两种绿藻—长石莼和袋礁膜原生质体的制备、培养和融合的研究

原生质体是研究植物遗传工程的好材料。自从Cocking(1960)首次用酶解法从蕃茄根尖分离出大量原生质体以来,高等植物原生质体的研究已经开展得比较广泛,但由于技术上的原因,目前从原生质体诱导出完整植株的还只限于烟草、矮牵牛、石刁柏、油菜和马铃薯等十余种。而藻类方面的工作则报道甚少。Miroslav(1970)用蜗牛消化腺提取液处理尾丝藻(Uronema gigas)得到了原生质体。用含有葡萄糖和果胶的培养基培养,观察到了细胞壁的再生和细胞分裂。Rietema(1973)由枝丝藻(Derbesia tenuissima)挤压出原生质体,并得到了再生植株。 近年来,植物原生质体已被广泛地用来研究体细胞融合。Callson(1972)首次     

两种绿藻-长石莼和袋礁膜原生质体的制备、培养和融合的研究

原生质体是研究植物遗传工程的好材料。自从Cockingt(1960)首次用酶解法从蕃茄根尖分离出大量原生质体以来，高等植物原生质体的研究已经开展得比较广泛，但由于技术上的原因，目前从原生质体诱导出完整植株的还只限于烟草、矮牵牛、石刁柏，油菜和马铃薯等十余种。而藻类方面的工作则报道甚少。     

紫菜原生质体的纯系培育、诱变处理和种间细胞融合的研究

紫菜是国内外养殖最多的重要经济海藻之一。1982年唐延林首次用酶法分离出紫菜体细胞和原生质体,并培养获得再生植株,随后在国内外相继开展了紫菜单细胞和原生质体的分离工作。在短短的几年里,紫菜的基础和应用研究均取得明显的进     

紫菜营养细胞的酶法分离和在水产养殖中的应用

紫菜是国内外养殖最多的重要经济海藻之一。它的养殖包括果孢子采苗、丝状体培养、壳孢子采苗和海上养殖等过程。利用上述采苗方法,在室内培育丝状体的时间长达半年之久,技术操作复杂,需要进行温度、光照的控制和施肥管理等,也容易发生病害。 近年来,用酶学方法分离紫菜细胞,进行细胞和原生质体的培养,并且都获得了再生植株。为了使生物技术应用于紫菜栽培业,我们     

裙带菜原生质体的分离和培养

本文以裙带菜(Undaria pinnatifida(Harv.)Suringar)为材料,进行原生质体分离和培养研究。取得以下结果: 1、使用海螺酶(sea snail enzymes)和纤维素酶(cellulase,Onozuka R-10),酶解裙带菜细胞壁,在一定的条件下,能够大量地分离成活的裙带菜原生质体。 2、实验表明,氯化钠可作为分离裙带菜原生质体研究中的一种理想的渗透刑。 3、荧光增白剂染色镜检法可作为鉴定裙带菜原生质体的一种辅助方法,并适用于原生质体再生壁的观察。 4、光照(2000—2500Lux)能促使原生质体再生细胞壁,含有蔗糖(W/V,1％)的培养液有助于原生质体再生细胞壁。 5、分离的裙带菜原生质体,经培养,已能长成幼体。     

坛紫菜原生质体的超微结构观察

在细胞与原生质体的分离培养与融合的研究中,利用电子显微镜观察高等植物细胞去壁情况、原生质体再生壁的形成过程以及原生质体融合后细胞内细胞器的变化已经是比较普遍采用的手段。但在大型海藻细胞分离与培养方面的研究工作中,利用这一手段进行研究的并不多见。 我们在研究Ⅰ中曾经利用海螺酶解离坛紫菜的营养细胞并成功地培养成紫菜叶状体,但是解离成单离细胞去壁情况如何,当时     

复合酶对卡德藻溶壁效果的研究

早在１８９２年 ,Ｋｌｅｒｃｋｅｒ就用机械法从藻类中分离到原生质体。该法靠手工操作 ,难度非常大 ,原生质体的得率非常少 ,费时费力。１９６０年 ,英国Ｃｏｏｋｉｎｇ首先采用酶解法从番茄幼苗根尖中的细胞用纤维素酶把原生质体分离出来 ,从而开创了酶法大量获得原生质体的新时期。由于此法的创立 ,才使原生质体培养、融合、转化等的一系列研究得到很大的发展。尽管该技术被应用于陆生植物已有很长时间 ,但由于海藻多样独特的细胞壁组成和结构 ,其应用仍处于发展阶段。海洋微藻类因其结构简单和易于培养等特点 ,成为原生质体制备、细胞融…     

角叉菜(Chondrus ocellatus Holm)原生质体分离、培养与再生的研究

从角叉菜(Chondrus ocellatus Holm)的孢子体和雌配子体中,分离了大量的成活原生质体。分离的最适条件为:纤维素酶3％,粉红鲍鱼酶8％,山梨醇1.2mol/dm~3,pH6.0,温度为15℃。细胞壁的完全解离,已用荧光增白剂的染色不着色和原生质体在低渗溶液中的易碎性证实。培养后再生的细胞,经均等分裂,随后发育成实心球状体;或出芽后不等分裂,发育成丝状体和愈伤组织状细胞团。在PES培养基中,经30～40d培养,部分球状体和愈伤组织状细胞团分化出完整植株,但丝状体未能分化。低浓度的IAA、6—FA和C—751对球状体和愈伤组织状细胞团的生长和分化都有促进作用。由原生质体培养获得完整的再生植株,这在真红藻纲(Florideophyceae)中为首例报道。     

紫菜营养细胞和原生质体的分离和培养

六十年代初，Cocking(1960)(1)采用酶法大量分离植物原生质体获得成功。二十多年来，植物单细胞和原生质体的分离、培养的研究，得到了广泛的开展，并取得很大成就。这些成就的取得，为植物遗传育种和遗传学理论的研究开辟了广阔前景。     

紫菜营养细胞和原生质体的分离和培养

前言 六十年代初,Cocking(1960)采用酶法大量分离植物原生质体获得成功。二十多年来,植物单细胞和原生质体的分离、培养的研究,得到了广泛的开展,并取得很大成就。这些成就的取得,为植物遗传育种和遗传学理论的研究开辟了广阔前景。 但是,大型藻类的单细胞和原生质体的分离和培养工作开展的比较少。关于单细胞的分离工作,仅见到几例,主要用机械的方法分离单细胞并进行培养。用酶     

长石莼（缘管浒苔）（Ulva linza）原生质体再生与分化发育初步研究

采用细胞酶解技术获得长石莼（缘管浒苔）原生质体,再通过细胞培养观察原生质体再生以及各种分化发育途径。结果表明,长石莼（缘管浒苔）主要存在3种分化发育途径：1）部分原生质体可直接分裂形成有假根或无假根得单细胞苗。2）部分原生质体分裂成规则细胞团或不规则细胞团,最后形成苗簇。3）部分原生质体可发育为孢子囊／配子囊,其中部分...     

钝顶螺旋藻部分原生质体及单细胞的制备与培养

于1992年1月-1994年4月，进行超声波处理方法制备钝顶螺旋藻部分原生质体以作为基因工程受体，以及制备单细胞用于固体平板克隆化培养的研究。研究结果表明：超声波以20kHz频率、15W功率作用30s，可使藻丝体断裂成15．0±1．6个细胞长度；延长作用时间，至2－6个细胞长度时，细胞壁结构遭到破坏，形成部分原生质体；继续作用，可形成少量原生质体和大量单细胞。断裂藻丝体、部分原生质体、单细胞以及原生质体均可涂布于固体培养基上再生或生长。以一定密度涂布单细胞与原生质体，能够形成彼此分开的单个克隆，可用于筛选及遗传分析。本文提供了一种节省溶菌酶的制备螺旋藻透性体的方法，超声波作用利于外源基因的导入，而涂布培养利于进一步的筛选和形成克隆。     

微拟球藻原生质体制备与再生

综合考虑酶混合液处理时间和初始细胞密度两个因素,选取终浓度为4%半纤维素酶和2%崩溃酶的酶混合液对一株海洋经济微藻——微拟球藻(Nannochloropsis oculata)进行原生质体的制备与再生,Calcofluor White染料染色可在荧光显微镜下观察到完整的原生质体细胞。实验结果表明:同一初始密度藻细胞酶处理1～3 h制备率较高;酶处理相同时间较高初始密度(2×107～3×107cells/mL)的藻细胞制备率较高,并且原生质体在再生培养基上可再生,生长趋势与野生型细胞一致。考虑到酶处理时间过长或者密度过大会对原生质体的再生产生影响,本实验选择最适酶处理时间为1h,初始细胞密度为2×107cells/mL。     

盐沼水-沉积物-植物界面流速研究综述

近二十多年,盐沼水-沉积物-植物界面流速的研究取得了很大的进展。本文拟对盐沼水-沉积物-植物界面的流速分布、变化和研究状况进行一定的归纳,并提出可能的研究方向和途径。本文内容包括通过野外观测和室内模拟定量分析研究盐沼和不同植被状况下(不同植株高度、密度、不同种类植株等)流速变化规律,及其流速变化原因。     

盐沼水-沉积物-植物界面流速研究进展

综述了近20多年来盐沼水-沉积物-植物界面流速的研究进展。在此基础上,拟对盐沼水-沉积物-植物界面的流速分布、变化和研究状况进行一定的归纳,并提出可能的研究方向和途径。内容包括通过野外观测和室内模拟定量分析研究盐沼和不同植被状况下(不同植株高度、密度、不同种类植株等)流速变化规律及其流速变化原因。本领域研究有待收集大量数据后进一步深入和系统地探讨。     

海螺酶解壁作用的研究

一、前言 研究和分离植物细胞的亚细胞成分，进行植物原生质体培养以及通过细胞融合、培育新杂交品种，必先除掉包裹于细胞周围的障壁。目前，用微生物提取酶分解胞壁，已在陆生植物中获得成功，如日本的onazaka R-10酶和我国植生所的EA3-867纤维素酶。     

球形红假单胞菌和荚膜红假单胞菌的原生质体融合

选择一株能利用无机硫化物的球形红假单胞菌 (丙酸钠 -丙露醇 )与荚膜红假单胞菌 (甘露醇 -丙酸钠 )进行种间原生质体融合。探讨了溶菌酶浓度 ,PEG浓度等对原生质体形成、再生及融合的影响。在最佳条件下原生质体融合率为 3.0 2× 10 -5。用间接选择法 ,在高渗选择培养基上选出再生的融合子 ,经过在二种选择培养基上交替连续传代十次 ,获得既可利用丙酸钠为唯一碳源又可以甘露醇为唯一碳源而生长的遗传稳定的融合株。融合子菌株对硫化物的耐受能力超过两亲本菌株 ,在 Na2 S浓度为 0 .5～ 1.0 g/ L的培养基上生长良好 ,因此在水质净化中具有潜在的应用价值。     

褐藻酸降解菌感染海带过程中几种酶的作用比较

采用植物单细胞和原生质体游离的方法,研究了5株褐藻酸降解菌感染过程中海带细胞壁的组成成分——褐藻酸的变化。结果表明,海带在5株褐藻酸降解菌感染的初期(前3 d),褐藻酸酶对其单细胞和原生质体的游离率均显著降低,而且随着感染时间的延长,游离率的下降越加明显。3 d过后,随着感染的继续进行,单细胞和原生质体的游离率变化不再明显。表明海带细胞壁组成对褐藻酸降解菌感染发生了响应性变化,而这种变化仅仅发生在褐藻酸降解菌感染的早期阶段。研究结果进一步显示,褐藻酸降解菌感染过程中海带细胞壁组成的变化主要体现在褐藻酸的变化上。     

海带雌性原生质体的分离与培养

于1993年1月 - 1993年4月，为了制备遗传性纯一的基因工程受体，用酶法从海带雌配子体单性生殖系分离雌性单倍体原生质体。从皱纹盘鲍消化腺及消化器官提取出鲍酶，在25°C下、1％（W／V）的鲍酶与2％（W／V）的纤维素酶（Onozuka R－10）合用能有效解离单细胞和原生质体。海带雌性原生质体经2d培养再生了细胞壁。     

海螺酶解壁作用的研究

研究和分离植物细胞的亚细胞成分,进行植物原生质体培养以及通过细胞融合、培育新杂交品种,必先除掉包裹于细胞周围的障壁。目前,用微生物提取酶分解胞壁,已在陆生植物中获得成功,如日本的Onazaka R-10。酶和我国植生所的EA_3-867纤维素酶。生物物理所从陆生蜗牛提取的蜗牛酶,具有分解酵母胞壁的能力。用EA_3-867纤维