Studies on rickettsia-like organism (RLO) disease of tropical marine pearl oyster-Epidemiological investigation of RLO disease in juvenile populations of maricultured Pinctada maxima

The death which occurred in juvenile population was a severe problem in the course ofPinctada maxima artificial culture. With the methods of field investigation, histological study and statistic analyses, the epidemiological study was carried out on the disease and death in juvenile populations of Pinctada maxima in the Xinying Pearl Oyster Mariculture Farm of Lingao County (for the A, B and C batches of cultured juveniles hanged in the sea) and the Xincun Pearl Oyster Mariculture Farm of Lingshui County (for the D batch of cultured juvenile hanged in the pond), Hainan Province from November 1993 to April 1995.The results show that the deaths which occurred in juvenile populations of Pinctada maxima presented an outbreak pattern. The peak of mortality rates, in general, occurred in 4-to 6-month old pearl oyster juveniles, and the mortality rates gradully declined with the extention of pearl oyster age after cul-turing 8 months. The correlation between the mortality rates of juvenile populations and mean     

热带海洋珍珠贝类立克次体(RLO)病研究 Ⅷ.养殖大珠母贝贝苗养成期群体RLO病流行病学研究

大珠母贝人工养殖过程中,幼贝死亡是一个严重的问题。1993年11月至1995年5月,采用现场调查、实验室研究和数理分析相结合的方法,在海南省临高县新盈珍珠贝养殖场自然海区吊养的A,B,C3批养殖贝和陵水新村珍珠贝养殖场养殖池吊养的D批养殖贝的发病和死亡情况进行了流行病学凋查.结果显示,大珠母贝幼贝群体的死亡是以暴发性方式发生,幼贝群体的大批量死亡高峰一般发生在4～6月龄期,8个月以后随着龄期的延长,死亡率显著降低.幼贝群体死亡率与贝体平均体长的关系是4cm以下的贝体死亡率较高,1～3cm阶段处于死亡高峰期内,5cm以上的贝体死亡率显著降低.大珠母贝幼贝群体的死亡率与类立克次体感染(即RLO平均感染严重度指数SI)之间存在显著的相关性,在RLO感染的高峰之后或当中部相应伴随贝群体死亡率的高峰,随着RLO感染的降低,贝群体的死亡率也明显降低。在4批养殖贝群体中,仅在A批养殖贝群体样本中发现有少量纤毛虫寄生(感染率为87.5%,感染强度为3.56个/10倍物镜).这几批幼贝群体的死亡与海水温度、盐度之间均无相关性。     

Studies on rickettsia-like organism (RLO) disease of tropical marine pearl oyster——Epidemiological investigation of RLO disease in larvae populations of maricultured Pinctada maxima

The onset and sPread of diseases in dricultured Anrnals are resulted frOm the mutule ef-fect of pathogen, hOSt and environrnnt. Epidemology takes the diseased AnInal poPulationsas the study object, rnakes observation and exPeriment on the field as the primp method ofstUdy and stuha the mutule effec Of PathOgen, hOS and environrnen by inVeSigating the na-ttire distribution of diseases and ePidendc mechedsm. To date, succeSSful exarnple of epidend-obo study on lerne shellfish deseases is…     

海湾扇贝养殖过程中的流行病学调查研究

2001~2002年,对莱州湾养殖海湾扇贝进行了较系统地流行病学调查研究.以海湾扇贝养殖集中海区莱州市金城镇扇贝养殖场为定点调查和样品采集点.调查内容主要包括海湾扇贝各养殖期的死亡率和可疑病原生物检测,同时对pH,溶解氧,温度,盐度等理化环境因子进行连续监测.调查结果显示:海湾扇贝在0.5~1.3cm的幼贝阶段死亡率较高,达50%;随后死亡率降低,1.3~2.2cm的幼贝阶段死亡率约为20%,以后各阶段死亡率平稳,均在7%以下,累积死亡率约为60%.对环境理化因子的调查显示,pH,溶解氧、盐度的变化幅度不大,与扇贝死亡率无明显相关性;温度变化与死亡率有一定的相关性,即低温(20℃以下)可能是养殖海湾扇贝幼贝重要的环境胁迫因子,而高温(27℃左右)对海湾扇贝成贝生长无不良影响.通过对可疑致病性生物因子的调查研究及病理学观察表明,海湾扇贝在养殖过程中可感染多种微生物,其中原核微生物类立克次体(RLO)在养殖过程各生长阶段均可检出,即0.5,1.5,3.0,3.6和5.0cm的海湾扇贝RLO的感染率分别为15%,35%,80%,50%和20%;RLO的感染强度分别为1.0,1.5,16.0,11.5和5.0.在病原生物检查过程中,除RLO以外还发现有类支原体原核生物(MLO)寄生.结合感染强度和组织病理学的相关性分析,初步认为类立克次体(RLO)可能是海湾扇贝在海上吊养的幼贝阶段发病死亡的致病因子.     

热带海洋珍珠贝类立克次体(RLO)病研究 Ⅶ 大珠母贝育苗期幼虫群体RLO病流行病学研究

对流行病学分析显示大珠母贝幼虫群体的死亡是以暴发性方式发生,从胚胎发育前期至变态期,幼虫存在两个死亡高峰,分别位于壳顶期之前或壳顶期和壳顶后期.大珠母贝幼虫群体的死亡率与RLO感染之间存在显著的相关性,在RLO感染的高峰之后均相应伴随幼虫群体死亡率的高峰,随着RLO感染率和感染强度的降低,幼虫群体死亡率也明显降低.在TEM下未发现未受精卵母细胞、受精卵和胚胎早期幼虫感染RLO,最先出现RLO包涵体阳性感染的时期为24h尚未摄食的D形期幼虫,故认为RLO可能不是通过垂直传播,而是通过外界接触感染的方式感染宿主,贝体感染至发病死亡存在潜伏期.     

栉孔扇贝大量死亡的流行病学调查研究

2001~2003年,对养殖的栉孔扇贝进行了较系统地流行病学调查研究.以栉孔扇贝养殖集中海区长岛县亚美扇贝养殖场为定点调查和样品采集点.调查内容主要包括栉孔扇贝各养殖期的死亡率和可疑病原生物检测,同时对pH、溶解氧、温度、盐度等环境理化因子进行连续监测.调查结果显示:栉孔扇贝在养殖初期幼贝阶段死亡率较低,随后死亡率逐渐升高,至8月24日月死亡率达最高点71%.9月份以后死亡率开始下降.至10月份累积死亡率达90%以上.对环境理化因子的调查显示,pH、溶解氧、盐度的变化幅度不大,与扇贝死亡率无明显相关性;温度变化与死亡率似有一定的相关性,即高温(月平均23℃以上)可能是养殖栉孔扇贝重要的环境胁迫因子.通过对可疑致病性生物因子的调查研究及病理学观察表明,栉孔扇贝在养殖过程中可感染多种微生物,其中原核微生物类立克次体(RLO)在养殖过程各生长阶段均可检出,其感染率和感染强度与扇贝死亡率呈现一致的趋势.在病原病理检测中,发现RLO的大量感染与组织细胞严重病理损伤密切相关.在病原生物检测过程中,除RLO以外还发现有类枝原体原核生物(MLO)和类病毒(VLP)寄生.RLO的人工感染实验结果说明RLO是栉孔扇贝重要的病原菌.结合感染率和死亡率、感染强度和组织病理学的相关性以及感染实验的结果分析,认为类立克次体(RLO)可能是栉孔扇贝养殖过程中大量死亡的主要致病因子.     

热带海洋珍珠贝类立克次体病研究 Ⅴ.超微病理学及致病机理研究

对海水养殖大珠母贝和合浦珠母贝类立克次体(Rickettsia-like organism,RLO)病(简称RLO病)的超微病理学进行了研究.结果显示细胞及亚细胞结构经历由变性发展到坏死的病变过程,如胞核由核浓缩、核碎裂发展为核溶解;线粒体出现肿胀,嵴和基质改变及内质网脱颗粒、扩张和囊泡变等一系列混浊肿胀和水泡变性的基本特征;最终,细胞器完全溶解消失使胞质疏松,呈崩解或溶解状.结合先前组织细胞病理学和本文超微病理学研究的结果认为,RLO导致宿主细胞变性坏死的机制有:(1)直接损伤细胞的质膜;(2)直接干扰或破坏细胞的正常代谢;(3)对肝胰腺的广泛破坏可能通过破坏血管内皮系统间接造成肝胰腺上皮细胞的血供障碍,进而引起营养和呼吸代谢障碍或(和)与菌体释放的内毒素有关.     

Rickettsia-like organism infection associated with mass mortalities of blood clam, Tegillarca granosa, in the Yueqing Bay in China

A series of mass mortalities of the cultured blood clam, Tegillarca granosa, occurred in the Yueqing Bay of China from 2005 to 2009. An obligate intracellular prokaryote, designated as rickettsia-like organism (RLO), was frequently found in the moribund or dead blood clam sample during ultrastructural examination. These organisms were usually round, ellipsoid or occasionally dumbbell-shaped, ranged from approximately 0.28 to 0.71 μm in size and had a trilaminar cell wall. Two reproductive modes of organisms, transverse binary fission and budding, were observed. The organisms were able to form eosinophilic inclusions. Most inclusions were found within epithelial and connective tissues of the mantle, gills and digestive tube. The biological and morphological characteristics indicate that these organisms may belong to the family Rickettsiaceae. RLOs exhibited significant pathogenicity. Cytopathological examinations revealed extensive necrosis and destruction in the infected cell. The degree of tissue destruction was positively related to the number of RLO inclusions in the tissues, and the cytopathological effects were positively related to the number of intracellular RLO. RLOs and their inclusions were discovered throughout different disease areas and in different time periods. The infection intensity of the RLOs was positively correlated with the mortality rate of clams. Therefore, RLO infection might be associated with mass mortalities of cultured blood clams in the Yueqing Bay.     

热带海洋珍珠贝类立克次体病研究 Ⅳ.组织细胞病理学研究

类立克次体（RLO）对大珠母贝和合浦珠母贝具有强烈的致病性,引起基本一致的病理变化．在急性坏死破坏期内,RLO导致外套膜、鳃、消化管、肝胰腺、生殖腺腺管及全身血管内皮系统等多器官组织的变性坏死,使器官组织结构的完整性遭到破坏,破坏程度与RLO包涵体的数目密切相关,而细胞的破坏与细胞内RLO的生长发育及繁殖到大量数目密切相关．鉴于此,将RLO引起的珍珠贝病称为类立克次体病（RLO病）．RLO病呈急性变质性炎症和慢性增生性炎症病理,在前者细胞呈现崩解性坏死、溶解性坏死和退变性坏死;在后者存在实质细胞增生和纤维母细胞增生为纤维细胞并形成纤维化．根据炎症病理的发展过程,RLO病可分为急性坏死破坏期和慢性增生修复期．     

大珠母贝Pinctada maxima(Jameson)亲贝人工促熟培育与诱导排放精卵的研究

用亚心形扁藻Platymonassubcoriformis,湛江等鞭藻Isochrysiszhanjiangensis及某些配合饲料培育大珠母贝pinctadamaxima(Jameson)亲贝,可以促进性腺发育成熟并保持易于诱导排放状态。在需要进行人工育苗时,给亲贝以一定的刺激,即可诱导产卵排精。采用这种方法进行大珠母贝人工育苗,受精率和活率都比剖贝取卵授精的方法高。而且不用杀死大珠母贝亲贝。     

几种大型珍珠贝人工苗网箱式中间培育的研究

采用网箱式和传统式2种方法,在3个不同类型的海区(内湾性的陵水县黎安港、半开放性的雷州市流沙港、开放性的三亚市六道湾),进行几种大型珍珠贝人工苗的中间培育.经90d的中间培育后,结果表明:网箱式培育与传统式培育相比较,几种珍珠贝的生长速率和成活率都有较大幅度的提高.其壳高生长速率的增幅分别为:珠母贝18.9%、18.2%、19.9%;大珠母贝22.8%、20.6%、23.5%;企鹅珍珠贝21.8%、20.7%、21.7%;均为差异显著(P＜0.05)或差异极显著(P＜0.01).成活率的增幅分别为:珠母贝175.0%、147.9%、133.9%;大珠母贝172.8%、159.0%、127.4%;企鹅珍珠贝122.5%、118.2%、102.2%,均为差异显著(P＜0.05)或差异极显著(P＜ 0.01).     

热带海洋珍珠贝类立克次体病研究 Ⅳ.组织细胞病理学研究

类立克次体(RLO)对大珠母贝和合浦珠母贝具有强烈的致病性,引起基本一致的病理变化.在急性坏死破坏期内,RLO导致外套膜、鳃、消化管、肝胰腺、生殖腺腺管及全身血管内皮系统等多器官组织的变性坏死,使器官组织结构的完整性遭到破坏,破坏程度与RLO包涵体的数目密切相关,而细胞的破坏与细胞内RLO的生长发育及繁殖到大量数目密切相关.鉴于此,将RLO引起的珍珠贝病称为类立克次体病(RLO病).RLO病呈急性变质性炎症和慢性增生性炎症病理,在前者细胞呈现崩解性坏死、溶解性坏死和退变性坏死;在后者存在实质细胞增生和纤维母细胞增生为纤维细胞并形成纤维化.根据炎症病理的发展过程,RLO病可分为急性坏死破坏期和慢性增生修复期.     

合浦珠母贝三倍体死亡率观察

以染色体倍性鉴定方法检查合浦珠母贝Ｐｉｎｃｔａｄａｍａｒｔｅｎｓｉｉ三倍体处理组的４个不同发育生长期（即２—４细胞期、担轮幼虫期、６个月小苗及１４个月成员）的三倍体比例，并将同一处理组培育出的贝苗经倍性鉴定后将二倍体和三倍体分开，在海上吊养１周年，分别检查其死亡率，观察比较三倍体合浦珠母贝的死亡状况。结果表明，在胚胎发育期，三倍体和二倍体的死亡率差异不大；在直线铰合期至变态附着成为贝苗这段时期，三倍体死亡率明显高于二倍体；成贝的三倍体和二倍体死亡率没有显著差异。     

栉孔扇贝大规模死亡的原因探讨

于１９９８年７－９月,在发生贝类大规模死亡的山东工岛县和烟台四十里湾养殖区,选取濒死的栉孔扇贝,通过组织病理分析和电镜观察,发现大量寄生原核生物－－衣原体样原核生物和类立克次氏体。病理学研究表明,寄生原核生物造成栉孔扇贝组织细胞严重病变,可能是引起栉孔扇贝大规模死亡的重要原因。     

海南临高海岸带典型生态环境问题与对策研究

为改善临高县海岸带生态环境、提升海岸带生态价值及保障海岸带生态安全,文章在实地考察、文献查阅和资料梳理的基础上,概述了当前临高县海岸带面临的典型生态环境问题,分析生态环境退化的主要原因,提出了海岸带保护修复的对策建议。研究结果表明：临高海岸带地区砂质海岸、红树林、珊瑚礁和白蝶贝等面临较严重的海岸侵蚀、生态环境退化和生物资源枯竭等问题;砂质海岸侵蚀主要受海平面上升、风暴潮等自然因素影响,红树林生态系统主要受围海养殖、环境污染影响,珊瑚礁、白蝶贝等海洋生态系统则主要受渔业捕捞、水体污染等人为活动影响;基于海岸生态退化现状及原因分析,提出文澜河口、抱吴港等岸段开展沙滩喂养及生态堤建设,新盈湾、黄龙湾、金牌湾等重点区实施红树林修复,珊瑚礁、白蝶贝保育区加强自然封育、严防人工干扰等建议措施。     

三倍体合浦珠母贝不育性研究

对三倍体合浦珠母贝Ｐｉｎｃｔａｄａｍａｒｔｅｎｓｉｉ（Ｄ．）春、秋两繁殖盛期的生殖腺进行了组织学观察，并对其配子形成及受精、发育进行了研究。结果表明：合浦珠母贝三倍体的生殖腺发育差，生殖细胞数量少，极少个体能见到成熟卵母细胞和精子；三倍体的配子能完成受精作用，能发育至直线铰合期。配子多为非整倍体，其染色体数目多为１４—２８，胚胎染色体数目主要为２８—４２，故胚胎不能正常发育。因此，三倍体合浦珠母贝是不育的．     

海南岛大珠母贝遗传多样性分析

利用RAPD技术首次对中国海南岛环岛的大珠母贝（Pinctada maxima Jameson）遗传多性进行分析。从20条10bp引物中选取7条引物用于群体遗传多样性分析，共检测出22个位点，其中11个位点（占50％）显多态性，Shannon多样性值为0．117。用非加权配对算数平均法（UPGMA）聚类分析的结果：12个体间遗传相似系数最大为1．000，最小为0．706，平均遗传相似系数为0．8438。表明海南岛大珠母贝群体间遗传多样性不一，遗传分化较大，因此很有必要对遗传多样性水平较高的种群，划定保护范围加以重点保护，以扩大和恢复大珠母贝的种质资源。     

几种生态因子对尖刀蛏幼贝存活率和生长率的影响

2008～2009年,在浙江省海洋水产养殖研究所永兴基地研究了底质、饵料、温度和盐度对平均壳长为32.28±3.98mm的尖刀蛏（Cultelles scalprum）幼贝存活率和生长率的影响.结果表明：尖刀蛏幼贝以软泥底质最佳,实验条件下存活率达到76.7%,其次为沙底质,存活率为71.7%,最差为硬泥底质,存活率仅为60.0%;几种易于大规模培养的微藻中,最适宜的饵料为牟氏角毛藻,实验条件下存活率达到90.0%,生长率达到25.9%,其次为球等鞭金藻和亚心形扁藻;尖刀蛏幼贝存活的适宜温度为10～30℃,最适生长温度为26～30℃;存活的适宜盐度为18～26,最适生长盐度为22.尖刀蛏与其他大多数沿岸贝类一样属于广温广盐性品种,其幼贝更适宜于在盐度较低的环境中生存.     

真鲷(Pagrosomus major)肠上皮组织中类立克 次体的超微形态与细胞病理学的初步研究

运用电镜技术对青岛地区患病真鲷进行了病原体检测,在肠上 皮组织细胞中发现一种类立克次体病原体。研究表明,该病原体具有完整的细胞包膜, 内部 具有低电子密度拟核,在胞浆中以两种类型存在-繁殖型和静止型;繁殖型类立克次体呈圆 形、椭圆、哑铃、长棒状,其长轴为0.2～0.8μm,形成包涵体,以分裂方式进行增殖;静止 型类立克次体为圆形,中等电子密度,直径为40～70nm,由繁殖型类立克次体出芽增殖形成 ;线粒体参与了包涵体的形成和类立克次体的增殖过程。细胞病理变化为上皮细胞肿胀并部 分解体,微绒毛破坏,线粒体变形,部分内嵴溶解;内质网膨胀,核糖体脱落。类立克次体 是导致鱼类病害的重要病原体。     

巴拿马珠母贝两个群体的生化遗传变异比较

用淀粉凝胶电泳检测和比较了加利福尼亚湾拉巴斯和马萨特兰两海区巴拿马珠母贝Pinctada mazatlanica的28个基因座位的生化遗传变异。结果发现,两群体的平均杂合度分别为0.153和0.124,与已报道的珠母贝属的其他种很接近。说明这种珠母贝的遗传变异相当丰富,未受40多年前过度采捕所引起的群体数量大幅度起伏的影响。两群体的遗传距D=0.012,预示两地间有相当强的基因流。