发光细菌法在环渤海污水样品遗传毒性检测中的应用

建立了以经过遗传改造的发光细菌Acinetobacter sp.Rec A为受试物种的环境污染物遗传毒性快速检测方法,该方法最快可在3h内得到毒性评价结果。采用该方法评价了环渤海排污口12份污水样品的遗传毒性。环渤海12个排污口的污水样品均表现出了不同水平的遗传毒性,并呈现出一定的分布特征。其中,高毒水质集中出现在山东半岛污水样品中,中毒水质集中出现在辽东半岛地区,而低毒水质主要集中于京津冀地区。综上,在环渤海的污水样品遗传毒性检测中,这种新型发光细菌法具有快速、灵敏、简便等优点,可为以后近海环境的水质生物毒性检测提供参考依据,具有应用于近海环境水质快速监测与评价的潜力。     

用PCR方法快速检测水产品中的副溶血弧菌

建立了水产品中副溶血弧菌快速,敏感,特异的PCR检测方法;选择的引物具有良好的副溶血弧菌的种特异性,对人工污染在冷冻水产品中副溶血弧菌的检测低限是12-21CFU/10g,对其增菌液的检测低限是7600-9100GFU/ml。每PCR反应体系的检测低限为91-109CFU,对400份自然污染样品的检测结果显示,PCR方法的检测结果同常规培养法的结果完全相符。     

氯霉素单克隆抗体的研制及其特性分析

为了研制氯霉素单克隆抗体,建立氯霉素的简便有效的检测方法.采用碳二亚胺(EDC)方法制备氯霉素免疫抗原和包被抗原,经SDS-PAGE凝胶电泳,三硝基苯磺酸(TNBS)法鉴定表明偶联成功.采用制备的抗原CAP-HS-BSA((CAP-HS,氯霉素琥珀酸酯;BSA,牛血清白蛋白)免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株抗氯霉素的杂交瘤细胞株,细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定.经体内诱生法产生腹水,ELISA检测纯化腹水的效价为1:10~6.抗体的亲和常数分别为:1.13×10~(10) L/mol,1.41×10~(10) L/mol.ELISA检测显示这2株单克隆抗体与氯霉素琥珀酸交叉反应率为300%,与其他抗生素及结构类似物的交叉反应小,表明该单抗可满足建立免疫学检测方法的需要和开发应用的要求.     

发光细菌法对北戴河湿地沉积物遗传毒性的评价

针对蓬莱19-3油田溢油事故造成的秦皇岛北戴河湿地植被退化,通过种植湿地植被碱蓬(Suaeda salsa)和海韭菜(Triglochin palustre)对受损湿地进行修复。为评价修复效果,分析了8个站位在修复前(2016-11)和修复后(2017-07)沉积物中多环芳烃、石油烃和重金属的含量变化,同时采用发光细菌法评价其遗传毒性。结果显示,沉积物中多环芳烃和石油烃的含量在修复后下降明显,降解率范围分别为82.57%～97.45%和60.99%～98.99%。此外,修复前多数样品表现出较强的遗传毒性,发光细菌法显示沉积物遗传毒性的丝裂霉素C(Mitomycin C,简称MMC)的等当量浓度范围为-2.042～2.018 mg/L,4个站位为高毒,中毒和低毒的站位各有2个;修复后,沉积物的遗传毒性明显降低,其MMC的等当量浓度范围为-0.574～0.015 mg/L,所有站位均为低毒。研究表明,湿地植被的修复显著提高了湿地的生态环境质量,且发光细菌法可作为快速评价湿地沉积物遗传毒性的检测方法。     

用一种方法同时检测水产品中的多种致病性弧菌

建立了水产品中12种致病性弧菌的同一检测方法。确定了增菌、分离培养基、培养温度等关键参数。新方法有较好的特异性,简便、快速,灵敏度＜0.4个／g;对200份水产品的检测结果显示,新方法的检测结果同常规培养法的结果完全相符。     

南海中、东部海区发光细菌的生态分布与种类组成

初步研究了南海中、东部海区海洋发光细菌的生态分布与种类组成.对28个测站的表层水样和部分测站的水柱垂直分层(50、100、150和200 m)水样进行了发光细菌培养、计数、分离和菌种鉴定.结果表明,水体中发光细菌检出率达76.92%,检出率自表层向底层逐渐升高;观测海区表层海水中发光细菌的平均菌量为(8.60±15.57)CFU/dm3,深层海水的菌量较高,至150 m水层平均菌量达最高值,为(49.47±75.40) CFU/dm3,细菌丰度变幅为3～307 CFU/dm3,平均菌量的最高值和较大的变幅范围都出现在150 m水层;在200 m以浅水体中,发光细菌垂直分布趋势基本与深度的增加以及水温的降低相关联,高值大多出现在100～150 m水层;观测海区发光细菌主要由哈维氏发光细菌Lucibacterium harveyi、曼达帕姆发光细菌Photobacterium madapamensis、明亮发光细菌Photobacterium phosphoreum和费氏发光细菌Vibrio fischeri组成,分别占鉴定种群的42%、33%、19%和6%.     

氯霉素的糖基化修饰及其抗菌活性研究

制备5种氯霉素糖基化衍生物,并对这些衍生物的抑菌活性和安全性进行初步测试。实验结果表明:1)氯霉素被糖基化后水溶性得到了明显提高;2)氯霉素糖基化衍生物时未产生抗菌活性,但经相关糖苷酶水解后,可重新表现出抗菌活性;3)小鼠急毒试验证明,氯霉素糖基化衍生物的毒副作用与原药相比显著降低。该项研究对于设计和合成类氯霉素前药开辟了新领域。     

快速检测海水中大肠菌群／大肠杆菌的膜图像法研究

针对常规滤膜法耗时的缺陷,提出了快速检测海水中大肠菌群/大肠杆菌的膜图像法。介绍了膜图像法原理及试验方法。重点讨论了图像法代替人工对滤膜上的显色菌落计数的过程。试验表明图像法不但能够缩短计数时间而且计数结果与人工方法一致。最后讨论了保证膜图像法计数准确度应注意的问题。     

水产品中多氯联苯残留量的气相色谱法测定

研究并建立了水产品中的7种多氯联苯残留的气相色谱检测方法,用该方法对鱼、虾、贝、蟹、甲鱼等多种水产动物中多氯联苯的残留量进行了分析测定。结果表明,7种多氯联苯的峰面积与其质量浓度在1.0～200ng／mL范围内呈线性关系,相关系数均大于0．999。鳕鱼和牡蛎样品中添加1.0ng／g的多氯联苯标准液时,多氯联苯的回收率为81．33％～85．33％;相对标准偏差为7．33％～9．21％。方法的测定低限为0．3ng／g。另外,通过优化前处理方法,使用硅胶净化柱,缩短了样品的前处理时间,减少了试剂消耗,提高了回收率。     

对虾体内氯霉素含量测定方法的研究

应用ＨＰＬＣ技术建立常用药物氯霉素的虾体动力学研究方法。该方法的特点是：与微生物法、比色法、气相色谱法、荧光法及免疫法比较．测试准确、快速且灵敏度高。应用该方法可以从虾体内的血液、肌肉、肝胰脏、肠胃中分离出被虾吸收的氯霉素，并定量测定。在１—５０μｇ／ｍｌ范围内线性关系相关系数为０．９９９５。     

水生动物对植物蛋白源利用的研究进展

综述了水生动物对植物蛋白源的利用.饲料中植物蛋白水平将显著影响鱼类的生长和生理生化状态.水生动物对植物蛋白源的利用与适口性、消化率和必需氨基酸平衡相关.同进实验动物的种类、食性和发育阶段均会对植物蛋白利用产生一定影响.水生动物饲料中植物蛋白源的适宜添加量主要受实验动物种类和饲料中蛋白质水平的影响.因此,通过添加限制性必需氨基酸和减少搞营养因子可以提高水生动物对植物蛋白源的利用.     

海洋围隔中异养细菌与环境中氮、磷关系的研究

利用海洋围隔生态系统实验装置,向海水中施加不同浓度的氮和磷,研究海洋异养细菌与海水环境中氮、磷的关系。结果表明,实验开始后海洋异养细菌的数量就迅速增加,并且一直维持在较高水平,第7~8天达到峰值。但在海洋异养细菌数量达到峰值后,海水中氮和磷的浓度有所回升,磷元素促进了海洋异养细菌的快速生长和繁殖,同时海洋异养细菌在一定程度上也利用了无机氮,海洋异养细菌的数量与海水环境中氮和磷的浓度具有较好的正相关性。     

柱前衍生-RP-HPLC方法测定水产品中生物胺

建立同时测定水产品中多种生物胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱方法。用5%TCA提取样品中生物胺,正己烷脱脂,正丁醇/氯仿(1/1,v/v)萃取,以1,7二胺庚烷为内标,丹磺酰氯为衍生剂衍生后,采用CAPCELL PAK C18MG(4.6 mm I.D.×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇/水为流动相,进行梯度洗脱,流速1.5 mL/min。荧光检测器的激发波长(Ex)350 nm,发射波长(Em)520 nm。结果显示:色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺等8种生物胺在30 min内完全分离。在给定的浓度范围内,待测生物胺峰面积与内标峰面积之比同其相应浓度呈良好的线性相关(r>0.99)。仪器重复性良好(RSD<1.34%),方法重复性也在可接收范围内(RSD<10%)。除色胺(57.7%)外,其它7种生物胺的样品平均回收率均在94.2%~110.3%之间。结果表明生物胺的HPLC检测方法,分离度好,灵敏度高,可快捷、准确地对水产品中生物胺进行定性和定量检测。     

虾池养殖环境有机污染物降解细菌的筛选

在实验室条件下通过富集培养共分离出 1 2 1株菌进行筛选。利用需氧性、BOD2 / COD0 、胞外酶等指标进行筛选 ,最后筛选到 7株对富营养有机物具有较高降解能力的细菌 ,它们均能产生酪蛋白酶、明胶酶、脂酶 (Tween- 80 )、淀粉酶其中 4株细菌还能产生卵磷脂酶。通过测定 BOD5及 COD来衡量 7株细菌利用对虾饵料的能力 ,5d内对虾饵料培养基的 CODMn去除率达到 59.6%～ 79.2 %。用常规生理生化方法将细菌鉴定到属 ,其中 1株为弧菌属细菌 (Vibrio spp.) ,6株为芽孢杆菌属细菌(Bacillusspp.)。     

Isolation and Identification of Lactic Acid Bacteria Isolated from a Traditional Jeotgal Product in Korea

Seventeen lactic acid bacterial strains (LAB) were isolated using MRS agar medium from Jeotgal, a Korean fermented food, purchased at the Jukdo market of Pohang. To identify the strains isolated, they were tested by examining their cell morphologies, gram-staining, catalase activity, arginine hydrolase activity, D-L lactate form and carbohydrate fermentation. According to the phenotypic characteristics, three strains were tent atively identified asLactobacillus spp., ten wereEnterococcus spp. (orStreptococcus spp., orPediococcus spp.) and the rest were Leuconostoc spp. (orWeissella spp.). Five strains among 17 were chosen by preliminary bacteriocin activity test. Four bacterial strains which inhibited both indicator microorganisms were identified by 16S rRNA sequencing. The results are as follows; Leuconostoc mesenteroides (HK 4),Leuconostoc mesenteroides (HK 5),Leuconostoc mesenteroides(HK 11),Streptococcus salivarius(HK 8). In order to check LAB which are showing a high survival rate in gut, we investigated three strains inhibiting both indicator microorganisms in artificial gastric acid and bile juice -all except HK8. The three strains mentioned above grew in extreme low acid conditions.     

褐藻酸降解菌感染海带过程中几种酶的作用比较

采用植物单细胞和原生质体游离的方法,研究了5株褐藻酸降解菌感染过程中海带细胞壁的组成成分——褐藻酸的变化。结果表明,海带在5株褐藻酸降解菌感染的初期(前3 d),褐藻酸酶对其单细胞和原生质体的游离率均显著降低,而且随着感染时间的延长,游离率的下降越加明显。3 d过后,随着感染的继续进行,单细胞和原生质体的游离率变化不再明显。表明海带细胞壁组成对褐藻酸降解菌感染发生了响应性变化,而这种变化仅仅发生在褐藻酸降解菌感染的早期阶段。研究结果进一步显示,褐藻酸降解菌感染过程中海带细胞壁组成的变化主要体现在褐藻酸的变化上。     

脱壳病和吻肿病东风螺体内致病菌及条件致病菌菌相研究

为探讨东风螺脱壳病和吻肿病与体内外致病菌及条件致病菌的相关性,测定了东风螺养殖水体环境中异养菌菌落总数,并对病螺及健康螺体内致病菌及条件致病菌进行了分离鉴定.经兔血培养基、TCBS培养基和弧菌显色培养基分离培养,用生化试验和细菌16S rDNA序列分析鉴定,结果显示:发生脱壳病的方斑东风螺螺池水体中的异养菌菌落总数为1.34×106 cfu/mL,病螺体内分离的致病菌及条件致病菌有副溶血弧菌、哈氏弧菌、河流弧菌、Vibrio hepatarius、腐败希瓦氏菌、海藻希瓦氏菌和芽孢杆菌,其中优势菌株为副溶血性弧菌溶血菌株和哈氏弧菌;脱壳病与吻肿病共患的泥螺螺池水体中异养菌的菌落总数为1.46×107 cfu/mL,病螺体内分离的致病菌及条件致病菌有副溶血弧菌、哈氏弧菌、鲍鱼希瓦氏菌、海藻希瓦氏菌和芽胞杆菌,优势菌株为海藻希瓦氏菌、鲍鱼希瓦氏菌和哈氏弧菌;健康东风螺螺池水体异养菌菌落总数为7.6×104 cfu/mL,健康东风螺螺体内的优势菌株为副溶血性弧菌非溶血菌株和Vibrio hepatarius.试验结果表明,东风螺脱壳病和吻肿病与养殖水体环境中异养菌的总数及螺体内部致病菌及条件致病菌分布具有一定相关性.     

亚临界流体萃取高效液相色谱法测定鱼肉中丙酸睾酮残留

采用亚临界1,1,1,2-四氟乙烷(R134a)萃取技术作为样品的前处理技术,建立亚临界流体萃取高效液相色谱法测定鱼肉中丙酸睾酮残留量的新方法。在对添加了丙酸睾酮的罗非鱼肌肉样品亚临界R134a萃取单因素实验的基础上,通过正交实验对萃取条件进行了优化,结果为:萃取压力14MPa,萃取温度23℃,R134a流量1.0L/min(标态),静态萃取30min,动态萃取40min,共溶剂甲醇添加量2mL,收集液为甲醇。收集液经石油醚纯化后,用高效液相色谱检测。在最优条件下,方法回收率大于90%、相对标准偏差(RSD)小于5%。最后,对实际样品进行实际检测,鱼肉冷冻干燥样品中丙酸睾酮的残留量为1.37μg/g。本方法首次利用亚临界R134a萃取作为兽药残留分析样品的前处理技术,萃取压力和萃取温度都比较低,易于大规模推广应用。     

Response of early Ruppia cirrhosa litter breakdown to nutrient addition in a coastal lagoon affected by agricultural runoff

The response of early Ruppia cirrhosa Petagna (Grande) litter decomposition to external nitrogen and phosphorus availability in La Tancada (Ebro River, NE Spain), a coastal lagoon that receives agricultural freshwater runoff from rice fields has been examined. Recently abscised dead R. cirrhosa stems were collected and 25 g of fresh weight was placed in litter bags with a mesh size of 100 μm and 1 mm. These bags were fertilised by adding nitrogen (N), a mixture of nitrogen plus phosphorus (N + P), or phosphorus (P), or were left untreated (CT). Macroinvertebrates were retrieved from the bags and the ash-free dry weight, and carbon, and N and P content of the remaining plant material were measured after 0, 3, 7, 14, 22 and 32 days. Litter decomposition rates, k (day⁻¹), were estimated using a simple exponential model. Litter decay was clearly accelerated by the addition of P in the fine (100 μm) litter bags (0.042), but when N was added alone (0.0099) the decomposition rate was lower than in the CT treatments (0.022). No significant difference was observed between the N (0.0099–0.018) and N + P (0.0091–0.015) treatments in either the fine or the coarse (1 mm) litter bags. These results could be attributed to the relatively high availability of external (environmental) and internal (detritus contents) N. No significant effect of macro invertebrates was observed in the CT treatment or under N or P or N + P addition. The ratio between the decomposition rates in coarse and fine litter bags (k_c/k_f) was lower in disturbed Tancada lagoon (0.82) than in Cesine lagoon (2.11), a similar Mediterranean coastal water body with almost pristine conditions. These results indicate that, in addition to data on macroinvertebrate community structure, decomposition rates could also be used to assess water quality in coastal lagoons.