量-效应关系,对二甲苯和苯乙烯对三角褐指藻96hEC50分别为60.20mg/L和47.82mg/L,对亚心形扁藻的96hEC50值分别为26.49mg/L和85.62mg/L,相比而言,三角褐指藻对苯乙烯敏感,而亚心形扁藻对对二甲苯更为敏感。同时研究还发现,对二甲苯和苯乙烯胁迫下,试验微藻的叶绿素含量均随处理浓度以及处理时间而显著降低。这些结果为评估对二甲苯和苯乙烯对海洋微藻的毒性效应提供了依据。     

常用海产植物性活饵料氨基酸的测定

本文报道9种浮游植物所含有的重要氨基酸种类与含量的仪器测定结果,并与长毛对虾肉的氨基酸含量作营养价的比较.氨基酸的总含量小新月菱形藻为干样的34.6%,简单钙质角毛藻27.0%,三角褐指藻25.9%,亚心形扁藻22.9%,小球藻21.4%,异胶藻20.0%,盐藻19.6%,中肋骨条藻18.3%,湛江叉鞭金藻10.5%,长毛对虾肉60.9%,小新月菱形藻、简单钙质角毛藻、三角褐指藻、亚心形扁藻和长毛对虾肉不含有蛋氨酸,但是赖氨酸的含量高于其他种粪.我国当前较优质的植物性活饵料是小新月形藻、简单钙质角毛藻,三角褐指藻、亚心形扁藻和中肋骨条藻.     

钝顶螺旋藻藻蓝蛋白提取纯化新工艺

对钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）中藻蓝蛋白的提取和纯化方法进行了改进。用磷酸盐缓冲液循环冻融联合超声波破碎法,50％硫酸铵沉淀获得藻蓝蛋白（phycocyanin,PC）,提取率达到13．1%。粗蛋白提取液再经过两次羟基磷灰石柱（HA）层析和sephacryl-HR-200凝胶层析对其进行纯化,纯度达到4．71％。纯化后的PC在12％十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中得到两条带,分别是α和β两个亚基,分子质量分别为21．4ku和17．0ku。结果表明,通过上述分离纯化过程得到了较高提取率和电泳纯度的藻蓝蛋白。     

深海鲣鱼(Katsuwonus pelamis)眼窝油中DHA和EPA的提取及其抗抑郁活性研究

为了探索鲣鱼(Katsuwonus pelamis)鱼头眼窝肉中的DHA(C22:6n3)和EPA(C20:5n3)的抗抑郁活性效果,采用现代食品分离技术分离提取鲣鱼眼窝肉中的DHA和EPA,并对其抗抑郁活性效果进行研究。研究结果发现,当DHA和EPA剂量分别为50,100和300mg/kg时,能够对强迫游泳实验和悬尾实验的小鼠产生抗抑郁作用,其中低剂量(50mg/kg)表现为最活跃。DHA和EPA还能够对引起头抽动综合征的5-羟色胺小鼠产生轻微的增强作用。通过高效液相色谱-电化学法同时测定小鼠大脑区域内主要的单胺类神经递质及其代谢产物。本实验发现,与用压力媒介物处理的小鼠相比,DHA和EPA能够显著增加主要神经递质5-羟色胺和去肾上腺素在小鼠海马体、下丘脑及皮质层中的浓度,并减少5-羟色胺的代谢。DHA和EPA能够在预测抗抑郁特性的动物模型中(强迫游泳实验,悬尾实验)明确其具有抗抑郁活性效果,具有潜在的生物医学应用前景和环保效应。     

光照强度对海洋微藻脂肪含量及脂肪酸组成影响的研究

近年来，海洋微藻脂肪酸组成的研究及其应用越来越受到国内外科学家的重视。高度不饱和脂肪酸(PUFA)，特别是长链的n-3 PUFA，如二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)对海洋动物和人类都具有营养学和医学上的价值。在海洋微藻的培养过程中，光照强度是海洋微藻生长的条件之一，光线的明与暗，光度的强与弱，不仅对微藻的生长速率、产量有影响，而且对其脂肪含量和脂肪酸的组成也有影响(Teshima et al.，1983；Thompson et al.，1990； Renaud et al., 1991)。 作者在以往研究的基础上，选择了3种有代表性的海洋微藻：(1)小球藻Chlorella sp-2(李荷芳等，1999)，此藻脂肪酸中EPA含量高、且不含DHA；(2)球等鞭金藻(Isochrysis galbana)，该藻DHA含量较高，但几乎不含EPA；(3)前沟藻(Amphidinium sp.)的EPA、DHA含量均高。将以上3种微藻作为原料，在不同的光照强度下进行培养，测定并分析藻体中的脂肪含量和脂肪酸组成的变化，从而了解光强对海洋微藻脂肪含量及其脂肪酸组成的影响。     

3种海洋养殖贝类体内的脂肪酸组成

分析了华贵栉孔扇贝Ｃｈｌａｍｙｓｎｏｂｉｌｉｓ（Ｒｅｅｖｅ）、合浦珠母贝Ｐｉｎｃｔａｄａｍａｔｅｎｓｉｉ（Ｄｕｕｋｅｒ）、翡翠贻贝Ｐｅｒｎａｖｉｒｌｄｉｓ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）的软体部、肝胰腺和生殖腺的脂肪酸组成及含量。３种贝的各组织中,不饱和脂肪酸含量均较饱和脂肪酸含量高。多不饱和脂肪酸（ＰＵＦＡ）含量丰富,其中二十碳五烯酸（ＥＰＡ）和二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）含量相当高,占总脂肪的２５．２６％－２７．２１％。３种贝中,翡翠贻贝的油含量最高（１３．６８％）,软体部的ＥＰＡ和ＤＨＡ含量也较高（２６．９５％）,最具开发利用价值。     

营养盐对小球藻的生长、脂肪含量及EPA含量影响的研究

二十碳五烯酸(EPA)是n-3系列高度不饱和脂酸,具有降血脂、抑制血小板聚集、降血压、抗动脉粥样硬化等作用(刘玉军,1987;Clemons, et al.,1985)。人和动物体几乎不能合成EPA,只能从食物中获取,而海藻是不饱和脂防酸的(原始)初级生产者。 在以往研究的基础上,我们选择了EPA含量较高,且易于养殖的小球藻 Chlorella sp-2 (李荷芳等,1999)为原料,用不同的营养液对其进行培养,分析藻体中的脂肪和EPA的含量变化,以便选择能使小球藻生长好、脂肪含量及EPA含量均高的营养条件,为开辟EPA的新来源提供依据。     

营养盐对球等鞭金藻生长和脂肪酸含量及组分的影响

球等鞭金藻细胞内可富集丰富的二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA),这些多不饱和脂肪酸(Polyunsatured fatty aicd,PUFA)具有重要的生理活性。采用气相色谱法研究了不同浓度的NaNO3和NaH2PO4对球等鞭金藻生长和脂肪酸含量及组成成分的影响。结果表明,NaNO3和NaH2PO4对球等鞭金藻生长和脂肪酸含量(占干重的百分含量)及组成成分均有影响。在初始NaNO3浓度为1~74.8mg/L和初始NaH2PO4浓度为0.47~4.48mg/L范围内,随着NaNO3和NaH2PO4浓度的增加,球等鞭金藻的细胞密度和比生长速率都增大,脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量则都呈现下降趋势;C22∶6(DHA)占干重的百分含量随着NaNO3和NaH2PO4浓度的增加而下降,但在总脂肪酸中的百分含量则增加,当NaNO3浓度为74.8mg/L时可达到9.92%,当NaH2PO4浓度为4.48mg/L时可达到7.81%。     

氮浓度对四株海洋绿藻总脂含量和脂肪酸组成的影响

本文用NaNO3作为氮源,分别作了氮浓度的五个水平对2属(小球藻属、裂丝藻属)的四株绿藻的生长率、总脂含量及主要脂肪酸组成的影响。C19、C97和C102的脂肪含量随N浓度的改变而有较大变化,其中C102在1.6m mol/L时脂肪含量达到最大值(24.8%)。C95的脂肪含量随氮浓度变化不大。同时,由氮浓度引起的平均生长率μ与总脂含量之间无明显相关关系。四株绿藻的EPA(20∶5n-3)和PUFAs(polyunsaturated fatty acids)含量随培养基中氮浓度的改变有较大变化但因种而异。C95和C97均在中等氮浓度时EPA含量达到最大值,分别为23.8%和27.4%。C19和C102在高氮浓度(40mmol/L)获得EPA的最大值,分别为25.7%和26.6%。     

大西洋庸鲽(Hippoglossus hipoglossus L.)精液脂肪酸分析及激素GnRHa诱导对其组成的影响

采用气相色谱检测的方法,进行大西洋庸鲽精液脂肪酸组成分析及激素GnRHa诱导对其组成影响的研究。结果表明,大西洋庸鲽精液中含量最高的脂肪酸种类为22:6n-3(DHA,二十二碳六烯酸),占总脂肪酸比例25.67%±0.94%;其次为16:0(PA,棕榈酸)、20:5n-3(EPA,二十碳五烯酸);重要必需不饱和脂肪酸20:4n-6(AA,花生四烯酸)含量较低,为1.76%±0.01%。精液中高不饱和脂肪酸(PUFA)含量较高,为44.25%±0.30%;饱和脂肪酸(SAT)含量为27.72%±0.22%。重要脂肪酸比例DHA/EPA为2.33±0.26;EPA/AA为6.30±0.51;n-3/n-6为9.22±0.60。激素诱导未对精液中脂肪酸组成产生显著影响。重要必需脂肪酸DHA、EPA、AA,以及n-3、n-6等重要种类的脂肪酸总量在激素诱导组与非诱导对照组样品间无显著差异;在激素诱导后的三个取样时间的样品间也无显著差异(P0.05)。     

鱼油脂肪酸组成及其含量分析

分析测定了鱼是鱼鱼油的脂肪酸组成、含量及分布范围。脂肪酸组成从１４碳到２２碳。其中具有生理功能活性物质的二十碳五烯酸（ＥＰＡ）、二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）占总量的２１％左右。比较了东海１４种鱼的鱼油中ＥＰＡ、ＤＨＡ含量的高低,得出鱼是鱼鱼油中的ＥＰＡ、ＤＨＡ含量除低于鲣鱼外,均高于乌贼、小黄鱼、白姑鱼、银鲳鱼、鳓鱼和黄姑鱼等名贵海鱼。     

High levels of n−3 polyunsaturated fatty acids in Euphausia pacifica and its role as a source of docosahexaenoic and icosapentaenoic acids for higher trophic levels

In Euphausia pacifica specimens, phospholipids (PL, 44.1–81.2%) such as phosphatidylethanolamine (PE, mean±standard error, 26.1±2.1%) and phosphatidylcholine (PC, 29.0±2.3%) were found to be the dominant lipids. Compared to many other marine organisms, the level of PL was markedly high. The major fatty acids in the TAG of E. pacifica were saturated fatty acids (SFA, 14:0 and 16:0), monounsaturated fatty acids (MUFA, 16:1 and 18:1), and polyunsaturated fatty acids (PUFA, 18:4 n−3 and 20:5 n−3, icosapentaenoic acid: EPA). The only fatty acids found in the tissue PL were SFA (16:0), MUFA (18:1), and PUFA (20:4 n−6, arachidonic acid: AA, EPA, and 22:6 n−3, docosahexaenoic acids: DHA). The comparatively high levels of 14:0, 16:0, 16:1 n−7, 16:2 n−4, 16:4 n−1, 18:1 n−7, 18:1 n−9, 18:4 n−3, and EPA in the TAG may be affected by the lipid composition of its phytoplankton prey, such as diatoms, which generally contain high amounts of these fatty acids. The levels of short chain 14:0, 16:1 n−7, 16:2 n−4, 16:4 n−1, 18:1 n−9, and 18:4 n−3 decreased in PL, while AA, EPA, and DHA increased. In particular, the levels of n−3 PUFA in PL were markedly high in all specimens. The mean proportion of EPA plus DHA accounted for more than 45% (55.0% in PE and 47.7% in PC) of the total fatty acids. These results suggest that E. pacifica, which contains markedly high levels of EPA and DHA, may biosynthesize these PUFA by carbon chain elongation and desaturation or selectively accumulate n−3 PUFA. In addition, their lipids may be an important source of n−3 PUFA for higher marine animals, such as the pelagic marine fishes (sardines, anchovies, and other small fishes), which mainly prey on these euphausiids. Marine fish accumulate high levels of these n−3 PUFA because they are unable to synthesize DHA.     

富集DHA、EPA的保健蛋和肉

以添加质量浓度为 5 0 kg/m3 的粉末化鱼油的饲料及一般饲料喂养小鹌鹑。 2个月后 ,对所产的鹌鹑蛋和鹌鹑肉进行 EPA和 DHA测试。结果表明 :全蛋黄中的 EPA和 DHA平均值 ,喂添加鱼油饲料的鹌鹑蛋远高于喂一般饲料的鹌鹑蛋 ;喂 5 d添加鱼油饲料的鹌鹑蛋其 EPA和 DHA平均值可达 49.0 6 mg;且该值将随着喂添加鱼油饲料天数的增加而增大。喂 6 0 d添加鱼油饲料时 ,每只鹌鹑肉含 EPA和 DHA的平均值为喂 6 0 d一般饲料的 5 2倍。这种富含 DHA的蛋和肉没有鱼油的特殊腥味 ,特别适合孕妇、婴儿食用 ,也适合于中、老年人作为保健品食用