鲑鱼生长激素基因表达产物的促生长效应

生长激素用于促进鱼类生长的研究已有几十年历史。国内外一些研究者先后用哺乳类动物和鱼类本身的生长激素，通过体内注射、投喂和注射等方式导入实验鱼体内，均获得不同程度的促进鱼类生长的效果［１，３，５，６，９］。８０年代中期，随着基因工程的发展，国外许多实验室从哺乳动物和多种鱼类中分离出生长激素基因，构建了可在工程菌中表达的重组质粒，实现了这些基因在工程菌中的高效表达和表达产物的有效分离。随后利用工程菌中表达的生长激素所进行的鱼类养殖实验表明，它们具有与天然生长激素相同的促生长效应［２，４，８］。与天然…     

转鲑鱼生长激素基因酵母菌发酵特性的研究

张培军、Ball等研究表明,外源性生长激素通过注射或浸泡的方法可加快鱼的生长[1]。根据Mclean1987年、Shunsuke等1993年研究发现鱼类后肠具有吸收部分生长激素进入血液循环的特点,本研究室将鲑鱼生长激素基因克隆进无毒无害的酵母菌中,利用可控制的诱导条件,培养出含鲑鱼生长激素的酵母菌,直接掺入饵料,使生长激素通过消化道吸收,以促进鱼的生长。Jacqueline等1989年指出,由于携带外源基因的酵母菌与普通酵母菌的培养要求不同,既要促使菌体快速生长又要保证外源基因的表达,本研究的目的在于选择适宜的培养条件,实现转基因酵母菌的高密度培…     

牙鲆年龄和生长的研究

本文根据1980—1986年间连续逐月牙鲆生物学测定和耳石观察资料,确认其年轮形成期在3—5月,主要在4月。经标准von Bertalanffy生长方程拟合,鱼体体长(mm)年间生长规律为: ♀:L_t=800.10[1-e~(-0.2323(t-0.0254))] (?):L_t=690.62[1-e~(-0.2557(t+0.1211))]依体长与体重间相关关系计算渐近体重和最大生长速度,雌鱼分别为8370.43g和865g/a;雄鱼分别为4867.15g和554g/a。对低龄鱼(0—Ⅲ)生长特征模拟结果表明,雄鱼体长生长的季节变动幅度(C=1.07,k=0.5925)明显大于雌鱼;当年生雄鱼在7—9月的生长速度为年内最大。     

重组酵母菌对牙鲆生长及血清激素含量的影响

于１９９８年１０－１１月间在荣成市寻山养殖场实验了饲喂具有大麻哈鱼生长激素基因的酵母菌对牙鲆的生长及其血清激素的影响。实验分为对照组和三组实验组,其中对照组的铒料中不含重组酵菌,实验组的铒料中分别含有重组酵母菌０．２５‰、０．５０‰、０．７５‰（Ｗ／Ｗ）。实验表明,通过投喂重组酵母菌,可以增加牙 血清生长激素的含量,牙促进牙鲆的生长。重组酵母菌的含量不同,对牙鲆血清甲状腺素和三碘甲状腺原氨酸的影响     

重组鱼类生长激素对中国对虾成活率及促生长作用的研究

１１９９９９３３年年后后暴暴发发性性对对虾虾病病毒毒病病的的流流行行 ,,严严重重制制约约着着对对虾虾养养殖殖的的进进一一步步发发展展。。如如何何通通过过促促进进中中国国对对虾虾生生长长 ,,提提高高其其抗抗病病力力已已成成为为目目前前亟亟待待解解决决的的问问题题 ;;其其中中通通过过在在对对虾虾人人工工饵饵料料中中加加入入一一些些生生长长因因子子 ( (如如生生长长激激素素等等 ))或或满满足足对对虾虾的的各各种种营营养养需需求求 ,,提提高高中中国国对对虾虾的的生生长长速速度度与与抗抗病病力力是是解解决决这这…     

外源性生长激素对牙鲆肌肉化学成分的影响

牙鲆经外源性生长激素自理后,对对照组相比,实验组鱼肌肉含水量没有明显性差异,粗蛋白含量提高１２．８％,粗脂肪含量提高１３．２９％,同时还发现肌肉蛋白质氨基酸组成比例没有明显差异,ＲＮＡ含量提高４５．１０％,ＲＮＡ／ＤＮＡ值升高３７．６３％。     

牙鲆Myogenin蛋白在大肠杆菌中重组表达的研究

采用大肠杆菌表达系统及pProEXTMHTc表达载体对牙鲆肌肉发生调节因子myogenin基因进行了体外重组表达研究。通过对诱导时间、IPTG诱导浓度以及诱导温度的优化,确定了最佳诱导条件为:诱导温度31℃,IPTG终浓度0.6mmol/L,诱导时间2 h。在该条件下,重组蛋白表达量最高且是可溶性的。Myogenin融合蛋白的成功表达为进一步深入研究其在牙鲆肌肉发育过程中的分子机制奠定了基础。     

牙鲆同质雌核发育二倍体的诱导及其早期生长研究

人工诱导雌核发育是水产动物性别控制的重要技术手段之一,同时也是快速建立近交系或纯系、建立遗传作图群体的方法之一。采用静水压力抑制受精卵第一次卵裂的方法诱导了牙鲆同质雌核发育二倍体。不同的处理起始时刻、不同压力及压力持续的时间对受精卵的发育及染色体加倍率有较大影响。处理组受精卵发育相对缓慢,畸形率较高,正常仔鱼孵化率较低。如果处理前受精卵保持在(15.5±0.5)℃,压力处理受精卵的最佳条件是:从受精后75 min开始、用55 MPa的压力处理6 min,该条件下处理组正常仔鱼孵化率较高,为13.7%,染色体观察和最大核仁数计数结果表明,此时的二倍体诱导率也最高。染色体观察结果还显示在不同处理组中存在不同比例的非整倍体。利用获得的最佳诱导条件处理获得了数千尾雌核发育幼鱼,观察表明,雌核发二倍体鱼的生长速度明显低于普通二倍体,且个体间差异较大。该研究为进一步开展牙鲆全雌育种和连锁图谱的构建提供技术支撑。     

重组酵母菌对牙鲆非特异性免疫能力的影响

于１９９９年１０－１１月间在荣成市寻山养殖场实验了饲喂含有大麻哈鱼生长激素基因的重组酵母对１龄牙鲆非特异性免疫能力的影响。实验分为对照组和３个实验组,对照组的饵料中不含重酵母菌,实验组我饵料中分别含有重组酵母菌０．２５‰、０．５０‰、０．７５‰（Ｗ／Ｗ）。实验表明,通过投喂重组酵母菌,可以增加牙鲆血清蛋白的含量,增强牙鲆血清中深菌酶及抗蛋白酶物质的活性,这种影响与重组酵母菌的含量成正相关。     

鳗弧菌感染牙鲆的组织学和免疫组织化学观察

利用免疫组织化学ＡＢＣ法及组织学ＨＥ染色技术对鳗弧菌人工感染后的牙鲆肝组织及胃肠道进行了组织病理学及细菌的定位研究。结果显示,感染后肝细胞肿胀,空泡化现象严重,肝窦扩张,肝组织内可见阳性反应的细菌呈堆状存在;胃黏膜褶变矮。胃壁变薄,黏膜层内可见阳性反应的细菌;肠绒毛细胞出现破损,肠腔内有大量细胞碎片,肠腔内也可见阳性反应的细菌。提示：鳗弧菌可直接侵入组织细胞破坏组织结构,进而使鱼体出现死亡。     

牙鲆外周血细胞的超显微结构观察研究

鱼类的外周血细胞是其免疫系统的重要组成部分，对于血细胞形态与结构的观察，有助于更好地理解鱼类免疫机理。作者在实验中发现，不同鱼类血细胞的种类及其结构并不完全相同，因此，有必要进行大量的实验以确定鱼类外周血细胞的组成是否可以反映其种间差异。 牙鲆是中国重要的海水经济鱼类，目前有关其血细胞的形态学的研究尚未见报道。本文以牙鲆外周血细胞为材料研究其超显微结构，以便能准确地了解牙鲆血细胞的分类及不同血细胞的形态结构。     

盐度变化对黑鲷生长激素及其受体的影响

将海水鱼类黑鲷Sparusmacrocephalus从盐度为26.6的海水直接转入淡水,考察渗透压的急剧降低对黑鲷的生长激素(growthhormone,GH)及其受体(growthhormonereceptor,GHR)等生理指标的影响。研究发现:(1)黑鲷从海水直接转入淡水后48h有33%的鱼死亡,对照组无死亡现象;(2)黑鲷在转入淡水48h内其血清生长激素(GH)含量、肝脏及鳃中GHR及GHRmRNA含量与对照组均无显著差异;(3)黑鲷在转入淡水48h后其肾脏中GHR含量较对照组显著升高(p<0.05),肾脏中GHRmRNA含量在24h及48h显著高于对照组(p<0.05)。结果表明,从GH含量看,黑鲷从海水环境到淡水低渗环境与鲑鳟鱼类从淡水到海水环境的适应性调节机制有差异,而黑鲷肾脏中GHR的含量变化可能参与黑鲷对外界环境渗透压的这种急剧降低的适应性调节。     

鱼类生长激素的分子生物学和应用研究的进展

依据１９８５－１９９５年国际有关资料对鱼类生长激素的分子生物学及其研究的最新成果与进展进行综合评述。研究表明，已完成鳗鲡等９种鱼类生长激素的氨基酸组成与全序列分析及大麻哈鱼等２０种鱼类的生长激素基因的分离与克隆，有些已在工程菌或动物细胞中的高效表达；鱼类生长激素基因的调控机制与生长激素的活性部位研究正在深入进行；将外源的生长上入鱼体或将外源的生长激素基因导入受体鱼，以期促进生长，增加抗性，是生长激     

三种鳜鱼(Siniperca)生长激素基因的克隆及序列比较

采用长片段PCR及T-A克隆技术,从基因组DNA成功克隆翘嘴鳜、大眼鳜和斑鳜含完整阅读框的生长激素（Growth Hormone,GH）基因DNA全序列,翘嘴鳜序列全长5548bp,大眼鳜序列全长5483bp,斑鳜序列全长5789bp,提交GenBank数据库后获得注册号分别为EF205280、EF205281、EF441623。三种鳜鱼GH基因均由六个外显子、五个内含子组成;均在第二内含子中相同位置发现“AG”微卫星重复序列;均在第三内含子末端发现一处剪接位点序列的相邻重复。三种GH基因在第一、二、三内含子处存在碱基长度差异。序列间差异主要表现为邻近序列的重复、DNA片段的缺失或插入及单核苷酸多态性（SNP）。翘嘴鳜与大眼鳜GH基因编码氨基酸序列完全相同,两者与斑鳜序列在第150位有一个氨基酸残基差异。采用MEGA软件对三种鳜鱼GH基因DNA序列及编码氨基酸序列分别构建UPGMA系统发育树,结果表明,在系统发育中,斑鳜可能最先从共有祖先物种中分化出来。     

鳜(Siniperca chuatsi)生长激素基因克隆和原核表达

采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从鳜脑垂体总RNA中扩增生长激素(GH)成熟肽基因,将成熟生长激素的cDNA定向克隆到表达载体pET-32a(+),并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。结果表明,鳜生长激素(GH)基因含开放阅读框(ORF)615个核苷酸,编码204个氨基酸,蛋白分子量为23kDa,等电点为7.07,其中酸性氨基酸占10.78%,碱性氨基酸占12.74%,疏水氨基酸为占44.12%,极性氨基酸占32.35%。在IPTG终浓度1.0mmol/L、温度37℃和培养时间4h的最佳诱导表达条件下,鳜生长激素基因(GH)在大肠杆菌中获得高效表达,重组菌体裂解物经SDS-PAGE可检测到分子量约为43kDa的鳜生长激素与硫氧还蛋白(Thioredoxni,Trx)融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白58%。Western印迹分析也证实含6×His标签的重组融合蛋白能够很好地与抗6×His单抗发生反应。本研究为下一步鳜生长激素基因(GH)的生物学功能及应用奠定了基础。