贻贝超氧化物歧化酶的分离纯化和部分性质

采用热变性－硫酸铵分级沉淀－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和ＤＥ５２柱层析的方法从贻贝中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶,并对其部分性质进行分析鉴定。结果该酶的比活力为９４５３．３Ｕ／ｍｇ（ｐｒｏｔｅｉｎ）,提纯倍数为６０９．９,对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ敏感,Ｔ氏液和ＳＤＳ对酶活性没影响,对热较稳定。     

多管藻铜锌超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

作为超氧阴离子（０- ２）清除剂的超氧化物歧化酶（ＳｕｐｅｒｏｘｉｄｅＤｉｓｍｕｔａｓｅ ,简称ＳＯＤ）广泛存在于需氧生物体内。自从ＭｃＣｏｒｄ和Ｆｒｉｄｏｖｉｃｈ１９６９年发现ＳＯＤ后 ,国内外不少学者对ＳＯＤ的分离纯化、理化性质及其在生物学和临床等方面的作用进行了广泛的研究 ,其中以铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ·Ｚｎ ＳＯＤ）的研究最为深入。目前国内外已开发或正在开发的ＳＯＤ资源有牛血、猪血、猪肝、人血、刺梨等。但关于藻类中ＳＯＤ的提取尚未见报道。本文结合多管藻的综合利用 ,从多管藻（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎ…     

三丁基锡对牡蛎超氧化物歧化酶的影响

本文从牡蛎中提纯超氧化物歧化酶（SOD），分析了氯化三丁基锡（TBTC1）对体外牡蛎SOD部分性质的影响，结果表明：随着TBTC1含量的增加及作用时间的延长，SOD的活力逐渐降低。当TBTC1（Sn含量为600μg/cm^3）作用SOD 24h时酶活力保留50％，到36h时酶活力完全丧失；TBTC1能使牡蛎SOD的耐热、耐酸碱能力降低；PAGE显示，随着TBTC1含量的增加，SOD同工酶谱带逐渐消失；Cu^2 能使失活的SOD恢复部分酶活性。     

缢蛏YC-2 蛋白的提取及抗氧化作用研究

以新鲜缢蛏(Sinonovacula constricta)为材料,经水萃取、(NH4)2SO4盐析、DEAE离子交换层析、Sepharose CL-6B凝胶层析、冻干浓缩。结合SDS-PAGE电泳技术,硫代巴比妥酸(TBA)法初步鉴定各个组分的抗氧化活性,并用Bradford法进行蛋白的定量。结果表明,80%饱和度(NH4)2SO4盐析得到的组分经离子交换层析以及凝胶层析得到一个蛋白纯品YC-2,具有2个亚基,大亚基的分子质量为61.23 ku,小亚基的分子质量为45.39 ku,YC-2蛋白的分子质量为106.62 ku,而且其具有较高的抗氧化活性,在0.627 g/L时对.OH清除率达99.7%。     

油类及其分散剂对缢蛏幼虫的毒性效应^＊

本文研究了不同浓度的胜利油田原油和市售0~#柴油的水溶性组分,及英国BP公司生产的油类分散剂对缢蛏(Sinonovacula constrcta)D型面盘浮游幼虫生长的影响,求得了相应的毒性效应指标。     

缢蛏的染色体研究

于1994年8月在山东省威海和青岛市沿海采集缢蛏,运用PHA每克体重8×10-6g）和秋水仙素（每克体重2—3×10-6g）体内注射法,以其鳃组织为材料,对缢蛏的染色体进行分析研究。结果表明,缢蛏的二倍体数目为2n＝38,核型为26m＋8sm＋2st＋2t,NF＝72。C-带核型展示,有7对染色体恒定地出现C-带,均为端带。银染核型表明,有一对中着丝粒染色体具Ag－NOR带。银染带可以作为一种遗传标记。     

近江牡蛎铜锌超氧化物歧化酶的稳定性

在从近江牡蛎（Crassostrea rivularis)软体部分提纯得到纯度均一的铜锌超氧化物歧化酶（Cu,Zn-SOD)的基础上,对该酶的稳定性进行了研究,结果表明,该酶的水溶液在65℃时活力稳定,而该酶的干品在1℃／min程序升温时在58．4摄氏度有一尖锐的吸热峰,在pH为5．2－10．0的范围内该酶的活力不受影响。该酶对H2O2和KCN均敏感,且能耐受Tsuchihashi氏试剂的作用。一些氧化剂,还原剂,变性剂可改变酶的活力,差示扫描量热分析（Differential Scanning Calorimetry,DSC)发现,该酶在不同的升温速率下以及不同浓度的H2O2处理对酶的稳定性的影响与猪血,牛血SOD均有差异。     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex- 75 ,Sephadex- 10 0凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌 (Vibriop acini) X4 B- 7菌株产生的碱性蛋白酶 ,得到电泳纯酶制品 ,并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示 :纯酶的分子量为 2 7KD,等电点 p I=8.7,最适反应 p H9.0～ 10 .5 ,最适反应温度 5 0～ 6 0℃。ED-TA对酶活力没有影响 ,高酶浓度可以降低 SDS对酶的抑制作用 ,该酶可用于解聚组蛋白。 DNA琼脂糖凝胶电泳证明 :酶对 DNA酶有降解作用 ,而对 DNA没有降解作用 ,该酶有希望应用于核酸的提取     

口虾蛄超氧化物歧化酶同工酶的组织特异性研究

以口虾蛄为材料进行研究，用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对其肌肉、心脏、腹鳃、肝胰腺及眼球5种组织器官进行超氧化物歧化酶(SOD)同工酶的研究分析。结果表明：不同组织中超氧化物歧化酶(SOD)的同工酶谱带存在差异，具有明显的组织特异性。眼球、腹鳃、肝胰腺和心脏中有2条酶带，肌肉中几乎不表达，心脏中SOD2和肝胰腺中SODl谱带表达最浓，而腹鳃中的酶带表达最弱。     

缢蛏独睾科吸虫囊蚴病病原生物学及病理学

本文首次报道了缢蛏新的一种寄生虫病-厦门独睾科吸虫囊蚴病。组织学观察发现,该囊蚴不仅可对成熟缢蛏许多组织造成损害,对幼蛏期缢蛏也可造成的一定的病理危害。通过对该独睾科吸虫部分生活史的实验研究,发现该吸虫终末宿主为钟馗 虎鱼．缢蛏为其第二中间宿主。     

缢蛏消化道组织学与组织化学的研究

运用组织学和组织化学染色方法对缢蛏消化道的组织结构和功能进行了研究。结果表明 ,缢蛏的消化道由唇瓣、口、食道、胃、晶杆囊、肠、直肠和肛门组成。除唇瓣外的消化管壁由内向外可分为 4层 :粘膜层、粘膜下层、肌层和外膜。粘膜层包括粘膜上皮和粘膜肌层。口腔上皮为假复层纤毛柱状上皮 ,其它部位的粘膜上皮都为单层纤毛柱状上皮。胃壁的局部和肠壁缺乏肌层。除口的腹面、直肠、肛门等处的外膜为浆膜外 ,其余皆为纤维膜。肠上皮、直肠上皮和唇瓣上皮有较强的碱性磷酸酶活性 ,胃上皮和肠上皮有较强的酸性磷酸酶活性。直肠的粘膜及粘膜下层中含有丰富的钙和铁     

温度对缢蛏(Sinonovacula constricta)耗氧率和排氨率的影响

实验研究温度对不同个体大小缢蛏耗氧率和排氨率的影响。实验结果表明 ,在实验温度(15～ 30℃ )条件下 ,缢蛏的耗氧率 (O) [mg/ h·个 ]和排氨率 (N ) [μg/ h·个 ]与缢蛏软体部干重(W)呈明显的幂函数关系 ;温度的上升使得缢蛏的耗氧率 (OS) [mg/ g· h]、排氨率 (Na) [μg/ g· h]均增大 ;两者之间的比值 (原子数 O∶ N)在 2 0℃时最大 ,随着温度的继续升高其值逐步减小。耗氧率 (O)、排氨率 (N)与温度 (T)、缢蛏软体部干重 (W)二元线形回归方程分别是 :O=- 0 .370 3+0 .32 0 4 W+ 0 .0 2 98T,N =- 15 4 .0 6 77+ 6 9.74 88W+ 7.9332 T。复相关系数 r分别为 0 .9773和0 .92 2 8;F检验表明 ,两个回归方程均极显著。     

缢蛏滤除率与颗粒选择性的实验研究

利用4种不同大小的单细胞藻类作为饵料研究缢蛏（Sinonovacula constricta）的滤除率以及缢蛏对不同大小料颗粒的选择性。实验结果表明：3种规格缢蛏对4种单细胞藻类的滤除率表现出相同的变化规律，即随藻类规格的增大，缢蛏的滤除率亦逐渐变大，并且大规格缢蛏的滤除率变化最显著；在饵料颗粒选择性的实验中，小规格缢蛏对大规格（ESD＝8.83），藻类具有较高的选择性，中规格缢蛏对藻类的选择性不明显，而大规格缢蛏则对小规格（ESD＝4.46）藻类具较高的选择性。     

缢蛏肉的食品化学特性及其营养液的研制

研究了缢蛏(Sinonovacula constricta(Lamarck))内的食品化学特性。结果表明,缢蛏内的营养特点是蛋白质丰富,低脂肪,富含灰分和总糖;蛋白质的氨基酸组成中富含呈味氨基酸．并富含婴幼儿所需的组氨酸、亮氨酸和赖氨酸;蛋白质氨基酸价为82,其显著特点是只有一种限制氨基酸,且其它氨基酸效价较均衡,说明必需氨基酸的组成比较合理;缢蛏贝内中含有丰富矿物质元素,是人体所需的多种矿物质元素的良好来源。在此基础上研制了缢蛏营养液．缢蛏营养液含有缢蛏内的全部营养,易吸收,无明显腥味。     

缢蛏多巴胺受体基因及其在损伤修复中的作用

多巴胺受体(dopamine receptor)作为生物体中重要的神经递质受体, 在生物体的生长、发育、代谢等多个生理过程中都发挥着重要的功能。本研究从缢蛏Sinonovacula constricta转录组文库中筛选获得多巴胺受体基因的部分片段, 结合RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术和降落 PCR(polymerase chain reaction)技术, 克隆得到缢蛏两个多巴胺受体的选择性多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation, APA)的变异体, 命名为ScDopR2a和 ScDopR2b, 长度分别为1824bp和2758bp。两个变异体均包含相同的5′非翻译区(untranslated regions, UTR)(24bp)和开放阅读框(open reading frame, ORF)(1440bp), 共编码479个氨基酸残基。但是两个变异体的3′UTR 长度不同, 分别为360bp和1294bp, 其中ScDopR2b在polyA尾前插入936bp。在同源的ORF区设计引物, 采用实时定量PCR分析多巴胺受体基因在不同组织中的表达特征, 结果表明多巴胺受体基因在水管、鳃、斧足的表达量显著高于其他组织。在该基因序列3′UTR插入片段区域设计特异引物检测ScDopR2b的组织表达情况, 结果表明在水管、鳃、斧足的表达量仍高于其他组织, 表达趋势与ORF区大致相同。进一步设计缢蛏组织损伤实验, 对进水管前端进行损伤处理, 在处理后的第4h、8h、12h、24h、48h、60h和72h取样, 荧光定量检测结果显示, 同源区表达量在12h和48h呈上调, 在8h、24h和72h下调, 且ScDopR2b表达趋势与同源区表达模式大致相同。研究结果表明, 缢蛏多巴胺受体参与了损伤修复过程, 其表达特征可能与多巴胺作为补偿性神经递质的作用有关。     

宁波长街缢蛏遗传结构的RAPD分析

利用RAPE)技术对宁波长街自然群体和养殖群体缢蛏【Sinonovacula constricta(Lamarck)】的遗传背景进行了比较研究。21个引物共扩增出121条清晰可辨的RAPE)标记,大小在250--2500bp之间,分别统计上述位点,得到两群体各遗传参数。结果表明,养殖环境对其影响较小,两者问遗传距离仅为0．0497,近交系数(Fst)为0．0735,有效繁殖个体数(Ncm)为3．1514;两者平均遗传杂合度比较却发现养殖群体略大于野生群体。与其他的水产动物研究结果不同。作者推测上述结果与养殖缢蛏苗种来自天然采苗、无累代养殖和养殖区饵料较自然海区丰富等因素有关。     

应用蛋白质组学技术对寄生压力下缢蛏血淋巴的抗性研究

以闽、浙一带重要的海产养殖贝类缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)为研究对象，应用蛋白质组学方法探求其在受寄生压力下血淋巴内40KDa以下小分子蛋白质组的变化，寻找缢蛏血淋巴的抗性机制，明确血淋巴在机体防御体系中的作用。在寄生压力下，缢蛏血淋巴内有多种蛋白发生变化，包括生长调节蛋白，金属硫蛋白-B．唾液酸结合凝集素，凝血因子IXA轻链等，涉及多种与炎症反应，神经营养，基因表达调控．蛋白质合成等有关的功能。说明血淋巴在缢蛏的防御体系中具有关键性作用。