6-DMAP诱导太平洋牡蛎三倍体——4.四倍体现象的研究

１９９６～１９９７年,在进行６－二甲基氨基嘌呤（６－ＤＭＡＰ）诱导太平洋牡蛎产生三倍体的实验过程中,发现一定数量的四倍体。解剖法获取精卵,人工授精。染色体倍性鉴别采用染色体计数法。（１）三因素四水平Ｌ１６（４５）正交设计。试验平行重复２次。最高四倍体诱导率为４０．０±０．０％。太平洋牡蛎四倍体各诱导因素的最优水平组合：当精卵混合２０ｍｉｎ时,将受精卵浸泡在含６－ＤＭＡＰ４５０μｍｏｌＬ－１的海水中１０ｍｉｎ;决定四倍体产生的三因素的主次顺序：６－ＤＭＡＰ浓度→诱导时机→诱导持续时间。（２）三因素三水平Ｌ９（３４）正交设计。试验平行重复３次。最高四倍体诱导率为９．６±４．９％。诱导太平洋牡蛎四倍体各因素的最优水平组合：当５０％受精卵出现第一极体时,将受精卵浸泡在含６－ＤＭＡＰ４５０μｍｏｌＬ－１的海水中１５ｍｉｎ;决定四倍体产生的三因素的主次顺序：诱导时机→６－ＤＭＡＰ浓度→诱导持续时间。     

龙须菜和扁江篱多糖的组成及其抗肿瘤效果

于１９８５－１９８７年期间用冷水和热水对采集于青岛的龙须菜和扁江篱的琼胶型多糖进行提取。两海藻的热水提取多糖都通过ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０色谱桩用热水和不同浓度ＮａＣｌ深液前后进行洗脱分级。龙须菜和扁江篱多糖的主要级分分别为０．５ｍｏｌ／Ｌ和１．０ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗脱级分。对各级分做化学分析及ＩＲ和＾１３ＣＮＭＲ光谱分析。结果表明，龙须菜多糖由琼二糖、琼胶糖前体和６－ＯＣＨ３－琼二糖组成     

用RAPD技术检测龙须菜色素突变体基因组的变化

龙须菜野生型于１９９６年采自青岛太平角,经性别、相态确认后进行实验;突变株为野生型经诱变的配子体。用ＲＡＰＤ技术检测野生型龙须菜及３株色素突变体的基因组特性及差异。共选用１０个随机引物进行扩增,产生１６７条ＤＮＡ片段,检测到３８个多态位点,并显示ｇｒ１８４在０．６６、０７９、２．０ｋｂ处的特征带。结果表明,野生型株藻与突变株基因组有明显差异,在３个突变藻株中,有２株以突变体的基因组更相近。     

RAPD技术及其在藻类学研究中的应用

近年来 ,分子标记技术在海洋生物研究领域中的应用取得了很大的发展 ,尤其是以ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）技术为核心的ＲＡＰＤ（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）标记方法在藻类学研究中得到了较广泛的应用。ＲＡＰＤ技术是由美国杜邦公司的Ｄｒ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ等和美国加利福尼亚生物研究所的Ｗｅｌｓｈ等于１９９０年几乎同时报道的一种ＤＮＡ分子标记技术。该技术一经出现 ,便以其简便 ,快速 ,高效和灵敏等特点引起广大生命科学工作者的极大兴趣。目前 ,已在生命科学的…     

用6－甲氨基嘌呤诱导贻贝四倍体胚胎

在滤过海水中以４×１０（－４）ｍｏｌ·Ｌ（－１）６－甲氨基Ｃ嘌呤（６－ＤＭＡＰ）处理贻贝Ｍｙｔｉｌｕｓｅｄｕｌｉｓ受精卵或胚胎，受精激活后５０或１２０ｍｉｎ处理２０—３０ｍｉｎ，分别抑制第一或第二次有丝分裂，以诱导四倍体胚胎。顶荧光显微观察表明，６－ＤＭＡＰ有效地抑制了第一和第二次卵裂。它使细胞核染色质分散，抑制了原核的移动和染色体的分离，并防碍卵裂沟和极叶的形成，从而诱导出四倍体胚胎。对第一次卵裂的抑制产生８２．８％的四倍体胚胎；第二次卵裂抑制产生５８．６％的四倍体胚胎。由于６－ＤＭＡＰ如此有效，而且价格便宜以及对人体无害，与沿用的化学诱导剂细胞松弛素Ｃ．Ｂ．相比，它应该可以成为双壳类软体动物染色体操作研究的理想化学诱导剂之一。     

大黄鱼高质量基因组DNA的简便提取方法

目前常用的分子标记技术如ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ、微卫星等都是以ＤＮＡ为研究对象 ,而高质量ＤＮＡ的简便快速提取是至关重要的 ［１］。大黄鱼 (Ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａｃｒｏ ｃｅａ（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ）)曾是我国著名的四大海洋渔业对象之一 ,也是目前闽浙两省重要的经济养殖品种。近年来养殖大黄鱼普遍出现生长缓慢、抗病能力弱、性成熟提早、个体小等生物学性状退化的现象［２］。为了从ＤＮＡ水平上研究大黄鱼遗传多样性 ,为养殖大黄鱼种质的改良和养殖业的健康持续发展提供依据 ,我们首先要从大黄鱼组织中提取基因组ＤＮＡ。…     

硒对极大螺旋藻生长及含硒量的影响

用０．４ｍｇ／Ｌ硒培养极大螺旋藻时，３５℃与１６０μｍｏｌ／ｍ＾２．ｓ的光温条件有利于螺旋藻生长和对硒的累积，在此种光温条件下，４０ｍｇ／Ｌ硒以下均促进藻的生长，其中１２ｍｇ／Ｌ硒的效果最大；超过６０ｍｇ／Ｌ硒就有抑制作用；４００ｍｇ／Ｌ硒以下藻即死亡。     

马粪海胆卵母细胞线粒体DNA和RNAs的分离

于１９８２年１２月－１９８４年５月，以青岛汇泉湾习见的马粪海胆为材料，运用０．５ｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ或０．５ｍｏｌ／Ｌ ＬｉＣｌ诱导法得到其卵母细胞；差速离心技术提取其线粒体；ＳＤＳ萃取到线体核酸；再以羟基磷灰石柱层析分离邮线粒体核酸各组分。结果表明，从所得各种分离产物测不出任何蛋白质，所以，应用上述各种方法和技术，能够有效地分离出海胆卵母细胞线粒体中的ＤＮＡ，ｒＲＮＡ，ｔＲＮＡ和多核苷酸。     

营养盐对中肋骨条藻和新用菱形藻生长及氮磷组成的影响

于１９９５年５月１９９６年３月一次２实验,研究了培养介质中营养盐含量变化对中肋骨条藻和新月菱形藻生长速率和藻体氮、磷含量的影响。根据Ｍｏｎｏｄ方程,磷酸盐影响中肋骨条藻和新月菱形藻生长速率的半饱和常数分别为０．５４μｍｏｌ／Ｌ和０．０５μｍｏｌ／Ｌ;硝酸盐影响两种藻生长速率的半饱和常数分别为４．０μｍｏｌ／Ｌ和１４．６μｍｏｌ／Ｌ,相比之下新月菱形藻更容易受到氮不足的限制。将Ｍｏｎｏｄ方程扩展得到     

六种海产虾类基因组DNA多态性的RAPD标记研究

于１９９６年１０月在青岛胶州湾附近海域采集中国对虾,细巧仿对虾,周氏新对虾,鹰爪虾,脊尾白虾和脊腹褐虾等６种不同科或不同属的海产虾类,用ＲＡＰＤ技术对其基因组ＤＮＡ的多态性进行了研究。在事先优化的反应条件下,经２０个随机引物扩增,共得到２８２条多态性片段,片段长度在２３０￣２８００ｂｐ之间,根据扩增片段的共享度计算出相对遗传距离指数,然后用ＵＰＧＭＡ和ＮＪ程序进行聚类分析,结果所显示的６种虾的亲缘     

栉孔扇贝四倍体的研究Ⅰ:细胞松驰素B诱导

利用细胞松驰素Ｂ抑制栉孔扇贝Ｃｈｌａｍｙｓ（Ａｚｕｍａｐｅｃｔｅｎ）ｆａｒｒｅｒｉ受精卵的第一极体的放出和第一次有丝分裂获得四倍体。在２０℃条件下，卵子受精后１０ｍｉｎ，０．５μｇ／ｍｌ的ＣＢ持续处理１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ抑制第一极体排出，结果三倍体率和四倍体率分别为３８．３８％、３９．７５％和２８．４２％、３０．２４％；在２０℃条件下，卵子受精后１ｈ，０．５μｇ／ｍｌ的ＣＢ持续处理１０、１５、２０、２５ｍｉｎ抑制第一次有丝分裂，结果四倍体率分别为２１．３６％、２７．５７％、２８．４１％、２９．３５％。结合处理后幼虫的Ｄ形率，在抑制第一极体放出和第一次卵裂中，ＣＢ处理持续１０ｍｉｎ均为最好     

同时测定牙鲆肌肉中DNA和RNA的简便方法

组织细胞中ＤＮＡ的含量是基本恒定的,但ＲＮＡ含量则随细胞中蛋白质代谢水平的不同发生很大变异,进一步的研究证实,ＲＮＡ／ＤＮＡ比值与鱼类体重及体长增长速率相关,因而在研究鱼类的生长时,一般要考察其组织中ＲＮＡ含量及ＲＮＡ／ＤＮＡ比值的变化,作为反映其蛋白质代谢及生长速率的生化指标。本文建立了一种可同时测定样品中ＤＮＡ及ＲＮＡ的简便方法。１材料与方法１．１仪器小型离心机、消化炉、水浴锅、７２２－型光栅分光光度计等。１．２肌肉中ＤＮＡ和ＲＮＡ的抽提１．２．１精确称取０．１ｇ左右冰冻保存的肌肉样品,铰碎…     

栉孔扇贝胚胎超低温液氮保存

选用两种低温保护剂配方，Ａ：１０％甘油＋４％葡萄糖；Ｂ：１５％ＤＭＳＯ（二甲基亚铜）＋４％葡萄糖＋２％柠檬酸盐，利用微机控制生物降温仪，对栉孔扇贝胚胎进行液氮低温保存。似１℃／ｍｉｎ由室温降温至－２０℃，接着以２０℃／ｍｉｎ降温至－８０℃，然后样品直接入液氮保存（－１９６℃），１周后，经４５℃水浴解冻，栉孔扇贝胚胎（发育６ｄ）的存活率达６５．１％（Ａ配方）和５６．５％（Ｂ配方）；而采用６℃／ｍｉｎ     

江蓠属藻胆体的研究 Ⅱ.藻胆体的荧光光谱特性

报道以青岛野生型龙须菜（ｗｔ）、黄色突变体（ｙｅ１００）、４株绿色突变体（ｇｒ１８０、ｇｒ１８４、ｇｒ１８６、ｇｒ１８８）、委内瑞拉野生型龙须菜（ｌｖ）、南非野生型龙须菜（ｓａ）及真江蓠（ｇａ）为材料,用蔗糖密度梯度离心法得到完整的藻胆体。用５４０ｎｍ激发,野生型的荧光发射峰位于５７８ｎｍ和６７０ｎｍ,相对荧光强度ＦＡＰＢ／ＦＰＥ的比值为１．５０。几种材料的ＰＥ和ＡＰＢ荧光发射峰没有明显区别（不超过２ｎｍ）,但两峰荧光强度比值显著差异。结果显示ｌｖ的ＦＡＰＢ／ＦＰＥ比值最低,只有１．２０,ｇｒ１８６的比值最高,为５．６７,野生型中ｓａ也比较高,为４．７９。用６７０ｎｍ激发,野生型龙须菜的荧光社发光谱有５个峰,分别为４９９ｎｍ、５４０ｎｍ、５６８ｎｍ、６１４ｎｍ、６５０ｎｍ,与其吸收光谱一一对应。野生型和突变体、不同产地龙须菜及真江蓠的荧光发射峰的波长都与其吸收光谱相对应。     

中国对虾遗传多样性的RAPD分析──朝鲜半岛西海岸群体的DNA多态性

１９９７年４月自黄海越冬场采集中国对虾朝鲜半岛西海岸群体样品。采用ＲＡＰＤ对该群体共３３个个体的基因组ＤＮＡ多态性进行了检测。利用２０个随机寡核苷酸引物共检测１０５个位点,其中多态位点４１个,占３９％,单个引物获得的标记为１￣１０个,分子量为１８０－２２００ｂｐ,个体间的平均遗传距离为０．０９３,群体的平均杂合度为０．２１７６。表明该对虾群体的遗传多样性较低,低水平的遗传多样性一方面使中国对虾的生     

蜈蚣藻和管形藻的RAPD分析

于１９９７年９月在大连石庙海区分株采集蜈蚣藻、管形藻和舌状蜈蚣藻,采用ＲＡＰＤ技术在分子水平上对属于红藻门的两种藻类－蜈蚣藻和管形藻进行了分析,所试６０个引物中,有２１个经扩增得到了１２０个多态片段。应用ＰＨＹＮＩＰ软件,按照ＵＰＧＭＡ和ＮｅｉｇｈｂｏｒＪｏｉｎｉｎｇ（Ｎ－Ｊ）法分别构建降类图。分析结果表明,ＲＡＰＤ多态性提示蜈蚣藻和管形藻差异较大,应为两个不同的属。     

红虾(Palaemon gravier)脂肪酸分析

对红虾虾头和虾肉中的脂肪进行了提取和测定。脂肪甲酯化后,采用５０ｍ×０．３５ｍｍｉ．ｄ．ＰＥＧ－２０Ｍ玻璃毛细管柱,ＦＩＤ检测器,并结合ＧＣＬＭＳ进行了脂肪酸分析。结果表明,虾头中脂肪含量达１０．８×１０－２,其不饱和脂肪酸６８．８×１０－２,ＥＰＡ＋ＤＨＡ占２４．１×１０－２;虾肉中脂肪仅为３．９×１０－２,其不饱和脂肪酸６９．８×１０－２,ＥＰＡ＋ＤＨＡ为２７．３×１０－２。     

氮,磷,维生素和微量金属对赤潮生物海洋原甲藻的增殖效应

在室内培养实验中观测了赤潮生物海洋原甲藻ＰｒｏｒｏｃｅｎｔｒｕｍｍｉｃａｎｓＥｈｒｅｎｂ对ＮＯ、ＮＨ和甘氨酸的需求。结果表明，硝酸盐的浓度从４０到３００μｍｏｌ／ｄｍ３，氨盐浓度从５０到１５０μｍｏｌ／ｄｍ３，甘氨酸和谷氨酸混合液浓度从４０到８０μｍｏｌ／ｄｍ３皆能较好地维持海洋原甲藻的增殖。磷酸盐起着磷源作用。在ＥＤＴＡ浓度为８０μｍｏｌ／ｄｍ３的培养液中，Ｆｅ３＋的浓度从０，．５到１μｍｏｌ／ｄｍ３，Ｍｎ２＋从０到２０μｍｏｌ／ｄｍ３和Ｃｏ２＋从０．１到０．４μｍｏｌ／ｄｍ３能促使海洋原甲藻的增殖。维生素效应试验表明：维生素Ｂ１是生长促进因子，而维生素Ｂ１２和生物素在光和暗处皆未能促进海洋原甲藻的增殖。无机氮和磷的最小细胞额分别为０．７４×１０－１２ｍｏｌ／细胞和０．０４５×１０－１２ｍｏｌ／细胞，其中磷比氮更能限制海洋原甲藻的增殖。     

氢化物-原子荧光法测定海水痕量硒及其形态

采用氢化物原子荧光法（ＨＧＡＦＳ） 测定海水痕量硒,并利用ＫＢＨ４ 对Ｓｅ（ Ⅳ） 和Ｓｅ（ Ⅵ） 的还原能力不同,以６ｍｏｌ／ｄｍ３ＨＣｌ 将海水中Ｓｅ（ Ⅵ） 还原为Ｓｅ（ Ⅳ） 再经氢化反应而测定其形态浓度。以正交设计法对ＨＧＡＦＳ法测定硒的实验条件进行优化选择。在佳化条件下本方法测定溶解态硒的检出限为０ ．０７２μｇ／ｄｍ３ ,对１ ．００μｇ／ｄｍ３Ｓｅ 浓度的样品变异系数为±２．３ ％ 。标准曲线表明,在０～２５μｇ／ｄｍ３Ｓｅ 浓度范围内有理想的线性关系。该方法可直接测定海水中的溶解态总硒、Ｓｅ（ Ⅳ） 及Ｓｅ（ Ⅵ） ,回收率为９９ ±２ ％ 。     

对虾养殖生态系有机质含量及其不同测定方法的数值比较

对５个对虾养殖围隔生态系有机质含量及其不同测定方法所得结果进行了比较研究。结果表明：有机质总量波动在７．５６￣１９．７６ｍｇ．Ｌ＾－１（ＴＣＯ）或４．７６￣６．２５ｍｇ．Ｌ＾－１（ＣＯＤ）,平均为１３．０５±２．８５ｍｇ．Ｌ＾－１（ＴＯＣ）或５．５２±０．４０ｍｇ．Ｌ＾－１（ＣＯＤ）。总有机质中,溶解有机质所占比例为７６％（ＤＯＣ／ＴＯＣ）或８２％（ＤＣＯＤ／ＣＯＤ）;溶解有机质与颗粒有机质的比例