一株海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)生产Macrolactin B的发酵条件优化

从浙江台州近海上层海水中分离到一株可产Macrolactin类大环内酯抗生素的海洋细菌,经形态特征分析及16S rRNA测序比对,鉴定并将其命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ESB-2。运用Minitab软件,通过Plackett-Burman和Box-Behnken实验及响应面分析对该菌生产Macrolactin B的发酵条件进行优化,得到该菌生产Macrolactin B的最佳发酵条件为：葡萄糖17.0mg/L,蛋白胨5mg/L,酵母粉1mg/L,FePO4 0.01mg/L,初始pH 6.0,培养温度27.2℃,接种量5%,装液量57.6%,培养时间4d,在优化发酵条件下,Macrolactin B的最高产量达到13.6μg/ ml,比优化前提高了8倍,为该活性物质药源问题的解决打下了良好基础。     

产重组别藻蓝蛋白类荧光蛋白的重组大肠杆菌发酵条件的优化

对重组别藻蓝蛋白类荧光蛋白基因工程菌在装有150 mL液体培养基的250 mL摇瓶中的发酵条件进行优化.对起始pH值、接种量、诱导起始时间、诱导温度和时长以及IPTG浓度对重组荧光蛋白表达量进行了分析.结果表明,在装有150 mL液体培养基的250 mL摇瓶中,在起始pH值为7.5,6%接种量,培养温度为37℃,培养时长为3～5 h,诱导温度为22℃,IPTG浓度为0.2 mmol/L,诱导时长为7～8 h的条件下发酵重组别藻蓝蛋白类荧光蛋白,其表达量最高.     

乳酸链球菌L318的培养及其对海洋弧菌的抑制作用

以海洋弧菌作为检测菌，采用平板抑菌圈检测法，对发酵上清液的抑菌性质和在不同培养条件下，包括碳源、氮源、初始培养基pH值、温度、接种量和装液量等，乳酸链球菌L318的生长和对海洋弧菌的抑制作用进行研究。结果表明，含有乳链菌肽的发酵上清液经稀释2～5倍后，具有较强的抑菌活性；乳链菌肽在酸性条件下比在碱性条件下稳定。采用蔗糖或葡萄糖碳源，酵母膏、蛋白胨和牛肉膏为复合氮源，能够获得菌体的最佳生长和最佳的抑菌活性，最适的对海洋弧菌的抑制条件为温度30℃，接种量2%～4%，装液量100ml。初始pH值对海洋弧菌的抑制作用不明显。     

一株海洋芽孢杆菌B09的筛选及其发酵条件优化研究

从海水养殖环境中筛选出一株具有较强抗菌活性的芽孢杆菌B09,并对其进行抗菌活性研究和发酵条件优化。结果显示B09对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鳗弧菌等致病菌有较强抑制作用,其最佳发酵条件如下:KB培养基(蛋白胨20g,甘油10mL,K2HPO41.5g,MgSO4.7H2O1.5g,水1000mL),发酵温度32℃,发酵起始pH为7,发酵时间48h,250mL的三角瓶装量100mL,接种量1%。     

产甲壳素酶菌株HD001的发酵条件研究及酶的分离纯化

通过对降解甲壳素菌株 HD001 的发酵条件研究,确定了其产甲壳素酶最适培养基组分为 ( w/v ):( NH4 ) 2SO4 2.0%, NaCl 0.5%, K2HPO4 0.07%, KH2P O4 0.03%, MgSO4·7H2O 0.05% 以及葡萄糖 0.1%、酵母粉 0.3% 和胶体甲壳素 1.5%;最适产酶培养条件为:培养基起始 pH 值 6.0,培养温度 30 ℃,培养时间 120 h,发酵液酶活力达 376.2 U/mL.采用硫酸铵分级盐析、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephacryl S-100 凝胶过滤层析对该酶进行纯化后,SDS-PAGE电泳显示单一条带,其相对分子质量约为 85.7 kDa.     

一种新型功能性海带豆酱的制备工艺研究

为了探究一种新型纳豆菌发酵食品的最佳工艺,利用纳豆菌发酵大豆和海带,以发酵物中游离氨基酸态氮含量和纳豆激酶活性为评价指标,通过单因素试验和正交试验确定最佳发酵条件。结果表明,发酵温度42℃、发酵时间54 h、接种量1%、料水比(m/v)1︰4、配料比(大豆︰海带)2︰1时发酵产物中游离氨基酸态氮含量最高(0.041%);发酵温度40℃、发酵时间48 h、接种量3%、料水比(m/V)1︰2,配料比(大豆︰海带)3︰1时发酵产物中纳豆激酶活性最高(可达1426.53IU/g)。     

红树林沉积物来源链霉菌HA6菌株发酵条件的优化

HA6菌株是分离自红树林沉积物中具有强抗菌活性的链霉菌．为提高其抗菌活性物质的产量,通过单因子试验及正交试验法对其包括发酵培养基的组成、接种量、通气量和发酵时间等发酵条件进行优化．研究表明其最佳摇瓶发酵培养基配方为：麦芽提取物质量为2．00g、可溶性淀粉质量为3．00g、豆饼粉质量为2．00g、（NH4）：SO。质量为1．00g、NaCl质量为3．00g、CaC03质量为0．50g、蒸馏水体积为100cm^3;最优发酵条件为：500em。摇瓶装液体积为150em。,接种量为8％,培养温度为28℃,初始pH为7．5,转速为200r／rain,培养时间为5d．     

广西钦州湾红树林抗菌活性菌株Erwinia sp. 5-8的筛选及发酵条件的优化

以金黄色葡萄球菌为指示菌,采用琼脂扩散法从国家海洋局海洋生物活性物质重点实验室广西钦州湾红树林微生物资源库中筛选获得一株具有明显抑菌效果的菌株5-8,对该菌株进行了分子鉴定与系统发育分析。结果表明,此菌为欧文氏菌属(Erwinia)。通过单因子试验对其发酵条件进行了优化,优化后发酵条件为:最佳氮源为蛋白胨,最佳碳源为葡萄糖,发酵培养基初始pH值为8.0,发酵温度为25℃,盐度为1.5,摇瓶装液量30%,接种量为1%(V种子液∶V培养液=1∶100)。     

抑制黄曲霉毒素的深海环状芽胞杆菌发酵条件优化

环状芽胞杆菌(Bacillus circulans)菌株FA13在M2培养基中的发酵无细胞上清液对寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)突变菌株NFRI-95菌丝生长和黄曲霉毒素的产生表现出明显的抑制作用。为了最大限度地提高活性物质的产量,本研究对从南大西洋深海沉积物中分离到的环状芽胞杆菌菌株FA13的发酵条件进行了均匀设计发酵优化。优化后,菌株FA13的发酵液10倍稀释液对寄生曲霉突变菌株NFRI-95的菌丝生长抑制率从10.98%提高到70.57%,黄曲霉毒素产生抑制率从41.43%提高到100.00%;对应的发酵条件为发酵温度38.70 ℃,接种量6.00%,海水体积占比0.00%,培养基pH 8.71,培养时间6 d。     

印尼热泉菌Bacillus sp. BI-3产琼胶酶的发酵条件优化

采用响应面法对1株高产琼胶酶的印度尼西亚热泉菌Bacillus sp. BI-3的发酵条件进行优化。首先以温度、pH、不同碳源、不同氮源、不同金属离子及接种量作为唯一变量进行单因素实验, 筛选出对酶活有显著影响的单因素取值范围; 参考单因素实验结果, 采用Plackett-Burman实验设计筛选出影响酶活主要因素, 再利用Box-Behnken设计及响应面分析法进行回归分析以确定最佳发酵条件。结果表明, D-甘露糖、氯化锶和氯化钙与酶活存在着显著的相关性, 通过求解回归方程得到Bacillus sp. BI-3的发酵条件系统优化的结果为: 酵母粉0.3%、D-甘露糖0.66%、蛋白胨0.6%、氯化钙7.21mmol/L、氯化锶6.00mmol/L、氯化钠添加量6‰、培养温度为55℃、接种量1%、初始pH 6.0, 优化后发酵上清液的酶活达到6.0U/mL, 比优化前提高了2.4倍。     

中国对虾幼体致病菌哈维氏弧菌的分离及其生物学特性研究

于1996年4—5月,在青岛丰城地区一些对虾育苗场发生大规模爆发性传染病,主要感染中国对虾幼体,尤其是蚤状幼体。死亡率高达80％以上。从自然发病及人工感染患病濒死中国对虾幼体中分离出38株细菌,研究其形态特征,生理、生化特性及对中国对虾幼体的致病性。结果表明,38株分离物均为革兰氏阴性杆菌,菌体为杆状或短杆状,极生单鞭毛运动,不发光,氧化酶呈阳性,发酵葡萄糖产酸,TCBS平板上生长,菌落呈黄色或绿色,对弧菌抑制剂0／129（150g／ml）敏感,此均为弧菌属的典型特征,属于弧菌。其中26株细菌被归为同一类群,参照伯杰氏细菌学鉴定手册（1994年,第9版）鉴定表明,该菌同哈维氏弧菌（Vibrioharveyi）最为接近;另外,Biolog系统鉴定表明也为哈维氏弧菌,因此定名为哈维氏弧菌。利用浸泡感染法以2．5×103—2.5×107cfu／ml浓度的细菌感染不同发育时期（无节幼体期、蚤状期、糠虾期和仔虾期）的中国对虾幼体。结果表明,该病原菌主要感染中国对虾幼体的无节幼体晚期、蚤状期和糠虾早期并导致其大量死亡,而在仔虾期感染死亡率较低,并且2．5×104cfu／ml以上浓度的病原菌即可导致蚤状幼体严重感染死亡,由此可见,所分离的致病菌对中国对虾蚤状期幼体具有较强的致病力。人工感染试验结果     

墨西哥湾扇贝的引种和子一代苗种培育

为将美国佛罗里达州产的墨西哥湾扇贝作为我国南海水域的养殖对象，于１９９１年１２月将壳高２．０－４．５ｍｍ的２２２个稚贝置于保温瓶内，控温在１５－１６℃，并每隔１－１．５ｈ充气数分钟，经３ｄ长途运输到青岛，稚贝全部成活。在室内控制条件下，培育至６月下旬，平均壳高达３３ｍｍ，性腺成熟，并采卵成功地培育出子一代。从子一代在海区养成的亲贝采卵分别在青岛，广西与福建培育出子二代。表明，从繁殖，生长等生物学判     

环境因子对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)粘附大黄鱼(Pseudosciaena crocea)表皮粘液影响的研究

采用3H-TdR同位素示踪方法研究了环境因子对溶藻弧菌对大黄鱼表皮粘液粘附作用的影响。试验结果表明,溶藻弧菌能很好地粘附于大黄鱼表皮粘液,其粘附量在菌浓度不超过6.52×108cfu/ml情况下随菌浓度的升高而升高;粘附量在25℃下孵育180min趋于饱和,在180min以内与孵育时间呈正相关关系;粘附作用在温度25—30℃、pH值偏酸、盐度35条件下较强;在无Na (盐度为0)时,无粘附作用;Ca2 能显著加强溶藻弧菌的粘附作用,而Mg2 作用不明显。这些结果表明,溶藻弧菌对大黄鱼表皮粘液有较强的粘附作用,其粘附作用受温度、盐度、pH值等环境因子的影响。     

日本沼虾生理生态学研究

于１９９２年９－１０月对采自上海市的日本沼虾的代谢进行实验研究。结果表明，１温度和体重对日本沼虾的耗氧率，排氨率都有明显的影响；２。日本沼虾尿素氮的排泄量约点总排泄氮量的３８％；３。在小于和大于１．５ｇ的日本沼虾代谢底物中，蛋白质，糖和脂肪提供的能量比分别为１０．４：３９．３：５０．３和５．２：４１．５：５３．３：４。在１０，１５，２０和２５℃，日本沼虾的平均静止能耗量为１．６，２．２，３．２和５     

Microbiological Studies Relevant to a Lobster Introduction into Fatty Basin,British Columbia

Studies in marine microbiology relevant to the cultivation of lobster in Fatty Basin were made. Biomass of bacteria and allied microorganisms in whole seawater column of the basin was very small (2×10⁴ gC), but a large biomass was found in the sediments (3×10⁵ gC). The decomposition of chitin occurred chiefly in the sediments. The rate of decomposition (500 g/day) was approximately half of the rate of production. However, the remaining production was considered not to be involved in the chitin cycle of the basin. This hypothesis was supported by the results of the analysis of the budget of organic matter in the area. Shell disease of lobster caused by chitinoclastic bacteria was detected, although it was not serious. A destructive yeast parasite of crustaceans,Metschnikowia, was collected only from a crab in the basin. This report is dedicated to Professor KenSugawara for his 70 years old anniversary.     

Rates of chitin degradation in an estuarine environment

In vitro chitin degradation rates in pure cultures and in mixed natural cultures have been determined and compared with those of other workers.In situ studies in the salt marsh shrimp nursery grounds along the southeastern Louisiana coast showed that chitin degradation was most rapid (118 mg d^–1 g^–1 chitin) when water temperature averaged 30C. Maximum degradation rates were noted at the water-sediment interface and when substrate particles were reduced in size (0.25 cm²). Of the several types of chitin tested, including treated and untreated, native chitin was most rapidly solubilized. Microbial populations on this substrate developed more rapidly, suggesting that chitin degradationin situ is a function of initial colonization. This is further supported by the observation that degradation rates were most rapid when total bacteria, chitinoclastic bacteria, and the ratio of chitinoclasts to total bacterial biomass (15.6 %) was greatest.     

掺铝氧化锌厚膜制备及其对三甲胺和海产品鲜度的敏感性

用烧结法制备掺铝氧化锌厚膜，把氧化锌粉末分别同０％，１％，３％，５％的Ａｌ２Ｏ３粉末机械研磨混合均匀，在１１００℃下烧３ｈ，再同粘合剂，有机溶剂混合制成浆料，用刮刀法在氧化铝基片上浆料制成膜，在１００℃下烘干后再经１１００℃烧结２ｈ。膜的灵敏度的测量方法是将膜放在玻璃管内加热到测量温度，测量膜暴露在一定浓度ＴＭＡ气体或由牡蛎放出的气体时电阻值的变化。测量温度为２００，２５０，３００℃和４００℃，Ｔ     

日粮水平对黑鲷幼鱼氮收支的影响

于１９９４年８－１１月进行４次黑鲷幼鱼摄食－生长实验,平均水温２６．８,２４．４,２０．１和１４．８℃,生次实验分４个日粮水平,分别对单位体重日摄取、粪便氮、氮排泄和氮生长进行测定和估计。     

长蛸(Octopus minor)初孵幼体培育与生长研究

采用光滑河蓝蛤和菲律宾蛤仔两种双壳贝类培养长蛸幼体,分析其生长和存活情况。结果显示,长蛸初孵幼体无外卵黄,体表光滑,第一对腕(最长腕)约为胴长的2.9倍,腕吸盘两列,第1—4对腕平均吸盘数(n=3)分别为66±4.60、55±3.76、43±4.59和41±3.82;1—15d幼体投喂的是光滑河蓝蛤(壳长15.4—20.3mm),之后投喂菲律宾蛤仔(壳长33.2—39.3mm);幼体30d—70d总成活率由80.99%降至54.65%;整个培育过程中,幼体生长率与饵料效率呈极显著线性回归关系(P0.01),y=1.452x-2.731(R2=0.865);1—80d胴长/全长比增幅高于腕长/全长,表明胴体增长快于腕的增长;各腕吸盘数变化不显著;幼体鲜重与培养天数呈指数函数关系,Wt=0.301e0.010t(R2=0.854,P0.01);长蛸幼体最终生长率为122.05%,平均生长率为9.97%/10d。     

基于环境因子的东南太平洋茎柔鱼资源补充量预报模型研究

东南太平洋茎柔鱼(Dosidicus gigas)是短生命周期种类,其资源量极易受到海洋环境变化的影响。根据2003—2012年我国鱿钓船在东南太平洋的生产统计数据,以及茎柔鱼栖息地的海表温度(SST)、海面高度(SSH)、叶绿素a浓度(chl a)数据,利用相关性分析法分析茎柔鱼资源丰度和补充量(以单位捕捞努力量渔获量为指标,t/d)与栖息海域20°S—20°N、110°W—70°W的SST、SSH、chl a浓度的相关性,获取相关系数大的关键海区位置,同时加入茎柔鱼产卵场、索饵场最适表层水温范围占总面积的比例(分别用PS、PF表示)两个参数,建立三种基于主要环境因子的误差反向传播(EBP)神经网络资源补充量预报模型,进行了比较。结果表明:茎柔鱼资源丰度与SST、SSH、chl a浓度的相关系数最大值海域为7月份的Point1(13°N,102°W)海区、9月份的Point3(11°N,102°W)海区和3月份的Point5(8°S,107°W)海区;资源补充量与SST、SSH、chl a浓度的相关系数最大值海域为6月份的Point2(8°N,103.5°W)海区、2月份的Point4(12°N,97.5°W)海区和10月份的Point6(10°S,93.5°W)海区。EBP神经网络预报模型结果认为:基于产卵环境关键影响因子的方案2(以Point2的SST、Point4的SSH、Point6的chl a浓度、PS作为模型输入因子)和基于全部环境关键影响因子的方案3(以Point1与Point2的SST、Point3与Point4的SSH、Point5与Point6的chl a浓度、PS、PF作为模型输入因子)的两种神经网络预报模型均方误差较小,其准确率可达90%左右。