长毛对虾酸性磷酸酶功能基因的研究（I）

采用某些化学修饰剂修饰长毛对虾酸性磷酸酶的活性功能基因。结果表明，精氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基是酶活性功能基团，当酶活力下降时，伴随着紫外吸收光谱及荧光发射光谱的变化，显示酶活力与构象密切相关。健康虾酶对修饰剂的敏感性大于病虾酶。     

长毛对虾酸性磷酸酶功能基团的研究(Ⅱ)

用化学修饰剂pCMB、NBS、K试剂修饰长毛对虾Penaeuspenicilla－tusAlcock酸性磷酸酶（ACPase，EC3．1．3．2），在修饰剂作用下，酶活力明显下降，健康虾酶对修饰剂的敏感性（NBS除外）大都稍大于病虾酶。修饰酶的紫外280um吸收光谱以及荧光340um发射光谱的变化，表明酶活力下降的同时酶构象也产生相应的变化。结果表明，酶分子的半胱氨酸残基、色氨酸残基以及门冬氨酸、谷氨酸β或γ验基与酶活力有关，是酶的催化功能基团。     

长毛对虾酸性磷酸酶功能基团的研究（II）

用化学修饰剂ｐＣＭＢ、ＮＢＳ、Ｋ试剂修饰长毛对虾Ｐｅｎａｅｕｓ ｐｅｎｉｃｉｌｌａｔｕｓ Ａｌｃｏｃｋ酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ，ＥＣ３．１．３．２），在修饰剂作用下，酶活力明显下降，健康虾酶对修饰剂的敏感性（ＮＢＳ除外）大都在于病虾酶。修饰酶的紫外２８０ｎｍ吸收光谱以及荧光３４０ｎｍ发射光谱的变化，表明酶活力下降的同时酶构象也产生相应的变化。结果表明，酶分子的半胱氨酸残基、色氨酸残基以及门冬氨酸、     

中国鲎N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性必需基团的研究

为了探讨中国鲎N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase)活性的必需基团,采用了化学修饰法进行研究,分别以甲醛、乙酸酐、三硝基苯磺酸、对氯汞苯甲酸、苯甲基磺酰氟、二巯基苏糖醇、乙酰丙酮、溴代乙酸、碘代乙酸、N-溴代琥珀酰亚胺等10种修饰剂,在特定环境中对中国鲎NAGase进行化学修饰。结果表明:中国鲎NAGase中赖氨酸的ε-氨基、组氨酸的咪唑基、色氨酸的吲哚基和丝氨酸的羟基经修饰后,酶活力几近丧失,这些氨基酸基团为酶活性的必需基团,且可能处于酶的活性部位;半胱氨酸的巯基经修饰后不完全失活,说明半胱氨酸的巯基是NAGase催化活性所必需的,但可能不处于酶的活性部位;酶的二硫键被修饰后,酶活力明显下降,说明二硫键在维系NAGase的三维空间构象中起重要作用;而精氨酸的胍基经修饰后酶的活性基本不变,因此,精氨酸不是NAGase的必需基团。     

中国对虾(Penaeus chinensis)精子ATP酶活力与生殖关系的探讨

首次报道了中国对虾精子存在有Ｎａ，Ｋ－ＡＴＰ酶及Ｍｇ－ＡＴＰ酶活力，并对 其生物功能进行了探讨。对来自不同季节的雌虾纳精囊中精子的两种ＡＴＰ酶活力 进行了测定。酶分析的结果为春虾精子的 Ｎａ，Ｋ－ＡＴＰ酶活力为 １．１４５±０．２２９μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ，秋虾则为 １． ０５８±０． ４３１μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ；春虾精子的 Ｍｇ－ＡＴＰ酶活力为 １． ６４７±０． ６９１μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｍ· ｈ，秋虾则为 １． ５８４±０． ３１５μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ。因此在表观 上，春虾精子的两种ＡＴＰ酶活力均略高于秋虾，但差异不够显著。     

产新琼四糖的海洋微泡菌属AG1热稳定性β-琼胶酶的过量表达与鉴定

从微泡菌属AG1（Microbulbifer sp. AG1）克隆得到1302 bp大小的琼胶酶基因,该基因编码产物为一个成熟蛋白（413个氨基酸残基）外加一个信号肽（20个残基）。将不含信号肽片段的琼胶酶在E. coli BL21 （DE3）中进行了异源表达和纯化。使用琼脂糖作为底物,该重组琼胶酶的最适反应温度和pH分别为60℃和7.5。该重组酶表现出优良的热稳定性,在50℃和60℃下处理1 h,重组琼胶酶仍能分别保持67%和19%的残余酶活力。除了SDS,重组琼胶酶对于其他测试的抑制剂、去垢剂和尿素变性剂有着较好的抗性。利用薄层色谱和以对硝基苯-α/β-D-吡喃半乳糖苷为底物的酶活力分析结果表明,该重组琼胶酶为β型琼胶酶,它水解琼脂糖的主要终产物为新琼四糖,而且不同聚合度的酶解产物具有抗氧化活性。     

经酶修饰和未经酶修饰的鹌鹑红细胞对甲壳动物血清凝集素凝集活性的差异研究

为寻找凝集素作为分子探针提供基础资料,用12种甲壳动物血清抽提液对天然的或经酶修饰的鹌鹑红细胞进行凝集试验。实验结果表明,经蜗牛酶修饰后的鹌鹑红细胞的凝集作用发生了变化,与未经酶处理的鹌鹑红细胞相比,凝集活性提高的有日本沼虾（Macrobrachium nipponense）等7种,凝集活性下降的有罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergi）等2种。凝集素对动物红细胞的凝集可看作是与这些细胞表面的多糖或糖蛋白——即受体的识别性鲒合,这表明鹌鹑红细胞表面具有12种凝集素的受体,且大多数受体都受到酶修饰的影响,从而在凝集活性上表现出差异。     

温度、pH对日本沼虾血清酚氧化酶活力及稳定性的影响

以日本沼虾（Macrobrachium mipponense)为材料，研究温度，pH对其血清酚氧化酶活力及稳定性的影响。试验以L－多巴为作用底物，测得酚氧化酶的最适温度为40℃，大于或低于该值，酶活力均迅速下降，同时该酶在40℃以下表现出较高的热稳定性；该酶的最适pH值为7．0；在pH6－8范围内具有较高的活性，最稳定的pH为8．0。     

复合免疫药物对中国对虾血淋巴氧化酶和抗氧化酶活力的影响

中国对虾口服复合免疫药物“虾康素”后，于第1，3，5，7天分别测定了中国对虾血清中髓性过氧化物酶（MPO），酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活力，结果表明，血清中MPO，SOD和CAT活力在第1，3，5，7天时均与实验组高于对照组，并且差异极显著。血清中PO活力仅在第1天时，血细胞中PO活力则仅在第1天和7天时，实验组高于对照组，且差异极显著。     

中国对虾幼体和仔虾消化酶活力及氨基酸组成的研究

于1987年5月初在山东日照市涛雒对虾育苗场采集中国对虾虾苗;成虾于1986年春、秋两季取自青岛胶州湾水域的网捕成虾。以酶学分析方法作试验。结果表明,1.虾苗酶活力结果为:类胰蛋白酶及胃蛋白酶的活性有差异,溞状幼体期<糠虾幼体期<仔虾期;酶活性随着生长发育而增高,类咦蛋白酶活性比胃蛋白酶高4倍左右。淀粉酶的活性是溞状幼体期>糠虾幼体期>仔虾期;纤维素酶活力极微;淀粉酶活性是纤维素酶的6—13倍左右。育苗期几种消化酶的活性均远远低于成虾。2,育苗期幼虾的氨基酸含量,随着生长发育而增高,在各期,氨基酸总和的差别是:溞状幼体期<糠虾幼体期<仔虾期。     

南美白对虾早期幼体消化酶活力的研究

以酶学分析方法对南美白对虾(Penaeus vannamei Boone)幼体及仔虾 4种消化酶的活力进行了分析测定,结果表明:南美白对虾早期幼体消化酶活力表现差异,类胰蛋白酶、胃蛋白酶的活力为无节幼体(N)<溞状幼体(Z)<糠虾幼体(M)<仔虾(P),类胰蛋白酶的活力比胃蛋白酶高2倍左右;淀粉酶的活力Z-M期表现较高,以后随幼体发育淀粉酶活力明显降低;脂肪酶活力在早期幼体发育阶段变化不大,且活力较低。     

海产品中蛋白酶产生菌的选育及产酶条件研究

从海产品虾和蟹中分离出蛋白酶产生菌共37株，其中YM007菌株蛋白酶生产活力较高，为194．6U／mL。以YM007为出发菌株，通过物理和化学方法复合诱变，获得了YM079号菌株。对其产酶条件的研究结果表明：它的最适产酶温度为35℃，最适生长pH为7．0，经过190r／min摇床培养36～40h，其产酶活力为240U／mL，比出发菌株的产酶活力提高了22％。该菌株经发酵的粗酶液最适作用pH为7．0，最适作用温度是45℃，是一种中温型中性蛋白酶。     

盐酸胍对文昌鱼Branchiostoma belcheri(Gray)酸性磷酸酯酶构象与活力的影响

本文报告了文昌鱼酸性磷酸酯酶在不同浓度的盐酸胍作用下酶的构象与催化活力变化的关系。盐酸胍浓度在1mol/dm~3时,酶活力提高50%.随着盐酸胍浓度提高(2～4mol/dm~3),酶活力下降,荧光强度也下降,荧光发射光谱λ_(max)值明显红移(330～358nm)。测其变性及失活动力学常数,结果表明,酶的失活速度大于变性速度,表现为慢构象变化、快活力变化的一种模式。在盐酸胍3～4mol/dm~3时,酶的变性与失活过程表现为两个一级反应过程(快相和慢相),其构象与催化活力的变化表明AC-Pase 与活力部位相关的色氨酸残基微环境产生了变化。     

过氧化氢对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的抑制动力学

研究过氧化氢对锯缘青蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响及抑制动力学．其结果表明，过氧化氢对该酶有显著的抑制作用，随着过氧化氢浓度的增高，酶活力呈指数下降，测出可使酶活力下降50％的过氧化氢浓度（抑制半衰期，IC50）为115mmol／dm^3．低浓度过氧化氢对该酶的抑制过程显示为可逆效应．采用底物反应动力学方法研究过氧化氢对该酶的抑制作用动力学并建立动力学模型，测定游离酶（E）和酶．底物络合物（ES）的微观抑制速度常数k＋0和k＋0，并加以比较．实验结果（k＋0〉k＋0）表明底物对酶被过氧化氢的抑制作用有一定保护作用．过氧化氢可能是通过氧化酶活性中心功能基团而导致酶活性的丧失．     

凡纳滨对虾幼体胃蛋白酶和类胰蛋白酶活力的研究

以酶学分析方法测定了凡纳滨对虾(LitopenaeusvannameiBoone)状幼体(Z2)、糠虾幼体(M2)和仔虾(P1)胃蛋白酶和类胰蛋白酶活力的变化。结果表明,在凡纳滨对虾幼体发育过程中,胃蛋白酶和类胰蛋白酶活力逐渐增大,表现为Z2相似文献   

高温下3种壳色虾夷扇贝存活率、代谢率、免疫酶活力及HSP70表达的比较研究

以3种壳色虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)(枫叶贝、红贝、白贝)为实验材料,将在15℃暂养的3种壳色虾夷扇贝分别驯化至20,22,24和26℃4个温度梯度(升温幅度为1℃/d),待各处理组达到对应温度梯度后暂养7 d,测定比较3种壳色虾夷扇贝的存活率、耗氧率和排氨率、抗氧化酶活力和热激蛋白HSP70表达等指标。结果表明:随着温度的升高,3种壳色的虾夷扇贝的存活率呈先上升后下降趋势,其中,白壳色虾夷扇贝的存活率在同一处理组中最高;3种壳色的虾夷扇贝耗氧和排氨率均随温度升高呈现先升高后降低的趋势,同一温度处理组下白壳色虾夷扇贝的代谢率始终高于红贝和枫叶贝;另外,总抗氧化能力(total-antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧酶(activity of superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、过氧化物酶(Peroxidase,POD)4种免疫酶的活性随温度升高也呈现先升高后降低的趋势,且同一温度处理组下白壳色虾夷扇贝的免疫酶活力始终高于红贝和枫叶贝;3种壳色虾夷扇贝鳃HSP70的表达模式基本相同,随着温度的逐渐升高,HSP70持续表达,到26℃时表达量最高,且白壳色扇贝HSP70的相对表达量最高为5.07。综上,白壳色虾夷扇贝在高温应激下表现出较强的抵抗和耐受能力,因此,可将其作为后期耐高温型虾夷扇贝新品系的重要培育材料。     

金属离子对长毛对虾酸性磷酸酶的影响

本文研究几种金属离子分别对健康虾和病虾酸性磷酸酶ＡＣＰａｓｅ（ＥＣ３．１．３．２）活性的影响。结果表明,Ｎｉ＾２＋、Ｍｇ＾２＋、Ｃｄ＾２＋对酶无明显抑制作用,Ｚｎ＾２＋、Ｃｕ＾２＋、Ｈｇ＾２＋对酶活力抑制明显。当Ｈｇ＾２＋离子浓度达０．５ｍｍｏｌ／ｄｍ＾２时,酶活力被抑制９６％和９５％;各金属离子对酶的抑制强度依次为Ｈｇ＾２＋〉Ｃｕ＾２＋〉Ｚｎ＾２＋〉Ｐｂ＾２＋〉Ｃｄ＾２＋、Ｍｇ＾２＋〉Ｎｉ＾２＋     

乙醇对锯缘青蟹碱性磷酸酶活力与构象的影响

应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究锯缘青蟹碱性磷酸乙醇微扰后的分子构象变化情况。乙醇对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增加,荧光发射峰逐渐发生红移,说明酷氨酸、色氨酸残基的微环境发生明显的变化;紫外吸收光谱在278nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强。这些结果表明,酶蛋白分子中的生色基因残 基的微环境发生变化;酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降,经乙醇失活的酶在正常的测活体系中监测酶活力,发现酶活力可以回升到92％以上,说明酶的乙醇失活是可逆的,可以通过稀释复活。测定乙醇对酶的抑制动力学,表明乙醇对青蟹碱性磷酸酶的抑制作用是反竞争性机制,其抑制常数Ki为11．8％。     

日本沼虾黑鳃病几种同工酶的变化与病理分析

酯酶（EST），过氧化物酶（POD），乳酸脱氢酶（LDH）和苹果酸脱氢酶（MDH）同工酶在日本沼虾中存在着组织和器官的特异性，患黑鳃病后酶带发生显著变化。在肌肉、肝脏、心脏和鳃中病虾较健康虾的LDH酶谱分别缺失了2、6、2和1条酶带，同时肝脏中新增了1条酶带；POD酶谱分别缺失了0、7、4和2酶带，肌肉中新增了2条酶带；EST酶谱分别缺失了0、2、3和1条酶带，肌肉、心脏和鳃中分别新增了1、2和2条酶带；MDH酶谱分别缺失了0、2、1和1条酶带，肌肉和脏脏中各新增了1条酶带。     

虾头透明质酸酶的研究

以中国对虾Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ虾头经处理，得到虾头透明质酸酶酶液，再经沉淀、硫酸铵反抽提、ＤＥＡＥ－纤维素提取和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶层析。纯化倍数达７２０倍，比活８４０ｕ·ｍｇ－１蛋白。该酶最适ｐＨ为４．５，最适温度为５０℃。