深海适冷菌SM9913产生的低温蛋白酶

从1855m深的深海泥样中分离纯化得到200多株分泌蛋白酶的适冷菌，其中3株产低温蛋白酶，本文对其中一株Pseudomonas sp.SM9913(P.SM9913)生长的适冷性和它产生的蛋白酶的适低温特性进行了研究。该菌株能够在0℃正常生长，其最适生长温度为15℃，最高生长温度为35℃。为一株适冷菌。该菌株所产蛋白酶的比合成速率在10℃时最高，催化酪蛋白水解的最适温度为35℃，在0℃仍具有3％的酶活力。最适pH为8．0。该蛋白酶的热稳定性很低，在40℃保温10min即丧失85％的活力，40℃时的半衰期为6min，为一典型的低温酶。抑制剂试验表明，该蛋白酶为金属蛋白酶。     

渤海湾浅表海水中产低温蛋白酶适冷菌的筛选

从渤海湾浅表海水中分离到１５０株产蛋白酶的低温菌。对其中５析产蛋白酶活力较高的菌株的生长特征和其所产蛋白酶学性质进行了研究。这５株菌的最知生长温度都在２０～２５℃,最高生长温度都在３５～４０℃,属于典型的适冷菌。这５株菌中,ＳＤＭ９９０８的产酶活力最高,为３２０Ｕ／ｍｌ。这５ 菌所产蛋白酶的最适酶活温度均为３５～４０℃。最适ｐＨ在７．０～９．０范围内,为中性或碱性蛋白酶。这些蛋白酶的热稳定性普遍较     

深海细菌Pseudomonas sp. IOFA1中甲醛歧化酶FM11的纯化及性质研究

从印度洋深海沉积物中分离出一株能够高效降解甲醛的假单胞菌(Pseudomonas sp.IOFA1),该菌株可在40 min内完全降解100 mg/cm~3的甲醛.通过阴离子交换柱层析对菌株破碎液中的粗酶液进行纯化,得到一条具有甲醛降解活性的单一蛋白条带.经MALDI-TOF/TOF质谱鉴定,该蛋白为甲醛歧化酶蛋白(FM11).序列分析表明FM11与其它物种已知醛脱氢酶的氨基酸序列最高相似性为65%;结构域分析表明FM11含有2个保守的锌结合位点和一个NAD结合位点.酶学性质分析结果显示,FM11的最适反应温度为40℃,在25~50℃范围内能够保留95%以上的酶活力,尤其是在高于70℃的高温环境下仍保有约50%的活力,表现出广泛的温度适应性.FM11具有非常广泛的最适反应pH值范围(pH值为5~9),且在pH值4和pH值10时仍分别保留50%和80%左右的酶活力,表现出广泛的pH适应性.在pH值为5~7的条件下孵育1 h后,FM11仍保有97%以上的酶活,且在pH值为7~10条件下孵育1 h后,仍保留90%以上的酶活,表现出极好的酸性和碱性稳定性.Ca~(2+)、Mg~(2+)在低浓度时(0.5 mmol/dm~3)对FM11有较明显的激活作用.这些研究为我们进一步开发Pseudomonas sp.IOFA1甲醛歧化酶在降解甲醛方面的用途奠定了基础.     

利用毛细管电泳检测适冷蛋白酶自溶的动态过程

蛋白酶由于具有催化蛋白质水解的能力,因此在蛋白酶溶液中 ,蛋白酶分子可以相互催化,造成蛋白酶降解 ,酶活降低,这种现象称为蛋白酶自溶（ａｕｔｏｌｙｓｉｓ）。许多蛋白酶都具有自溶的特点。蛋白酶的自溶对蛋白酶的研究和保存带来很多困难。因此,弄清蛋白酶自溶的特点和机制非常重要 ,这是探讨防止蛋白酶降解方法的基础。Ｋｕｍｕｒａ等［４］对荧光假单胞菌产生的蛋白酶的自溶现象进行了研究,他们发现该蛋白酶在５０℃下 ,保温２ｍｉｎ就丧失９０%的活性。利用ＨＰＬＣ分离自溶片段进行Ｎ端测序表明 ,该酶的自溶酶切位点是不确定的 ,但靠…     

适冷酶分子适冷机制的研究热点

适冷酶是由低温微生物产生的,在低温环境下具有较高的酶活性.综述了适冷酶分子适冷机制的研究热点,主要包括适冷酶分子适冷机制的研究方法、重组适冷酶、适冷酶的低温催化活性、稳定性和分子结构.     

南极适冷菌Pseudoaltermonas sp.S-15-13胞外多糖低温保护作用的研究

研究了南极适冷菌Pseudoaltermonas sp.S-15-13胞外多糖(Exopolysaccharides,EPSs)对重复冻融的菌体的保护作用。结果表明,重复冻融循环后,有胞外多糖包被的菌体仍能保持较好的生长能力,无胞外多糖包被的菌体生长缓慢,甚至死亡;不同浓度的胞外多糖均可降低水溶液的冰点,其效果较浓度相同的葡聚糖明显。说明南极适冷菌S-15-13对反复冻融的耐受能力与菌体分泌的胞外多糖直接相关,除了形成机械隔离屏障,胞外多糖还可能通过降低冰点等途径使菌体免受伤害。     

假单胞菌(Pseudomonas sp.cn4902)磷酸甘油磷酸酯酶基因克隆与鉴定

采用随机克隆、功能筛选、逐次排除和同源比较的基因克隆新策略进行克隆假单胞菌(Pseudomonas sp．cn4902)磷酸甘油磷酸酯酶基因的研究。结果表明，该结构基因长819bp，与铜绿假单胞菌的磷酸甘油磷酸酯酶基因的核苷酸一致性达61．5％，氨基酸同源性为56．2％。该基因已输入GenBank数据库，收录号AF348165。将该基因转化大肠杆菌，受体菌在含NaCl 1．0mol／L的培养基中甘油含量升高2．9倍，最终菌浓度提高3．6倍。可见这是一个与生物耐盐性相关的主基因，以其转化、培育耐盐农作物的前景十分光明。     

Pseudomonas sp.在杀菌剂耐受条件下对X70管线钢的腐蚀行为研究

本研究选用一株野生型Pseudomonas sp.为试验菌株,选用X70管线钢作为代表性金属材料,通过细菌生长曲线测定、腐蚀失重测量、扫描电镜（SEM）观察等方法,初步研究在杀菌剂四羟甲基硫酸磷（THPS）耐受条件下Pseudomonas sp.对X70管线钢腐蚀行为的影响。结果表明,75 μL/L的THPS浓度在Pseudomonas sp.的耐受范围内,而且能够轻微促进X70试片表面的腐蚀;不添加THPS的含菌体系中Pseudomonas sp.能抑制X70试片表面的腐蚀;而在添加了75 μL/L THPS的含菌体系中,Pseudomonas sp.显著促进X70试片的腐蚀,并且试片表面附着的细菌数量相比于无杀菌剂的对照体系有所增加。因此,该研究表明在特定浓度范围内,与没有添加杀菌剂的含菌体系相比,杀菌剂THPS使Pseudomonas sp.从抑制腐蚀改变为促进腐蚀。     

深海羽毛降解菌Bacillus sp. JM7极端碱耐受角蛋白酶的酶活性质研究

Bacillus sp. JM7, a strain isolated from the deep-sea of the South China Sea, was found to efficiently degrade 79.4% native chicken feather within 30 h. Scanning electron microscopy analysis showed that JM7 strain could gradually degrade feather by modifying the microstructure of feather keratin. A total of 25 protease genes were predicted from the draft genome of JM7 strain, among which a predicted subtilisin-like serine protease(designated as Ker02562) was further characterized for its keratinolytic activity. The recombinant Ker02562 functioned at a wide range of temperatures from 30℃ to 60℃, with an optimum at 40–50℃. Ker02562 was highly active at various pHs ranging from 5.0 to 13.0, with a maximum activity observed at pH 7.0–9.0. Remarkably, recombinant Ker02562 was stable in extreme alkaline environments(pH 10–13), which was much better than most other reported keratinases. Collectively, these favorable properties could make Bacillus sp. JM7 and Ker02562 attractive to be applied in the detergent formulation and feather bioconversion.     

极地寡营养细菌(Alteromonas stellipolaris sp. nov.)色素的提取及其理化性质的研究

以分离自南极海洋的寡营养细菌所产的褐色素为试验材料,进行了该色素的提取和稳定性分析。结果表明,色素粗品至少含有3种以上不同的褐色素,该褐色素易溶于水和甲醇;最大吸收波长为214nm;在pH≥4.0、热、光照(自然光与紫外线)下都能表现出良好的稳定性;抗H2O2、HNO3氧化能力强,NaClO对其破坏较大;Na2SO3、抗坏血酸对其有护色作用;Fe3+、Fe2+和Pb2+则有一定的破坏作用,Mg2+对该色素有护色作用,其它金属离子影响不大。试验表明,寡营养细菌褐色素在稳定性上呈现出一定优势,具有作为一种天然色素资源的开发和应用价值。     

海水养殖真鲷弧菌病病原菌外毒素的分离、纯化及生物学活性

1996年6月初，对福建省平潭县真鲷网箱养殖场发生的弧菌病进行研究，并确定该病病原菌为最小弧菌（Vibrio mimicus）。采用硫酸铵沉淀、DEAE－纤维素层析及Sephadex-G100层析等方法对最小弧菌产生的外毒素进行研究。结果表明，该外毒素为单一的多肽，分子量为30．456kD，对真鲷的LD50为4．48μg，对真鲷等养殖动物的溶血性最强，对Vero细胞的CD50值为0．48μg，肠毒性弱阳性。该外毒素与最小弧菌产生的其他毒力因子相比，性质独特，是一类新的毒力因子，建议命名为Vm-Pm毒素。     

海洋细菌B-9987 胞外代谢产物的纯化及抑菌机理初探

由渤海海泥中分离得到 30 0株菌株 ,从中筛选获得海洋生境芽孢杆菌B 9987菌株 ,其胞外物质经乙醚萃取、硅胶G薄层层析、官能团显色反应及紫外扫描 ,测其组分 ;以不同浓度B 9987菌株的抑菌液测定对植物病原真菌的抑制效果。结果表明 ,B 9987菌株的胞外抑菌物质可能是酚类化合物 ;该物质对植物病原真菌茄交镰孢菌、大丽轮枝菌、黄枝孢菌、立枯丝核菌的抑制作用 ,主要是造成真菌孢子或菌丝末端膨大成球状 ,继而胞壁崩解 ,原生质外泄。对尖刀镰孢菌和莴苣霜霉菌的抑制作用 ,则表现为孢子萌发率降低和菌丝长度明显变短。该抑菌物质可望开发为农用抗生素     

对硫磷对扁藻和杜氏藻膜脂的过氧化与脱酯化伤害

于１９９４－１９９５年,运用急性急性实验及生化方法对扁藻和杜氏藻的对硫磷毒性效应进行研究。结果表明,对硫磷对扁藻生长的抑制作用明显强于杜氏藻,在对硫磷的胁迫下,两种微藻细胞的超氧阴离子自由基相对含量上升,膜透性增大,微粒体膜脂过氧化水平提高。同时,扁藻微粒体膜的磷脂减少,游离脂肪酸含量增加。     

环境因子对南极菌Pseudoalteromonas sp.S-15-13多糖合成关键酶UGD基因表达的影响

以南极菌Pseudoalteromonas sp.S-15-13为材料,采用实时定量PCR的方法研究了温度、冻融循环及培养基中NaCl、葡萄糖含量和pH对多糖合成关键酶基因ugd表达水平的影响。结果表明,低温有利于ugd的表达,在2℃和10℃培养温度下,培养24h后ugd的表达量约为20℃时的4倍;冻融循环后,ugd的表达量上调,第2个冻融循环后ugd的表达量较对照提高了6.85倍;NaCl对ugd的影响表现为低促高抑,即NaCl含量为6.0%时ugd的表达量是对照(3.0%)的3.97倍,但含量达9.0%时ugd表达量仅为对照的2/5;葡萄糖能够提高ugd的表达量,当含量为2.0%时ugd表达量为对照的13.68倍;在一定范围内(pH5.0—8.0),pH的改变会促进ugd的表达,当pH为6.0时ugd表达量约为pH7.0时的2.15倍。     

江蓠主枝不同部位的生长观察

实验用切枝培养的方法,研究了主枝不同部位的生长,以顶枝生长最快,基部生长最慢。实验结果还表明,切下的枝段生长有极性。文章还对切枝培养方法进行了讨论。     

11种天然药物对弧菌的体外抑制效果的观察

于１９９１年３－４月应用纸片法定量测定了海洋及陆地来源的１１种天然药物提取物地中国对虾的主要致病菌－弧菌的体外抑制效果，结果表明，对弧菌高度敏感的药物有５种，中度敏感的药物有３种，不敏感药物有３种，并且５种高度敏感药物的抑菌效果均优于绝大多数抗菌素。为在对虾养殖中选择高效，低毒的天然抗菌药物提供科学依据。     

利用微阵列基因芯片研究东海海参(Acaudina leucoprocta)的生理功能

取喂食东海海参60d的ICR小鼠肝脏,制备微阵列基因表达芯片,并与模式小鼠芯片进行杂交,筛选功能基因和差异表达蛋白.从食用海参的鼠肝中共筛选出了4180个基因,其中差异表达基因184个,上调基因107个,下调基因77个.利用MAS.2.0系统对其功能进行分析,结果显示,分子功能上有催化活性的基因占39.86%,结合功能...