凡纳滨对虾和斑节对虾对WSSV敏感性的比较

用6.0×104拷贝、1.2×104拷贝和6.0×103拷贝3种剂量白斑综合症病毒(WSSV)对凡纳滨对虾和斑节对虾进行人工注射感染,比较了两种对虾对WSSV敏感性的差异。结果表明,凡纳滨对虾死亡时间随病毒剂量降低而延长,斑节对虾死亡时间没有明显差异;随病毒剂量的降低,凡纳滨对虾人工注射感染后病毒复制高峰时间显著延长,斑节对虾感染后病毒复制高峰时间相同,WSSV在凡纳滨对虾体内比在斑节对虾体内复制慢。对虾携带WSSV数量最低为3.3×107拷贝.g-1,最高为4.3×108拷贝.g-1。凡纳滨对虾比斑节对虾对WSSV的抵抗性更强。     

波吉卵囊藻对凡纳滨对虾生长、抗氧化及肠道菌群的影响

【目的】研究定向培养波吉卵囊藻（Oocystis borgei）的养殖水体对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）早期生长性能、抗氧化能力及肠道微生物的影响,为波吉卵囊藻在对虾健康养殖中的应用提供基础。【方法】以消毒海水中接种波吉卵囊藻为实验组,以未接种的为对照组进行凡纳滨对虾养殖。将凡纳滨对虾幼虾随机分配到实验组及对照组养殖桶中,养殖20 d后测定对虾生长性能指标,解剖取肝胰腺和鳃测定抗氧化指标,取肠道进行微生物多样性测定和分析。【结果】1）定培波吉卵囊藻对凡纳滨对虾增重率和特定生长率无显著影响（P> 0.05）,但显著提高了对虾的肝体比（P <0.05）;2）与对照组相比,实验组对虾肝胰腺和鳃中的超氧化物歧化酶（SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC）极显著提高（P <0.01）,鳃中的谷胱甘肽（GSH）和酸性磷酸酶（ACP）活性也有显著升高（P <0.05）;3）与对照组相比,实验组对虾肠道菌群的Shannon和Chao 1指数显著降低（P <0.05）,肠道中变形菌门丰度显著降低（P <0.05）,有益菌红杆菌科丰度增加,有害...     

凡纳滨对虾输入蛋白α1基因的克隆与表达分析

输入蛋白α(importinα)是核转运蛋白家族的重要成员,可通过帮助具有核定位信号(Nuclear location signal,NLS)蛋白入核而参与免疫过程。克隆并鉴定凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的importinα1基因,命名为Lv IMα1,基因全长c DNA为2 181 bp,包括1 575 bp的开放阅读框,编码525个氨基酸,5′非编码区长110 bp,3′非编码区长496 bp。Smart分析显示,Lv IMα1蛋白包含一个N端的输入蛋白β结合域和一个包含8个串联重复序列的NLS中央结合结构域。同源性分析发现,Lv IMα1与原鸡(Gallus gallus)IMα1的相似度最高,为73%;与水蚤(Daphnia magna)IMα1相似度最低,为61%。系统进化分析显示,Lv IMα1和多种无脊椎动物IMα1聚为一类。实时荧光定量PCR(QRT-PCR)分析表明,Lv IMα1在所测试组织中均有表达,在神经组织中表达量最高。白斑综合征病毒感染后,凡纳滨对虾血液中Lv IMα1基因的表达量呈先下降后上升趋势,除感染后4 h外,其余时间点的表达量均低于对照组(P0.05),12 h最低,为对照组的0.22倍,随后逐渐升高。副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)感染后,凡纳滨对虾血细胞中Lv IMα1基因表达量低于对照组,在感染后4、24、48、72 h尤为显著,24 h时最低,为对照组的0.38倍。Lv IMα1基因可能参与凡纳滨对虾抗病免疫应答途径。     

凡纳滨对虾促雄性腺的组织学初步观察

通过显微观察和组织学连续切片,对凡纳滨对虾的促雄性腺进行研究。结果表明:凡纳滨对虾的促雄性腺埋于精荚囊端壶腹外侧的肌肉中,呈不规则的块状,Harris苏木精染色呈嗜碱性。H?E染色显示,促雄性腺主要由两种形态的细胞构成,一种核质致密嗜碱性非常强,细胞核被染成深蓝色,核仁很难辨认,大多呈圆形或卵圆形(A型细胞);另一种细胞多为卵圆形,细胞核较大,核质疏松,被染成浅蓝色,核仁1～2个清晰可见(B型细胞)。此外,促雄性腺中A、B细胞的出现及其数量随精巢发育而发生变化,繁殖完成后细胞解体。     

植酸酶对凡纳滨对虾生长性能和体成分的影响

在凡纳滨对虾饲料中添加不同量微生物植酸酶(0,500,1000,2000 U/kg),观察虾的存活率、增重率、饲料系数及虾体和虾壳成分,研究饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾生长性能的影响。结果表明:饲养8周后,饲料中添加500~2000 U/kg植酸酶对凡纳滨对虾增重率、存活率和饲料利用无显著影响(P>0.05);植酸酶添加各组与对照组虾体的水分、粗蛋白、脂肪、灰分、总钙和总磷含量差异不显著;虾壳中粗灰分和钙含量在500和1000 U/kg组显著高于对照组和2000 U/kg组(P<0.05),虾壳磷含量在各饲料组间差异不显著。血清磷浓度在对照组和2000 U/kg组显著高于500 U/kg组(P<0.05),血清钙浓度在组间差异不显著,血清碱性磷酸酶活性以对照组最高,显著高于500和1000 U/kg组。结果说明,在特定试验条件下,饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾幼虾的虾壳和血清成分有显著影响(P<0.05),对幼虾生长性能影响不显著(P>0.05)。     

植酸酶对凡纳滨对虾生长性能和体成分的影响

在凡纳滨对虾饲料中添加不同量微生物植酸酶（0，500，1000，2000U／k），观察虾的存活率、增重率、饲料系数及虾体和虾壳成分，研究饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾生长性能的影响。结果表明：饲养8周后，饲料中添加500-2000U／kg植酸酶对凡纳滨对虾增重率、存活率和饲料利用元显著影响（P〉0．05）；植酸酶添加各组与对照组虾体的水分、粗蛋白、脂肪、灰分、总钙和总磷含量差异不显著；虾壳中粗灰分和钙含量在500和1000U／k组显著高于对照组和2000U／kg组（P〈0．05），虾壳磷含量在各饲料组间差异不显著。血清磷浓度在对照组和2000U／kg组显著高于500U／kg组（P〈0．05），血清钙浓度在组间差异不显著，血清碱性磷酸酶活性以对照组最高，显著高于500和1000U／kg组。结果说明，在特定试验条件下，饲料中添加植酸酶对凡纳滨对虾幼虾的虾壳和血清成分有显著影响（P〈0．05），对幼虾生长性能影响不显著（P〉0．05）。     

抗菌肽对凡纳滨对虾生长和机体免疫的影响

基础饲料(对照组)中添加10g/kg抗菌肽制剂喂养体重0.10±0.01g、体长2.17±0.11cm的凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)30d,进行10d的水浴攻毒(鳗弧菌10~8/mL),探讨饲料中添加抗菌肽对凡纳滨虾生长、成活率、免疫保护率,以及肌肉中溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活性、总抗氧化能力的影响。结果表明:饲料中添加抗菌肽可显著提高凡纳滨对虾相对增重率、成活率和对致病菌的免疫保护率(P<0.05),但对饲料系数无显著影响(P>0.05);未受外界微生物刺激时,饲料中添加抗菌肽对凡纳滨对虾总抗氧化能力有促进作用(P<0.05),受外界微生物刺激后,饲料中添加抗菌肽喂养凡纳滨对虾可提高对虾超氧化物歧化酶活性(P<0.05)和总抗氧化能力(P<0.01)。因此饲料中添加抗菌肽喂养凡纳滨对虾可提高其机体非特异性免疫。     

蜕壳素对凡纳滨对虾生长及表观消化率的影响

研究了外源性蜕皮激素对凡纳滨对虾生长和表观消化率的影响，实验时在基础饲料中分别添加0．1％、0．2％、0．4％的两种市售蜕壳素产品，制成6种外源性脱壳素配合饲料，不添加的基础饲料作为对照组，试验在260L玻璃钢循环水养殖系统中，每个剂量组设3个重复，8周生长试验结果表明：市售蜕壳素产品能有效地促进对虾生长，试验结束时，试验组虾体增重分别较对照组增加16．8％、7．52％、5．9％、11．4％、29．07％、16．53％，但是凡纳滨对虾对饲料粗蛋白的表观消化率没有明显地提高，凡纳滨对虾对脂肪的表观消化率较低。推算凡纳滨对虾饲料中最佳蜕皮酮添加量为60mg/kg。     

微酸性电解水结合复合保鲜剂对凡纳滨对虾冷藏期间蛋白特性影响

【目的】研究微酸性电解水(SAEW)结合迷迭香提取物(RE)-柠檬酸(CA)复合保鲜剂处理对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)冷藏期间蛋白特性变化影响,探讨此法用于虾类贮藏保鲜的效果。【方法】将样品分别经SAEW、质量分数4%RE+质量分数1%CA(RC)、SAEW结合RC(SAEW+RC)和无菌水(CK)处理10 min后,自然沥干15 min,装入PE保鲜袋于(4±1)℃冰箱中保藏,每2 d测定样品的pH值、总挥发性盐基氮(TVB-N)、总巯基含量、Ca²⁺-ATPase活性、化学键、肌原纤维小片化指数(MFI)与内源荧光强度(IFI)等指标,并结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行综合分析。【结果】复合处理能延缓凡纳滨对虾贮藏期间pH与TVB-N值的升高,抑制总巯基含量下降,CK、RC、SAEW与SAEW+RC组样品的Ca²⁺-ATPase活力分别由初始0.16、0.17、0.17与0.17μmol/(mg·min)降至0.12、0.13、0.12与0.14μmol/(mg·min),MFI值较初始值上升1.88、1.73、1.76和1.54倍,可见SAEW+RC对延缓Ca²⁺-ATPase活性下降与MFI值的上升有较好作用。同时,SAEW+RC处理还能减缓蛋白质分解、氧化和变性,保持蛋白质化学键与IFI值的相对稳定。【结论】微酸性电解水结合复合保鲜剂处理能较好抑制凡纳滨对虾冷藏期间的蛋白质氧化分解,延缓其品质劣变。     

低渗诱导凡纳滨对虾肝胰腺消减文库的构建及其表达序列标签分析

初始体重(0.27±0.01)g的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别于盐度2和30中饲养56 d,采用抑制性消减杂交技术构建低渗胁迫诱导的凡纳滨对虾肝胰脏差异表达基因消减cDNA文库。消减杂交效率分析显示,正反向消减文库差异表达的基因各富集大约25和25~10倍。从正反向两个文库中随机挑选200个阳性克隆进行测序(正向文库80个,反向文库120个),共获得179条序列长度大于100 bp的ESTs序列,经CAP3在线拼接程序得到73条Unigenes(19条contigs和54条singlets)。生物学信息分析表明,这些Unigenes所代表的相应基因的功能包括免疫相关蛋白、代谢相关蛋白、核蛋白、细胞凋亡和转移蛋白。这些基因信息表明,凡纳滨对虾在低盐胁迫诱导所导致的生理变化非常复杂,构建的差异表达cDNA文库可较好地反映低盐胁迫对凡纳滨对虾影响的基因信息。     

切除眼柄对凡纳滨对虾亲虾卵巢、肝胰腺、血清生化组成的影响

为探讨眼柄切除对凡纳滨对虾性成熟的促进机理,采用镊烫法切除雌性凡纳滨对虾单侧眼柄,并测量肝胰腺指数和性腺指数,测定卵巢、肝胰腺和血清中生化组分含量的变化。结果表明,切除眼柄7 d后,1)肝胰腺指数降低,性腺指数上升,差异均有统计学意义(P0.05);2)卵巢、肝胰腺中总蛋白含量增加,差异有统计学意义(P0.05),血清中总蛋白含量无明显改变(P0.05);3)卵巢和血清中胆固醇含量增加,肝胰腺中胆固醇含量降低,差异均有统计学意义(P0.05);4)血清中钙离子和无机磷含量增加,差异有统计学意义(P0.05)。切除眼柄后,卵巢和肝胰腺中卵黄蛋白原等营养物质大量合成,肝胰腺中的总蛋白、胆固醇等营养物质先转移至血淋巴,再转移至卵巢,从而促进性腺的成熟。     

酵母培养物替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能、血清生化指标、免疫力和抗病力的影响

【目的】探讨高蛋白酵母培养物替代鱼粉对凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)生长性能、血清生化指标、非特异性免疫力和抗病力的影响。【方法】在基础饲料中分别添加质量分数0、2.5%、5.0%和7.5%酵母培养物(记为Y0、Y2.5、Y5.0和Y7.5组),分别替代质量分数0、10%、20%和30%的鱼粉,配制4种等氮等脂饲料,饲喂凡纳滨对虾(初始体质量0.70±0.03 g)56 d后,测定对虾生长性能、血清生化及免疫酶指标;用哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)攻毒,测定对虾累计死亡率。【结果】Y2.5和Y5.0组凡纳滨对虾增重率和特定生长率与Y0组的差异无统计学意义(P> 0.05),Y5.0组凡纳滨对虾摄食率显著高于Y0和Y2.5组(P <0.05);Y5.0组凡纳滨对虾血清甘油三酯含量显著低于Y0组(P<0.05),Y7.5组凡纳滨对虾血清谷丙转氨酶含量显著高于Y0、Y2.5组(P <0.05),血清总胆固醇显著低于Y0、Y2.5组(P <0.05);酵母培养物替代饲料中20%和30%的鱼粉可显著提高对虾攻毒前肝胰腺超氧化物歧化酶、过氧化物酶活性(P <0.05),Y7.5组对虾肝胰腺丙二醛含量在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)攻毒后显著低于Y0组(P <0.05);攻毒7 d后,Y7.5组凡纳滨对虾累积死亡率显著低于Y0组(P<0.05)。【结论】酵母培养物替代鱼粉比例小于20%时,不会显著影响凡纳滨对虾生长性能;替代比例为30%时,生长受抑制。当替代量比例为30%时可显著提高凡纳滨对虾非特异性免疫力和抗病力。     

弓背青鳉3种雌激素受体基因的克隆及其表达分析

【目的】克隆弓背青鳉(Oryzias curvinotus)雌激素受体基因(Estrogen receptor, er),分析在组织、胚胎发育时期中表达特征和雌二醇暴露后表达响应,为探究er介导雌激素调控机制提供理论依据。【方法】通过弓背青鳉肝脏转录组数据筛选进行er序列扩增,实时定量PCR(RT-q PCR)检测不同组织、不同胚胎发育时期和雌二醇暴露后的er表达量。【结果】3种ocuerα/erβ1/erβ2的编码区序列分别为1 860 bp、1 689 bp和2 007 bp,编码氨基酸个数相应为619、562和688。定量结果显示,3种er主要在肝脏和性腺高表达。胚胎发育过程中,ocuerα在卵裂期至囊胚期表达量低,在囊胚期后表达量逐渐上升持续到孵化;2种ocuerβ亚型均在胚胎发育初期有较高表达,随后ocuerβ1在原肠胚后开始降低,ocuerβ2在囊胚期后开始降低,在器官发育后期表达量均逐渐上升直至孵化。弓背青鳉仔鱼雌二醇暴露结果显示,各浓度雌二醇暴露均能使ocuerα和弓背青鳉卵黄蛋白基因(Vitellogenin,vtg)表达量上升,ocuerβ1仅在20μg/L上调,ocuerβ2表达量下调。【结论】ocuer不同亚型在介导雌激素调控中起着重要作用。     

Effects of different enzymatic hydrolysis methods on the bioactivity of peptidoglycan in Litopenaeus vannamei

The effects of different hydrolysis methods on peptidoglycan(PG) were assessed in terms of their impact on the innate immunity and disease resistance of Pacific white shrimp,Litopenaeus vannamei.PG derived from Bifidobacterium thermophilum was prepared in the laboratory and processed with lysozyme and protease under varying conditions to produce several different PG preparations.A standard shrimp feed was mixed with 0.05% PG preparations to produce a number of experimental diets for shrimp.The composition,concentration,and molecular weight ranges of the soluble PG were analyzed.Serum phenoloxidase and acid phosphatase activity in the shrimp were determined on Days 6-31 of the experiment.The protective activity of the PG preparations was evaluated by exposing shrimp to white spot syndrome virus(WSSV).Data on the composition of the PG preparations indicated that preparations hydrolyzed with lysozyme for 72 h had more low-molecular-weight PG than those treated for 24 h,and hydrolysis by protease enhanced efficiency of hydrolysis compared to lysozyme.SDS-PAGE showed changes in the molecular weight of the soluble PG produced by the different hydrolysis methods.Measurements of serum phenoloxidase and acid phosphatase activity levels in the shrimp indicated that the PG preparations processed with enzymes were superior to the preparation which had not undergone hydrolysis in enhancing the activity of the two serum enzymes.In addition,the preparation containing more low-molecular-weight PG enhanced the resistance of the shrimp to WSSV,whereas no increased resistance was observed for preparations containing less low-molecular-weight PG.These findings suggest that the immunity-enhancing activity of PG is related to its molecular weight and that increasing the quantity of low-molecular-weight PG can fortify the effect of immunity enhancement.     

3种巯基化合物对凡纳滨对虾多酚氧化酶的抑制效果和动力学

为开发高效安全的对虾黑变抑制剂,研究3种巯基化合物对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)的抑制效果和动力学。结果表明:当L-半胱氨酸、N-乙酰-L-半胱氨酸和还原性谷胱甘肽质量浓度分别为0.4、0.8、1.6 mg/mL时,与PPO作用5 min,对PPO的抑制率分别达85.3%、89.3%、91.2%;3种巯基化合物质量浓度为0~0.8 mg/mL时对凡纳滨对虾PPO的抑制为竞争性抑制,质量浓度为0.8~6.4mg/mL时的抑制为不可逆抑制。3种巯基化合物对凡纳滨对虾PPO的抑制是两种机制并存。     

贮藏时间和加热温度对凡纳滨对虾虾仁ATP关联化合物及品质的影响

【目的】研究贮藏时间和加热温度对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)虾仁三磷酸腺苷(ATP)关联化合物及虾仁品质的影响。【方法】利用高效液相色谱法分析凡纳滨对虾中6种ATP关联化合物,通过比较不同贮藏时间的凡纳滨对虾虾仁在加热过程中的ATP关联化合物,分析加热前后虾仁的感官品质,以及鱼虾类鲜度指标K值、G值、P值的变化。【结果与结论】随贮藏时间的增加,ATP、二磷酸腺苷(ADP)、腺苷酸(AMP)含量呈下降趋势,肌苷酸(IMP)先上升后下降,次黄嘌呤(HX)和肌苷(HXR)上升;随着加热温度的增加,ATP和ADP下降,AMP增长,IMP、HX、HXR先增加后降低。贮藏2 d后的生虾和贮藏3 d后再加热的虾仁均将达到最大感官可接受上限。随着贮藏时间的增加,加热前后K值、G值和P值线性增加,但生虾的G值与鲜度的相关性较差,不适宜作为鲜度指标,K值和P值可作为生虾的鲜度指标。加热后的K值、G值、P值与贮藏时间、感官质量评定值(QI值)的线性回归方程的决定系数较好,表明K值、G值、P值可以用来表征熟虾的品质。     

蜕壳素对凡纳滨对虾生长及表观消化率的影响

研究了外源性蜕皮激素对凡纳滨对虾生长和表观消化率的影响 ,实验时在基础饲料中分别添加 0 .1%、0 .2 %、0 .4 %的两种市售蜕壳素产品 ,制成 6种外源性脱壳素配合饲料 ,不添加的基础饲料作为对照组 ,试验在 2 6 0L玻璃钢循环水养殖系统中 ,每个剂量组设 3个重复 ,8周生长试验结果表明 :市售蜕壳素产品能有效地促进对虾生长 ,试验结束时 ,试验组虾体增重分别较对照组增加 16 .8%、7.5 2 %、5 .9%、11.4 %、2 9.0 7%、16 .5 3% ,但是凡纳滨对虾对饲料粗蛋白的表观消化率没有明显地提高 ,凡纳滨对虾对脂肪的表观消化率较低。推算凡纳滨对虾饲料中最佳蜕皮酮添加量为 6 0mg/kg。     

The Effects of Rapid Temperature Changes on HK,PK and HSP70 of Litopenaeus vannamei in Different Seasons

Activities of hexokinase(HK),pyruvate kinase(PK) and levels of HSP70 were measured to evaluate the response of Litopenaeus vannamei to rapid temperature changes under controlled laboratory conditions.Shrimps were subjected to a quick temperature change from 27℃ to 17℃ for the summer case(Cold temperature treatment),or from 17℃ to 27℃ for the winter case(Warm temperature treatment).After 0.5,1,3,6,12,24,48,and 72 h of exposure time,shrimps were sampled and prepared for further analysis.The results showed that the effect of acute temperature changes on activities of HK was significant.Patterns of variations of the two glycolytic enzymes suggested that enzymes in the glycolysis cycle could adjust their activities to meet the acute temperature change.The HSP70 level increased in both cold and warm temperature treatments,suggesting that the rapid temperature changes activated the process of body's self-protection.But the difference in expression peak of HSP70 might be related to the different body size and the higher thermal sensitivity to temperature increase than to temperature decrease of L.vannamei.