壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

以本实验室分离的产壳聚糖酶YJ02菌株出发,制备壳聚糖酶发酵液,经离心、(NH4)2SO4分级盐析、Q-SepharoseFast Flow阴离子交换、Sephacry S-100凝胶过滤分离纯化步骤,SDS-PAGE显示为一条带,壳聚糖酶纯化了28.9倍,收率为47.6%。该酶的性质研究表明,该酶的分子量为66.2KD,最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0;Mn2 对酶活力有明显的促进作用,Cu2 ,Fe3 ,Hg2 对酶活力有抑制作用;小分子有机物EDTA和SDS对酶活力有抑制作用,而IAA和β-巯基乙醇对酶活力稍有促进作用。该壳聚糖酶对高脱乙酰度壳聚糖底物水解作用强,酶解位点可能为NGlc-NGlc,酶最大反应速度Vmax=4.1μmol/min,常数Km为64mmol/L。此壳聚糖酶水解壳聚糖制备的壳寡糖数均分子量为2 400Da。     

贻贝超氧化物歧化酶的分离纯化和部分性质

采用热变性－硫酸铵分级沉淀－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和ＤＥ５２柱层析的方法从贻贝中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶,并对其部分性质进行分析鉴定。结果该酶的比活力为９４５３．３Ｕ／ｍｇ（ｐｒｏｔｅｉｎ）,提纯倍数为６０９．９,对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ敏感,Ｔ氏液和ＳＤＳ对酶活性没影响,对热较稳定。     

应用CEDA和ASPIC软件包对巴基斯坦国的多齿蛇鲻(Saurida tumbil)渔业的最大持续产量的初步研究

The catch and effort data analysis(CEDA) and ASPIC(a stock assessment production model incorporating covariates) computer software packages were used to estimate the maximum sustainable yield(MSY) from the catch and effort data of Greater lizardfish Saurida tumbil fishery of Pakistan from 1986 to 2009. In CEDA three surplus production models of Fox, Schaefer and Pella-Tomlinson were used. Here initial proportion(IP) of 0.5 was used because the starting catch was roughly 50% of the maximum catch. With IP = 0.5, the estimated MSY from Fox model were 20.59 mt and 38.16 mt for normal and log-normal error assumptions, while the MSY from Schaefer and Pella-Tomlinson were 60.40, 60.40 and 60.40 mt, for normal, log-normal and gamma error assumptions respectively. The MSY values from Schaefer and Pella-Tomlinson models of three error assumptions were the same. The R2 values from those three models were above 0.6. When IP = 0.5, the MSY values estimated from ASPIC from Fox were 132 mt, and from logistic model were 69.4 mt, with R2 value above 0.8. Therefore we suggest the MSY of S. tumbil fishery from Pakistan to be 60–70 mt, which is higher than the latest catch, thus we would recommend that the fishing efforts for this fishery may be kept at the current level.     

腐败希瓦氏菌噬菌体的分离纯化和生物学性质

以腐败希瓦氏菌Sp225为宿主菌,采用噬菌斑法和双层平板法分离纯化腐败希瓦氏菌噬菌体Spp001,并对其生物学性质进行研究。经分离纯化得到的Spp001裂解性好,噬菌斑清晰、大小一致。经鉴定,Spp001为长尾噬菌体科,核酸为DNA。对其性质研究表明,Spp001具有较好的热稳定性,且耐碱不耐酸,其最佳感染复数为10,一步生长曲线显示该噬菌体感染宿主菌潜伏期约为10min,爆发期约为20min,裂解量为98。研究首次分离纯化了腐败希瓦氏菌的噬菌体Spp001并研究其生理特性,对进一步研究抑制冷藏水产品的腐败具有重要意义。     

锯缘青蟹碱性磷酸酶分离纯化及部分理化性质研究

于１９９５年２月在厦门海域采集锯缘青蟹,取其内脏经正丁醇抽提,硫酸铵分级分离ＤＥＡＥ－５２离子交换柱层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤柱层析纯化,获得碱性磷酸酶 制剂,以快速 蛋白液相色谱及聚丙烯酰胺凝胶电泳检验萁 纯度,获得单一蛋白纯的酶 制剂。     

一种来自海洋细菌的血纤维蛋白溶酶的分离纯化及性质研究

利用硫酸铵分级盐析、DEAE－纤维素阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析法对由海洋细菌FE92－8分泌的纤维蛋白溶酶进行了分离纯化，结果得到SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳单一区带。性质研究发现，该酶分子量为12.6kD，等电点为7.45，琼脂糖－纤维蛋白平板法测得该酶作用的最适温度为50℃，最适pH为8.0，在37℃，pH为8.0的情况下表现出很好的稳定性，温度起来50℃热稳定性较差，在碱性环境中稳定性较在酸性环境中稳定性强，阴性平板和阳性平板对比实验发现，该酶只有纤溶活性而无激酶活性，体外实验发现，该酶具有快速溶解血栓的能力。     

鲨鱼降钙素的分离纯化及性质研究

降钙素 (Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ,ＣＴ)是Ｃｏｐｐ在１９６１年发现并命名的。随后研究发现 ,降钙素广泛存在于哺乳动物的甲状腺、甲状旁腺、胸腺以及肾上腺组织和鱼类的鳃后体组织中。在各种降钙素中鱼类的活性最高 ,且半衰期最长。鲑鱼降钙素的活性是人降钙素活性的几十倍 ,半衰期比人的长３～６倍。降钙素的主要生理作用是调节体内钙、磷的代谢 ,它不仅是治疗变形性骨炎 (Ｐａｇｅｔ氏病 )的首选药物 ,而且还能治疗各种原因引起的高血钙症 ,尤其是近年发现在治疗老年性骨质疏松方面的疗效显著 ,给降钙素临床应用带来更广泛的前景［１］。…     

菲律宾蛤仔碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

经Tris-HCl缓冲液浸提、硫酸铵分级沉淀盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析等步骤,从菲律宾蛤仔内脏团中分离得到碱性磷酸酶,SDS-PAGE显示为单一条带,提纯倍数为14.42,比活力达到131.08U/mg。酶学性质研究表明:该酶亚基分子量约44kD,最适反应温度为45℃,最适pH值为9.0,米氏常数Km为0.098mmol/L,最大反应速度Vmax为1.01μmol/(mL·min)。Ca2+、Mg2+对酶活力表现出显著的激活作用。     

基于线粒体控制区序列的花斑蛇鲻遗传多态性分析

花斑蛇鲻(Saurida undosquamis)是一种重要的底层经济鱼类, 本研究利用线粒体控制区(D-loop区)序列分析了中国近海分布的花斑蛇鲻的遗传结构和遗传多样性, 一共测定了6个地理群体129尾样本的D-loop区全序列。结果显示, 全长为921bp的序列包含71个多态性位点, 共检测到101个单倍型。花斑蛇鲻总体呈现很高的单倍型多样性(0.9873 ± 0.0048)和较低的核苷酸多样性(0.0132 ± 0.0067)的特征。基于邻接法构建的单倍型系统发育树的拓扑结构很浅, 没有形成分化明显的支系。单倍型在各个地理群体中的分布呈分散交叉状态, 表明地理群体间没有显著的遗传分化。6个群体的分子方差分析显示, 花斑蛇鲻绝大部分的遗传变异(99.87%)来源于群体内的个体之间, 而群体间的变异仅占0.13%。大部分地理群体之间的遗传分化指数(F_ST)均很小, 揭示了群体间的基因交流很频繁, 存在高度的遗传同质性。这些研究结果表明中国近海的花斑蛇鲻遗传多样性丰富, 没有明显的遗传分化, 是一个随机交配群, 可以作为同一个渔业单元来管理。     

海洋细菌QY202产κ-卡拉胶酶的分离纯化和性质研究

为获得高效降解卡拉胶菌株,从青岛太平角海域采集的角叉菜表面分离到1株高产κ-卡拉胶酶的海洋交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)QY202,经硫酸铵沉淀、脱盐、DEAE阴离子交换层析等步骤从该菌株发酵液上清中分离纯化得到1种专一性降解κ-卡拉胶的κ-卡拉胶酶,并研究了该酶的基本酶学性质.结果表明该酶被纯化了23.1倍,回收率为43.9%,分子量大小为33.2 kDa.酶的最适反应温度为40 ℃,最适反应pH为8.0,在0～40 ℃,pH=7.0～8.0之间酶活力较稳定.酶对底物κ-卡拉胶的米氏常数Km值为1.6 mg/mL.Na~+、K~+对酶活有促进作用,而Hg~(2+)、Cu~(2+)强烈抑制酶的活性.酶解κ-卡拉胶的主产物为硫酸新κ-卡拉二糖和硫酸新κ-卡拉四糖.     

Purification and characterization of lipoxygenase from Entermorpha clathrata

The purification and characterization of lipoxygenase （LOX, EC 1.13.11.12） from the green algae Enteromorpha clathrata were studied. Two components marked LOX - 1 and LOX - 2 were purified and their molecular masses were estimated to be 102 and 79 ku by SDS - PAGE. Both LOX - 1 and LOX - 2 were stable over the pH wide range 6.0 - 10.0 and had the optimum pH of 10.0 and 8.6, at optimum temperature of 30 and 25℃, respectively. Substrate specificities of LOX - 1 and LOX - 2 were the greatest towards linoleic acid, followed by arachidonic acid and linolenic acid. The Michaelis constant values of LOX - 1 and LOX - 2 were 0.23 and O. 20 mmol/dm^3 with the substrate of linoleic acid. The LOX activities were stimulated greatly by Ca^2＋ but inhibited by Hg2 ~ and the antioxidants such as BHA, BHT and TBHQ. The hydroperoxide products of LOX were analysed by HPLC with the substrate of methyl linoleate, and the results showed that LOX - 1 formed mainly 9-hydroperoxides while LOX - 2 formed both 9- and 13-hydroperoxides at a ratio of 24： 76.     

长牡蛎碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

本文以长牡蛎为酶源提取材料,用正丁醇抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-52和Sephadex G-100柱层析,得到一定纯度的碱性磷酸酶,提纯倍数为61.96,比活力达1.326U/mg.该酶的最适pH值9.6,最适温度38℃,初速度6.8μmol/(dm~3·min),米氏常数Km值为1.30mmol/dm~3.实验结果表明,Mg~(2+)对该酶有明显的激活作用;Zn~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)对该酶有明显的抑制作用.     

Purification, characterization and ELISA of metallothionein from red scorponifish, Sebastiscus marmoratus

INTRODUCTIONATislowKWCys-rich(aboutonethird)metal-bindingprotein,lackofaromaticaminoacidresidues.AThasbeenfoundinkidneysandliversofmanymammals,andalsoininvertebrates,microorganismsandplants.ThepresenceofanAT-likeproteinhasbeenfoundinanumberofaquaticorganisms,includingtheplaice(Overnelletal.,1977),rock-fish(Olafsonetal.,1974),goldfish(Marafant,1976),andcrabandshrimp(Olafsonetal.,1979).AThasbecomethesubjectofgreatInterestinrecentyearsduetotheirwideexistenceandmetalaffinity.Scientistsha…     

豚鼠气单胞菌CB101中几丁质酶的纯化、鉴定及其基因克隆

豚鼠气单胞菌CB101在胶体几丁质诱导下产生多种分子量不同的几丁质酶,其中分子量最大的一个几丁质酶Chi1(约91.5kDa)的编码基因已经被克隆.本文报道从CB101发酵液经硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析和MonoQ离子交换柱层析,分离纯化出其中的一个分子量约为60KDa的几丁质酶.N端测序的结果表明该酶是Chi1剪缺掉N末端信号肽部分、C末端A区和两个几丁结合区的产物.构建了CB101基因组的cosm id文库,从中筛选到9个产几丁质酶的克隆子,克隆子分析表明它们包含的几丁质酶基因都是chi1.蛋白分离、纯化和基因克隆的实验都暗示CB101的几丁质酶系统只包含一个几丁质酶基因.     

Flammeovirga sp. SJP92琼脂酶的分离纯化及其酶学性质

琼胶酶是一类能够降解琼脂糖生成琼胶寡糖的酶类,具有广泛的应用范围.从海洋性高产琼胶酶菌株Flammeovirga sp. SJP92的发酵液经硫酸铵沉淀,DEAE 琼脂糖离子层析,分离纯化获得了一个分子量约为70KDa的琼胶酶AgaB.经过酶学性质分析,它的最适pH值为70,最适温度为40℃,在最适温度下能够保持较好的稳定性.进一步的分析表明, MgSO4和β Me对该酶有明显的促进作用,而CaCl2、MnCl2、ZnCl2、CoCl2、FeCl3、CuSO4等则会强烈抑制它的活性.此外,通过产物分析表明,该酶能够通过内切作用将琼脂糖最终降解成6糖和4糖.AgaB的分离纯化及其酶学性质分析为其工业应用奠定了基础.     

星虫胶原蛋白的纯化及其性质的初步分析

本实验研究了水生环节动物星虫胶原蛋白的提取及纯化方法.SDS-PAGE电泳分析结果显示,所提取的胶原蛋白纯度较高.通过粘度测定分析星虫胶原蛋白的变性温度约35℃.酶解性质的研究表明,纯化的星虫胶原蛋白可被胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K水解.     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex- 75 ,Sephadex- 10 0凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌 (Vibriop acini) X4 B- 7菌株产生的碱性蛋白酶 ,得到电泳纯酶制品 ,并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示 :纯酶的分子量为 2 7KD,等电点 p I=8.7,最适反应 p H9.0～ 10 .5 ,最适反应温度 5 0～ 6 0℃。ED-TA对酶活力没有影响 ,高酶浓度可以降低 SDS对酶的抑制作用 ,该酶可用于解聚组蛋白。 DNA琼脂糖凝胶电泳证明 :酶对 DNA酶有降解作用 ,而对 DNA没有降解作用 ,该酶有希望应用于核酸的提取