斜带石斑鱼与赤点石斑鱼的核型研究

采用PHA体内注射肾细胞直接制片法研究斜带石斑鱼和赤点石斑鱼的核型。结果表明，斜带石斑鱼的核型为2n=48，2sm 46t，NF=50；赤点石斑鱼的核型为2n=48，5st 43t，NF=48。两种鱼的2n数相同，它们的核型特点符合典型的高位类群鱼类核型特征。     

斑带石斑鱼与黑边石斑鱼核型的研究

以斑带石斑鱼与黑边石斑鱼为材料，胸腔注射秋水仙碱溶液，取全肾经空气干燥制片法制片。姬姆萨染色和银染，分析核型及Ａｇ－ＮＯＲ带，结果表明斑带石斑鱼的核型为２ｎ＝４８、４８ｔ、ＮＦ＝４８。黑边石斑鱼的核型为２ｎ＝４８、４８ｔ、ＮＦ＝４８。在最小一对端部着丝粒染色体上均具有明显的次缢痕。银染结果显示该次缢痕部位即为核仁组织者区域。     

六带石斑鱼(Epinephelus sexfasciatus)的核型分析

以六带石斑鱼肾细胞为材料,采用 PHA 和秋水仙素进行分步活体注射,经低渗处理,空气干燥制片法制作染色体标本。对染色体初步的分析结果表明,六带石斑鱼体细胞染色体数目为2n=48。其中2条为亚中着丝点染色体,46条为端着丝点染色体(包括两条有明显的次缢痕的染色体),故总臂数 NF=50。     

甲状腺素对斜带石斑鱼卵黄囊期仔鱼生长发育的影响

用4种不同浓度的甲状腺素(T4)分别浸泡斜带石斑鱼卵黄囊期仔鱼,研究T4对仔鱼发育、生长和存活的影响。结果表明,在孵化后24 h内,T4对仔鱼发育的促进作用不明显;在孵化24 h后,T4对仔鱼消化道的发育有促进作用。在孵化后72 h,0.01 mg·L-1 T4处理组仔鱼小肠管径、直肠管径、全长与对照组相比差异均不明显;0.10 mg·L-1和1.00 mg·L-1 T4处理组仔鱼小肠和直肠管径显著比对照组大(P<0.01),1.00 mg·L-1 T4处理组仔鱼全长显著比对照组短(P<0.01),而0.10 mg·L-1处理组仔鱼全长与对照组相比无明显差异(P>0.05)。在孵化后第8天,0.10 mg·L-1 T4处理组仔鱼存活率明显比对照组高(P<0.01),而0.01 mg·L-1 T4组和1.00 mg·L-1 T4组与对照组之间存活率差异不明显(P>0.05)。结果提示0.10 mg·L-1 T4处理能促进斜带石斑鱼卵黄囊期仔鱼的消化道发育并提高其存活率。     

棕点石斑鱼(♀)与蓝身大斑石斑鱼(♂)杂交子代核型分析

【目的】研究棕点石斑鱼(Epinephelus tukula,♀)与蓝身大斑石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus,♂)杂交F1代(下称"金虎斑")的染色体核型。【方法】采用头肾-PHA注射法制备金虎斑染色体,并分析其核型。【结果与结论】金虎斑二倍体染色体数为48,包括23对端部着丝粒染色体,1对亚中部着丝粒染色体,核型公式是2n=48=2sm+46t,染色体臂数(NF)为50。与其他石斑鱼核型相比,金虎斑染色体核型特点符合典型的高位类群鱼类核型特征;根据染色体臂数,金虎斑属于特化类群。     

中草药复方及其与抗生素联用对斜带石斑鱼河流弧菌病的治疗效果

【目的】通过药物体外抑菌试验及斜带石斑鱼抗病力研究,筛选有效治疗斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)河流弧菌(Vibrio fluvialis)病复方中药与中西药联用配方。【方法】用黄连、乌梅、黄柏比例分别为0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1的复方中药对河流弧菌进行体外抑菌实验;将质量分数2.2%复方中草药与中西药联用复方分别添加到基础饲料中,投喂感染河流弧菌的斜带石斑鱼73 d,研究中西药对石斑鱼河流弧菌病治疗效果。其中,试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的黄连、乌梅、黄柏比例分别为0.9∶1.3∶0.9、1.2∶0.9∶1.0、1∶1∶1,试验组Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的黄连、乌梅、黄柏、恩诺沙星配比分别为0.9∶1.3∶0.9∶1.3、1.2∶0.9∶1.0∶0.9、1∶1∶1∶1,另设空白对照组Ⅰ(健康鱼,投喂基础饲料)、Ⅱ(病鱼,投喂基础饲料)和阳性对照组Ⅲ(病鱼,投喂板黄散)、Ⅳ(病鱼,投喂大黄五倍子散)。【结果】黄连、乌梅、黄柏配比1∶1∶1、质量浓度200mg/mL的复方中药对河流弧菌的体外抑菌效果较佳,为最佳配方及用量。40 d病鱼死亡数,对照组Ⅱ对照组Ⅳ对照组Ⅲ试验组Ⅰ试验组Ⅲ试验组Ⅱ试验组Ⅴ试验组Ⅵ试验组Ⅳ对照组Ⅰ,试验组Ⅱ的黄连、乌梅、黄柏比1.2∶0.9∶1.0为疗效最佳的中药复方,试验组Ⅳ的黄连、乌梅、黄柏、恩诺沙星比为0.9∶1.3∶0.9∶1.3为疗效最佳的中西药联用复方。【结论】中药复方及中西药联用复方均可较好治疗斜带石斑鱼河流弧菌病,后者药效优于前者。     

溶藻弧菌胞外产物注射赤点石斑鱼后的组织病理学观察

在注射溶藻弧菌胞外产物(ECP)48 h后,石斑鱼Epinephelus akaara出现死亡,临床症状表现为:运动迟缓,体色变深,腹部膨大,腹腔有明显的积水,肝脏出血有花斑,肾脏和脾脏肿大。病理组织切片观察发现:肝细胞坏死,解体,界限模糊,细胞核变形、裂解甚至消失;肝脏出血,肝索中有红细胞浸润,有的红细胞变形甚至破裂;肾小管上皮细胞脱落、坏死;肠粘膜上皮细胞脱落、坏死,微绒毛不整齐,模糊不清,脱落;脾窦和脾索不清晰,分界不清,且在脾窦和脾索中分布着大量的、形态不规则的红细胞。此外,还发现在肝脏、脾脏、肾脏、肠壁肌层、心肌和鳃等组织中存在一种相同结构,该结构有平滑肌环绕,管腔内壁衬以扁平上皮细胞,管腔中含有一团染成紫红色的物质,经推断为小动脉透明样变性,而在正常的组织切片中,均无此结构。     

斜带石斑鱼幼鱼对羟基蛋氨酸铜的需求

在斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)幼鱼基础饲料(铜质量分数2.03 mg/kg)中分别添加6个水平的羟基蛋氨酸螯合铜(hydroxy methionine copper,HMC),制成铜质量分数分别为2.03、4.04、6.20、10.67、13.96 mg/kg的实验饲料,饲喂6周后,探讨HMC对幼鱼生长、非特异性免疫酶活性和组织铜沉积的影响,确定幼鱼饲料中铜的最适需要量。结果表明,饲料中添加HMC,对石斑鱼的增重率、特定生长率(SGR)和饲料系数等生长性能的影响有统计学意义(P0.05),以铜质量分数6.20 mg/kg组增重率和特定生长率最高,饲料系数最低,高于或低于2.03和13.96 mg/kg组,差异有统计学意义(P0.05),与4.04和10.67 mg/kg组差异无统计学意义(P0.05);但对成活率、肝体比影响差异无统计学意义(P0.05)。饲料中添加HMC对全鱼水分和粗蛋白含量影响无统计学意义(P0.05),对全鱼粗灰分和粗脂肪含量影响有统计学意义(P0.05)。石斑鱼血浆铜蓝蛋白(CP)的含量、血清和肝脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)及铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)活性均以6.20 mg/kg组最高;饲料中铜的添加对血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和肝脏硫代巴比妥酸反应物(TBARS)含量影响无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,饲料中添加HMC均提高鱼体、肌肉和肝脏中铜含量,差异有统计学意义(P0.05),且以13.96 mg/kg组最高。饲料中添加适量的HMC可提高石斑鱼幼鱼的生长性能,提高抗氧化能力。在本实验条件下,以SGR为判据,通过二次回归方程拟合可得,以HMC为铜源,斜带石斑鱼幼鱼铜需要量为7.09 mg/kg。     

哈维氏弧菌GST核酸疫苗制备及其对斜带石斑鱼的免疫保护作用

通过同源引物从致病性哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ZJ0603基因组中克隆GST的开放阅读框(ORF),构建真核表达质粒pcDNA-GST。大量抽提重组质粒后,于背鳍基部肌肉注射重组质粒免疫斜带石斑鱼(Epinephelus coioides),分析重组质粒的免疫效果。通过核酸水平检测重组质粒在鱼体肝、肌肉、头肾和脾脏组织的分布;用ELISA法检测鱼体血清的抗体水平,用Western-blot检测目的蛋白的表达情况。结果表明:该序列全长615 bp;免疫7 d后,鱼体中均有质粒分布;斜带石斑鱼血清中产生抗GST的高效抗体(1∶4 096);相应的目的蛋白也在鱼体中成功表达。攻毒后,疫苗免疫保护率达80%,表明GST可作为防治哈维氏弧菌病有效候选抗原。     

饲料中不同水平n-3 HUFA 对斜带石斑鱼幼鱼生长及肌肉脂肪酸组成的影响

以精制鱼油和豆油作为脂肪源,配制质量分数0.48%、0.97%、1.50%和1.97%等4种不同水平n-3高度不饱和脂肪酸(n-3 HUFA)的饲料,并饲喂斜带石斑鱼幼鱼50 d,研究不同水平n-3 HUFA对斜带石斑鱼(Epinephlus coioides)幼鱼生长及肌肉脂肪酸组成的影响.结果表明:饲料中n-3 HUFA水平对实验鱼增重率、饲料系数、蛋白质效率都有显著影响(p<0.05).以增重率、饲料系数、蛋白质效率为参考指标,通过回归分析,斜带石斑鱼幼鱼对饲料中n-3 HUFA的适宜需要量(质量分数)为1.27%~1.42%;各实验组的鱼体肥满度不受饲料中n-3 HUFA水平的影响,保持在1.4左右;内脏比与肝体比随饲料中n-3 HUFA水平升高而呈现降低趋势;各实验组鱼体肌肉常规营养成分不受饲料中n-3 HUFA水平的影响,肌肉中的n-3 HUFA随饲料n-3 HUFA水平增加而增加.     

溶藻弧菌胞外产物注射赤点石斑鱼后的组织病理学观察

在注射溶藻弧菌胞外产物（ECP）48h后，石斑鱼Epinephelus akaara出现死亡．临床痱状表现为；运动迟缓．体色变深．腹部膨大．腹腔有明显的积水．肝脏出血有花斑．肾脏和脾脏肿大。病理组织切片观察发现：肝细胞坏死，解体．界限模糊．细胞核变形、裂解甚至消失；肝脏出血．肝索中有红细胞浸润．有的红细胞变形甚至破裂；肾小管上皮细胞脱落、坏死；肠粘膜上皮细胞脱落、坏死．微绒毛不整齐．模糊不清．脱落；脾窦和脾索不清晰．分界不清．且在脾窦和脾索中分布着大量的、形态不规则的红细胞。此外．还发现在肝脏、脾脏、肾脏、肠壁肌层、心肌和鳃等组织中存在一种相同结构，该结构有平滑肌环绕．管腔内壁衬以扁平上皮细胞．管腔中含有一团染成紫红色的物质．经推断为小动脉透明样变性．而在正常的组织切片中．均无此结构。     

cDNA cloning and expression of a collectin from red-spotted grouper （Epinephelus akaara）

Lectins play a crucial role in the innate immunity of invertebrates and vertebrates by recognizing and disposing of pathogens.We obtained the complete cDNA of a C-type lectin(EALec1) from Epinephelus akaara using RACE.The complete EALec1 cDNA sequence was 827 bp.The 5-UTR and 3-UTR were 28 bp and 151 bp,respectively,in length.The sequence also contained a polyadenylation signal AATAAA and a poly(A) tail.The EALec1 cDNA encodes polypeptides with 215 amino acids,including a signal peptide of 31 amino acids.Th...     

Optimum temperature for the growth performance of juvenile orange-spotted grouper （Epinephelus coioides H.）

Effects of water temperature （17, 21, 25, 30 and 35℃） and body size （14.75-281.41 g initial body weight） on food consumption, growth, feed conversion, and dry matter content in orange-spotted grouper fed to satiation were investigated. The combined effect of temperature （T, ℃） and body weight （W, g） on maximum food consumption （Cmax, g/day） was described as： InCmax=-7.411＋0.828 InW＋0.317T4）.004 7T2, and the optimum feeding temperature was 33.9℃. The combined effect of temperature and body weight on growth （G） was described as： lnG=-4.461-0.2081nW＋0.394T-0.006 3T^2. The optimum growth temperature was 31.4℃, whereas overall growth rates were high at 25, 30 and 35 ℃. Feed conversion efficiencies （FCE, %）, increasing first and then decreasing with increasing temperature, averaged from 1.8 to 2.1 in terms of dry weight of food fish. The optimum temperature for FCE tended to be lower than that for growth or feeding. Dry matter content increased with both increasing water temperature （17, 25, 30 and 35℃） and body weight, and the combined effect of temperature and body weight on dry matter content （DM, %） was described as： lnDM =3.232＋0.01 4 lnW-0.004 4T＋0.001 2TInW.     

斜带石斑血细胞发生的观察

对斜带石斑的肝脏、脾脏、头肾和肾脏等四种组织中血细胞的发生过程进行了观察和测定。观察发现,斜带石斑的头肾、肾脏和脾脏可以产生红细胞和各种类型的白血细胞,是主要的造血器官,而肝脏只能产生白细胞,不能产生红细胞。对斜带石斑的外周血液进行涂片观察,在涂片上可区分出红细胞以及四种白细胞:淋巴细胞、血栓细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞,它们在总的白细胞中所占比例分别为(46.56±9.53)%、(21.28±6.77)%、(17.50±8.69)%和(14.66±11.06)%。     

鞍带石斑鱼人工繁殖及胚胎发育研究

为建立鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)人工繁殖技术,研究了鞍带石斑鱼亲鱼培育、催产及胚胎发育过程。根据性腺检查及催产结果,判定鞍带石斑鱼在广东的繁殖季节为每年的7-9月份,产卵水温在28~31℃。使用10~12尾雌鱼和3尾雄鱼搭配进行催产实验,亲鱼未出现发情和追尾现象,虽能产卵但均未受精,通过人工授精可得受精卵。对鞍带石斑鱼胚胎发育进行了观察,详细描述从受精卵到初孵仔鱼的28个具体发育时期的形态特征和发育时间,结果表明,将鞍带石斑鱼胚胎发育划分为卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期和器官形成期。在水温(27±0.5)℃、盐度31.0、pH 7.8的海水中,鞍带石斑鱼胚胎历时25 h 40 min完成整个胚胎发育孵化出膜。     

孔雀石绿在青石斑鱼肌肉组织中的残留与消除规律

为了解运输和疾病防治过程非法使用孔雀石绿后,青石斑鱼(Epinephelus awoara)对孔雀石绿的蓄积及消除规律,以指导对孔雀石绿的禁用监管,采用3种浓度的孔雀石绿分别连续药浴5 h,以及分3次间断药浴15 min,再转移至水泥池中用海水养殖,采用液相色谱—串联质谱法(LC/MS/MS)测定青石斑鱼肌肉组织中孔雀石绿的残留。结果表明:模拟运输过程用药后,残留量依次为247、102、113 g/kg,模拟疾病防治用药后,最大残留量依次为14.3、10.2、8.62 g/kg;两种用药方式下,用药浓度为0.15 mg/L时,其残留峰值均出现在清水养殖一个月后;模拟运输过程用药后,青石斑鱼肌肉组织孔雀石绿需245 d方可降至检测限以下,模拟疾病防治需122 d。种苗阶段的非法用药也可能成为水产品孔雀石绿残留的来源。