光裸星虫全组织荧光定量PCR分析中内参基因的筛选

【目的】筛选光裸星虫体壁、肠道、肾管、吻、收吻肌以及体腔液细胞中稳定表达的内参基因。【方法】应用荧光定量PCR技术,对GAPDH、β-actin、TUB、TBP以及UBC等常用内参基因的表达情况进行分析,通过ge Norm、Norm Finder、Best Keeper以及在线内参筛选工具Ref Finder对8个内参基因表达稳定性进行评测。【结果】8个内参基因均可获得特异性扩增产物,但稳定性各异。通过累计积分法综合了4个软件给出的稳定性排序结果,候选内参基因表达稳定性综合排名为TBP(1)TBP(2)UBCGAPDHTUB(2)TUB(1)β-actin(2)β-actin(1)。【结论】TBP(1)在光裸星虫全组织中的表达最稳定,可作为最适单内参基因。     

光裸星虫消化系统的解剖学和组织学研究

运用解剖学和组织学方法研究光裸星虫(Sipunculus nudus)消化系统结构。结果表明,光裸星虫消化系统由消化道和直肠盲囊组成,消化道可分为口、食道、下行肠、上行肠、直肠和肛门。口四周由具摄食作用的辐射状触手围绕。消化道管壁由黏膜层、黏膜下层和浆膜三层结构组成,黏膜层具有大量皱褶,黏膜下层和浆膜层中分布有大量颗粒细胞;无连续的肌肉层,只在黏膜下层内散布着数量不等的肌纤维。直肠盲囊细长,连接于上行肠末端,囊壁无分泌细胞,囊内充满黄色黏稠液状物质。     

光裸星虫4个野生群体的营养成分分析与品质评价

测定广东湛江、广西北海、福建漳州等地4个主产区的光裸星虫(Sipunculus nudus)的主要营养成分,分析光裸星虫群体间营养差异。结果表明,光裸星虫体壁的水分的平均质量分数为(79.39±1.81)%,体壁干品中粗蛋白、粗脂肪和灰分的平均质量分数分别为、(80.54±3.11)%、(1.45±0.27)%和(9.75±2.14)%。体壁干品中共检测到16种氨基酸,氨基酸总量(TAA)、必需氨基酸(EAA)、呈味氨基酸(DAA)的平均质量分数分别为(63.91±1.78)%、(21.76±0.63)%、(32.23±0.64)%;含量最高的5种氨基酸中,4种为呈味氨基酸,其中谷氨酸质量分数9.51±0.26%为最高,天冬氨酸(6.58±0.22)%为其次。光裸星虫的第一限制氨基酸和第二限制氨基酸分别是蛋氨酸和缬氨酸。4个群体的水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分、氨基酸总量(TAA)、呈味氨基酸质量分数(DAA)等营养指标差异具统计学意义(P0.05),必需氨基酸质量分数(EAA)、EAA/TAA、DAA/TAA、非必需氨基酸质量分数(NEAA)、EAA/NEAA等指标差异不具统计学意义(P0.05)。光裸星虫是一种优质的高蛋白、低脂肪、味道鲜美、营养丰富的海产品。     

管角螺不同组织同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺垂直板梯度凝胶电泳技术，对管角螺7种组织（外套膜、肌肉、肝脏、心脏、生殖腺和缠卵腺）的5种同工酶（EST、SOD、ME、MDH、LDH）进行了分析，结果表明：5种同工酶存在不同程度的组织特异性，SOD、EST、LDH在肝脏组织中有较高活性，而MDH、ME在心脏组织中活性较高。     

湛江地区光裸星虫的生殖细胞发育和生殖周期

采用活体观察和常规石蜡切片技术对湛江地区光裸星虫生殖周期、生殖细胞的发育及形态结构进行研究。结果表明:星虫雌雄异体,无肉眼可见生殖腺结构,原生殖细胞在体腔液中发育;雌性生殖细胞根据其卵膜的形成和卵黄积累情况可以分为4个发育阶段,小生长期、大生长期、成熟前期和成熟期;雄性生殖细胞也分为增殖期、生长期、成熟期和变态期4个阶段;成熟的生殖细胞经肾管排出体外。生殖季节为5~9月,其中7~8月为高峰期。     

管角螺不同组织同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺垂直板梯度凝胶电泳技术,对管角螺7种组织(外套膜、肌肉、肝脏、心脏、生殖腺和缠卵腺)的5种同工酶(EST、SOD、ME、MDH、LDH)进行了分析,结果表明:5种同工酶存在不同程度的组织特异性,SOD、EST、LDH在肝脏组织中有较高活性,而MDH、ME在心脏组织中活性较高。     

湛江地区光裸星虫的生殖细胞发育和生殖周期

采用活体观察和常规石蜡切片技术对湛江地区光裸星虫生殖周期、生殖细胞的发育及形态结构进行研究。结果表明：星虫雌雄异体，无肉眼可见生殖腺结构，原生殖细胞在体腔液中发育；雌性生殖细胞根据其卵膜的形成和卵黄积累情况可以分为4个发育阶段，小生长期、大生长期、成熟前期和成熟期；雄性生殖细胞也分为增殖期、生长期、成熟期和变态期4个阶段；成熟的生殖细胞经肾管排出体外。生殖季节为5～9月，其中7～8月为高峰期。     

军曹鱼不同组织5种同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳法对军曹鱼的几种组织 (脑、心肌、肾、肌肉、性腺、肝、血液、胰、脾 )的 5种同工酶 (LDH、MDH、ME、POD和EST)进行了分析 ,结果表明 :5种同工酶在军曹鱼中都具有明显的组织特异性 ,这些特异性与其组织特定生理功能相关。与其他硬骨鱼类相比 ,军曹鱼的酶谱简单得多 ,这可能与其种属多样性相关。     

月鳢不同组织中乳酸脱氢酶和酯酶同工酶的比较

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对月鳢十种组织中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和酯酶（ＥＳＴ）同工酶进行了比较研究,结果表明：月鳢组织内ＬＤＨ和ＥＳＴ具有明显的组织特异性,ＥＳＴ由２个座位编码,ＬＤＨ则由Ｌｄｈ－ａ、Ｌｄｈ－ｂ两个基因编码。     

月鳢不同组织中乳酸脱氢酶和酯酶同工酶的比较

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对月鳢十种组织中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和酯酶（ＥＳＴ）同工酶进行了比较研究,结果表明,月鳢组织内ＬＤ睡ＥＳＴ具有明显的组织特异性,ＥＳＴ由２个座位编码,ＬＤＨ则由Ｌｄｈ－ａ、Ｌｄｈ－ｂ全两个基因编码。     

方格星虫酶解物对小鼠皮肤创伤修复的作用

【目的】探究方格星虫酶解物促进伤口愈合的作用。【方法】将小鼠分为空白对照组、方格星虫酶解物组和云南白药组进行止血实验,并建立小鼠全皮层创伤模型。将方格星虫酶解物制成膏状,每天上药一次。于术后3、5、7 d分批各处死5只小鼠,固定7只用于拍照。术后观察创面愈合情况,测定伤口愈合率、炎症因子、转化生长因子-β1和创面羟脯氨酸含量等指标。【结果】相比于空白对照组,方格星虫酶解物组显著缩短止血时间,提高愈合率,缩短掉痂时间、创面宽度,调节炎症因子、转化生长因子-β1表达,促进胶原蛋白沉积,伤口愈合较好,残留疤痕不明显。【结论】方格星虫酶解物具有促进伤口愈合功效,其作用机制与止血、调节炎症因子、转化生长因子-β1水平、促进胶原蛋白沉积有密切联系。     

方格星虫多糖对小鼠免疫活性的影响

研究了方格星虫多糖对小鼠免疫功能的影响。结果表明:方格星虫粗多糖(CSG)能够对抗环磷酰胺引起的小鼠胸腺萎缩和脾萎缩,明显拮抗白细胞减少,对正常小鼠免疫器官没有明显的增重作用;对正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力有显著的增强作用。方格星虫多糖粗品(CSG)和精制多糖(SG1和SG2)能够促进小鼠脾淋巴细胞增殖,且能与ConA协同作用。     

饲料碳水化合物与蛋白质水平对光裸星虫稚虫生长及体壁营养成分的影响

【目的】探究不同碳水化合物与蛋白质水平配合饲料对光裸星虫(Sipunculus nudus)稚虫生长及体壁营养成分的影响。【方法】以碳水化合物/蛋白质质量分数分别为39.46%/20.67%(EG1组)、34.97%/24.02%(EG2组)、30.48%/27.37%(EG3组)、25.99%/30.72%(EG4组)和21.50%/34.07%(EG5组)的饲料,饲喂体质量为(2.45±0.40)g的光裸星虫稚虫12周,测定稚虫的生长指标及体壁一般营养成分及氨基酸组成。【结果】随着碳水化合物水平降低、蛋白质水平升高,各饲料组光裸星虫的增重率和特定生长率均呈先升后降的趋势,其中EG2组的增重率和特定生长率显著性高于其余4组(P<0.05);EG2组的存活率显著高于EG3组、EG5组(P<0.05),但与EG1组、EG4组差异不显著(P>0.05);不同碳水化合物蛋白质水平饲料会影响光裸星虫稚虫体壁的水分及其干物质的粗蛋白、粗脂肪、灰分、蛋氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸和精氨酸的含量(P<0.05),而各组的其他氨基酸含量、必需氨基酸总量、呈味氨基酸总量、氨基酸总量则差异不显著(P>0.05)。【结论】当饲料碳水化合物/蛋白质质量分数为34.97%/24.02%时,光裸星虫增重率和特定生长率最高,且不会影响其体壁的氨基酸总量、必需氨基酸和呈味氨基酸含量。     

Isozyme Analysis of Spotted Halibut Verasper variegatus Temminck et Schlegel

To investigate the tissue-specificities of isozymes and the genetic structure of wild spotted halibut ( Verasper variegatus) population, horizontal starch gel electrophoresis was performed on 45 individuals collected in part of the Yellow Sea. The performances of 17 isozymes in 8 kinds of tissues or organs were screened preliminarily in a TC-7.0 buffer system. The results showed that the screened isozymes displayed remarkable tissue-specificities. Finally, 14 enzymes (AAT, ADH, EST, GPI, G3PDH, IDHP, LAP, LDH, MDH, MPI, PGDH, PGM, SDH and SOD) and 4 kinds of tissues (eye, skeleton muscle, liver and heart) were selected for genetic analysis. Fourteen isozymes are encoded by 20 loci, and 9 of them are poly-morphic. The polymorphic loci are AAT-1*, GPI-2*, G3PDH*, IDHP-1*, LDH*, MPI*, PGM-1*, PGM-2* and SDH*, and the proportion of polymorphic loci is 0.450 0 (P0.99). The mean values of observed and expected heterozygosities are 0.027 8 and 0.026 5, respectively and the average effective number of alleles is 1.067 5.     

褐菖鲉同工酶的组织特异性及群体遗传结构

用聚丙烯酰胺垂直板不连续凝胶电泳法对湛江海域褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)心、肝、肾、性腺、肌肉、鳃、眼、脑等8种组织的12种同工酶(ADH、a-AMY、CAT、EST、GDH、LDH、MDH、ME、POD、PPO、SDH、SOD)进行分析。结果表明,12种同工酶均有明显的组织特异性。经筛选,对肝脏和眼的8种同工酶(ADH、EST、LDH、MDH、ME、POD、SDH、SOD)进行群体遗传结构分析,共记录了18个基因位点,其中呈多态性的基因位点有5个(Adh-1、Est-2、m-Pod-1、s-Pod-1、s-Sod-1),多态位点比例(P)为27.78%,平均有效等位基因数(Ae)为1.238 8,平均观测杂合度(Ho)值为0.1401。