同时测定牙鲆肌肉中DNA和RNA的简便方法

组织细胞中ＤＮＡ的含量是基本恒定的,但ＲＮＡ含量则随细胞中蛋白质代谢水平的不同发生很大变异,进一步的研究证实,ＲＮＡ／ＤＮＡ比值与鱼类体重及体长增长速率相关,因而在研究鱼类的生长时,一般要考察其组织中ＲＮＡ含量及ＲＮＡ／ＤＮＡ比值的变化,作为反映其蛋白质代谢及生长速率的生化指标。本文建立了一种可同时测定样品中ＤＮＡ及ＲＮＡ的简便方法。１材料与方法１．１仪器小型离心机、消化炉、水浴锅、７２２－型光栅分光光度计等。１．２肌肉中ＤＮＡ和ＲＮＡ的抽提１．２．１精确称取０．１ｇ左右冰冻保存的肌肉样品,铰碎…     

条斑紫菜质粒状DNA的提取与富集

以细胞为材料,用异硫氰酸胍一十二烷基肌氨酸钠作裂解液,在条斑紫菜总ＤＮＡ中直接提取到了质粒状ＤＮＡ,但其含量明显地低于高分子量的主带ＬＮＡ。总ＤＮＡ经Ｗｉｚａｒｄ树脂处理后,在低温洗 脱物的电泳图谱上质粒状ＤＮＡ带的亮度高于主带,质粒状ＤＮＡ得到了明显的富集。本文为条斑紫菜质粒状ＤＮＡ的研究提供了简便,有效的提取与富集方法。     

RAPD技术在龙须菜遗传多样性研究中的应用 Ⅰ总DNA的提取及RAPD反应条件的优化

比较两种从龙须菜中提取总ＤＮＡ的方法,这两种方法得到的染色体ＤＮＡ具有较好的完整性,从ＤＮＡ的产量、蛋白质含量等指标可以看出,ＣＴＡＢ法优于蛋白酶Ｋ法。实验对龙须菜ＲＡＰＤ反应条件进行了优化：在２５μＬ反应体系中,含有Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄＮＴＰ１００μｍｏｌ／Ｌ,总ＤＮＡ２５ｎｇ,引物０．２μｍｏｌ／Ｌ和Ｔａｑ酶１Ｕ,经９４℃变性１ｍｉｎ,３５℃退火１ｍｉｎ,７２℃延伸２ｍｉｎ,３５个循环,得到稳定的ＲＡＰＤ扩增图谱。     

检测cDNA文库克隆中插入片段大小的简易方法

在ｃＤＮＡ文库克隆的大规模测序之前 ,一般需对克隆中插入片段的大小进行检测。传统的检测方法是首先用煮沸法［１,２］或碱裂解法［１,３］提取质粒ＤＮＡ ,然后用限制性内切酶进行酶切分析。在对大量的克隆进行检测时 ,这种方法则显得十分烦琐、费时。Ｚｏｎ等［４］于１９８９年提出了一种基于ＰＣＲ技术的直接用于克隆检测的方法。与传统的酶切检测法相比 ,此种方法相对简单、快速得多。但是它仍然需要提取质粒ＤＮＡ ,而且实验成本较高。新近 ,Ｔａｒｉｇ［５］等对Ｚｏｎ等的方法进行了进一步的改进。改进后的方法不需要提取质粒Ｄ…     

大黄鱼高质量基因组DNA的简便提取方法

目前常用的分子标记技术如ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ、微卫星等都是以ＤＮＡ为研究对象 ,而高质量ＤＮＡ的简便快速提取是至关重要的 ［１］。大黄鱼 (Ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａｃｒｏ ｃｅａ（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ）)曾是我国著名的四大海洋渔业对象之一 ,也是目前闽浙两省重要的经济养殖品种。近年来养殖大黄鱼普遍出现生长缓慢、抗病能力弱、性成熟提早、个体小等生物学性状退化的现象［２］。为了从ＤＮＡ水平上研究大黄鱼遗传多样性 ,为养殖大黄鱼种质的改良和养殖业的健康持续发展提供依据 ,我们首先要从大黄鱼组织中提取基因组ＤＮＡ。…     

海胆纲动物天然活性物质研究概况

对已从海胆纲动物中分离到的几种生物活性物质在分离提取及生理药理活性方面的研究情况做一概要介绍。１多聚不饱和脂肪酸１．１提取制备方法多聚不饱和脂肪酸（ＰｌｏｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄＦａｔｔｙＡｃｉｄ,ＰＵＦＡ,又称ＨｉｇｈＰｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄＦａｔｔｙＡｃｉｄ,ＨＰＵＦＡ）系指含有多个双键的长链脂肪酸,主要有二十碳五烯酸（ＥｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃＡｃｉｄ,ＥＰＡ）、二十二碳六烯酸（Ｄｏ－ｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃＡｃｉｄ,ＤＨＡ）和花生四烯酸（ＡｒａｃｈｉｄｏｎｉｃＡＣｉｄ,ＡＡ…     

红藻真江离质粒的发现

于１９９２年４月－１９９３年４月，用液氮研磨－苯酚／氯仿抽提－异丙醇沉淀的方法提取青岛沿海产紫菜，真江离，龙须菜，海膜４种红藻的总ＤＮＡ；利用Ｈｏｅｃｈｓｔ－ＣｓＣｌ密度梯度超离心法将叶绿体ＤＮＡ与核ＤＮＡ分开。对抽取的叶绿体ＤＮＡ梯度组分电泳结果表明，真江离样品出现质凿的电泳条带。以透射电镜观察到闭合环状ＤＮＡ图像；分子杂交结果显示，真江离质粒与其叶绿体ＤＮＡ之间没有同源性，而与核ＤＡＮ之间有一     

RAPD技术及其在藻类学研究中的应用

近年来 ,分子标记技术在海洋生物研究领域中的应用取得了很大的发展 ,尤其是以ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）技术为核心的ＲＡＰＤ（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）标记方法在藻类学研究中得到了较广泛的应用。ＲＡＰＤ技术是由美国杜邦公司的Ｄｒ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ等和美国加利福尼亚生物研究所的Ｗｅｌｓｈ等于１９９０年几乎同时报道的一种ＤＮＡ分子标记技术。该技术一经出现 ,便以其简便 ,快速 ,高效和灵敏等特点引起广大生命科学工作者的极大兴趣。目前 ,已在生命科学的…     

紫菜总DNA酶切带型的发现与比较

在条斑紫菜与坛紫菜总ＤＮＡ酶切图谱上有明显的ＤＮＡ型带,且ＨａｅＩＩＩ酶发带型经ＥｃｏｒＩ、ＰｓｔＩ的酶切带型清晰。在ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔＩ及ＨａｅＩＩＩ三种酶切图谱上,两种紫菜的ＤＮＡ带型明显不同,且很容易发现条斑紫菜或坛紫菜特有的条带,总ＤＮＡ带型具有种的特异性。结果表明总ＤＮＡ带型是一种容易建立又稳定可靠的紫菜分子分类的新型标记。     

条斑紫菜高纯度总DNA及其质粒状DNA的提取

提取条斑紫菜高纯度总DNA及其质粒状DNA的新方法。先用海螺酶处理紫菜叶状体制备细胞,然后用SDS-蛋白酶K裂解细胞提取总DNA,再用玻璃粉浆(glassmilk)对其纯化,经纯化后的总DNA能被EcoRI,Dral与HaeⅢ等限制酶完全酶切,并在酶切图谱上形成明显的DNA带型。当用异硫氰酸胍一十二烷基肌氨酸钠裂解紫菜细胞时,在总DNA提取物中直接发现有一条质粒状DNA带(2.3Kb),即建立了一种极简便的质粒状DNA提取方法。