长毛对虾Penaeus Penicillatus Alcock亲虾的再利用

本文报导了无论海捕,还是人工培育的越冬亲虾首次产卵后可通过切除眼柄来促进其性腺再发育、成熟并产卵。室内试验表明,切除眼柄后最快3天即成熟、产卵。人工越冬虾平均产卵量为4.6万,孵化率高于70％。在室内水泥池中,不切除眼柄诱导性成熟相当困难,而在室外土池中无须经切除眼柄处理,性腺也能良好发育。     

长毛对虾杆状病毒病研究

近年我国沿海各省市养殖对虾发生了特大的暴发性流行病,造成了极大的损失.本文报道1993年长毛对虾(Penaeus penicillatus Alcock)暴发性流行病的症状与危害,在病虾中肠、肝胰腺上皮细胞的细胞核和细胞质中以及腹肌纤维间质细胞质等组织中发现了大量的无包涵体的具有囊膜的C亚群杆状病毒,描述了该病毒的分布和形态特征及其引起宿主细胞的主要病理变化等,而正常虾组织无这些情况,为一类新的病毒病.     

长毛对虾酸性磷酸酶功能基团的研究(Ⅰ)

采用某些化学修饰剂修饰长毛对虾（Penaeuspenicillatus）酸性磷酸酶的活性功能基团。结果表明，精氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基是酶活性功能基团，当酶活力下降时，伴随着紫外吸收光谱及荧光发射光谱的变化，显示酶活力与构系密切相关健康虾酶对修饰剂的敏感性大于病虾酶。     

长毛对虾酸性磷酸酶功能基团的研究(Ⅱ)

用化学修饰剂pCMB、NBS、K试剂修饰长毛对虾Penaeuspenicilla－tusAlcock酸性磷酸酶（ACPase，EC3．1．3．2），在修饰剂作用下，酶活力明显下降，健康虾酶对修饰剂的敏感性（NBS除外）大都稍大于病虾酶。修饰酶的紫外280um吸收光谱以及荧光340um发射光谱的变化，表明酶活力下降的同时酶构象也产生相应的变化。结果表明，酶分子的半胱氨酸残基、色氨酸残基以及门冬氨酸、谷氨酸β或γ验基与酶活力有关，是酶的催化功能基团。     

长毛对虾酸性磷酸酶功能基因的研究（I）

采用某些化学修饰剂修饰长毛对虾酸性磷酸酶的活性功能基因。结果表明，精氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基是酶活性功能基团，当酶活力下降时，伴随着紫外吸收光谱及荧光发射光谱的变化，显示酶活力与构象密切相关。健康虾酶对修饰剂的敏感性大于病虾酶。     

大亚湾日本对虾放流技术和增殖效果研究

１９９２年至１９９４年在大亚湾开展了日本对虾Ｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ的放流增殖研究,以探讨恢复业已衰退资源的可行性,标志放流体长５３－１０９ｍｍ的日本对虾１１１８８尾,生产性放流体长２０－４１ｍｍ的日本对虾苗６４０万尾,放流增殖效果明显,标志放流的回捕率为２．９１％,生产性放流的回捕率为９．３％,大亚湾内放流的日本对虾,不作季节性远距离洄游,只作季节性短距离的浅水－深水区移动。     

中国对虾、墨吉对虾和长毛对虾仔虾的发育比较研究

中国海域已报道的约90种对虾中,半数具有经济价值。其中中国对虾、墨吉对虾和长毛对虾无论在捕捞还是在养殖业上都具有十分重要的地位。由于3种虾的形态非常相近,特别是在早期生活史阶段,它们的幼体和仔虾很难区分,因而给对虾种群补充、预报和其它有关研究造成困难。尤其在热带海域,对虾生殖季节重叠,幼体和仔虾的鉴别更加重要,各期仔虾的数量统计需以严格的形态鉴别作为依据。作者对三种对虾的幼体的形态,区别已有专文报道(Liu and Liu,1994)。本文深入细致地研究了中国对虾、墨吉对虾和长毛对虾仔虾的发育形态学,并进行了比较,使3种对虾的仔虾得以区别,并为今后的对虾生态学研究及资源管理奠定基础,提供依据。     

黄海中部沿岸放流增殖对虾生长特性初步研究

黄海中部沿岸(北起成山高角,南至岚山头,亦称山东南部沿岸)放流增殖对虾的体长与体重关系式:W=6.0195×10-6L3.1258;其生长过程可用Von Bertalanffy生长方程表达:L_t=200.43[1-e-0.15(t-2.50)],W_t=94.41[1-e-0.15(t-2.50)]3.1258;其体重生长拐点分布在8月21日前后,拐点前后两个旬为其生长最快阶段;雌雄对虾个体生长差异明显,雄虾生长较雌虾提前结束.雌虾生长方程为L_t=213.55[1-e-0.16(t-2.90)],W_t=113.43[1-e-0.16(t-2.90)]3.1041雄虾生长方程为L_t=178.31[1-e-0.15(t-1.80)],W_t=66.23(1-e-0.15(t-1.80)]3.2384;受放流增殖数量抑制,个体变小,生长减慢,拐点提前.生长参数L_∞,W_∞,k,kL_∞和bkW_∞均因放流数量的增加而减小;生长速度与放流数量间呈指数函数负相关关系,相关系数为-0.999.关系式为kL_∞=40.75×0.9588N.     

几种药物对长毛对虾受精卵孵化率的影响

本文试验了８种药物对长毛对虾受精卵孵化率的影响，结果表明，低剂量药物对受精卵的孵化有显著的促进作用，而高剂量药物则有显著的抑制作用。     

长毛明对虾野生群体的杂合性研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,研究了长毛明对虾（Fenneropenaeus penicillatus）9个野生群体杂合子缺乏及过量情况;测定了8个酶系统,共检测到15个酶位点和32个等位基因．有7个多态位点,它们是Me-1、Me-2、Mdh-2、Aat-1、Sod-2、Est-1、Amy-1位点,在这些位点有2～5个等位基因．结果表明,在长毛明对虾9个群体的全部多态位点中,共有6个位点符合哈温平衡（P〉0．05）,30个位点偏离哈温平衡（p〈0．05）;除宁德群体外,其他8个群体中共有13个多态位点表现为杂合子缺失,结合每个群体中各个多态位点的期望杂合度与观察杂合度,认为导致杂合子缺乏的主要原因可能是种群内交、自然选择、Wahland效应、哑等位基因等．另外,在本研究中共有23个位点表现为杂合子过剩（F〈0）,且在长毛明对虾9个群体中均有出现,从而认为长毛明对虾的种质资源较好．     

转录组数据的大菱鲆(Scophthalmus maximus) SNP标记开发及多态性分析

大菱鲆(Scophthalmus maximus)是最具商业价值和养殖前途的海水鱼类之一, 雌雄间生长有一定的差异。其高通量雌雄转录组测序的完成为大规模鉴定和开发SNP标记提供了参考序列。本研究基于大菱鲆雌雄转录组测序数据, 选择其中45个SNP位点, 设计引物63组, 其中21个位点(46.7%)应用小片段高分辨率熔解曲线(HRM)技术分型成功。对其进行多态性检测, 21个位点均具有二个单倍型。观测杂合度Ho的分布范围为0.256—1.000, 期望杂合度He的范围为0.276—0.518, 19个位点符合Hardy-Weinberg平衡。14个SNP位点位于基因编码区, 其中3个属于非同义突变。含有这些SNP位点的基因大多与信号转导和转录翻译相关。本研究结果表明, 高通量转录组测序和小片段HRM适合大规模SNP标记开发, 为大菱鲆的分子遗传育种提供了候选标记资源。     

应用高分辨率熔解曲线(HRM)开发大菱鲆(Scophthalmus maximus)SNP标记的研究

利用Vector NTI Advance 11软件分析了NCBI数据库中大菱鲆的12428条EST序列,筛出候选SNP位点;应用高分辨率熔解曲线(HRM)对大菱鲆不同性状群体进行基因分型。结果表明,522个重叠群中共筛出160多个候选SNP位点;设计56对引物用于实验,能扩增出目的片段的引物有37条,合45个位点,成功率为66.1%;设计探针,能与候选SNP位点杂交的探针有13条,杂交率为28.9%。本实验中能成功进行基因分型的位点共有8个,占杂交位点的61.5%,其中有6个为碱基替换型位点,即G-A和C-T各占3个,2个为碱基颠换型位点,即T-G和A-T各占1个。     

温度和pH值对南美白对虾(Penaeus vannmei)消化酶活性的影响

采用双因子交互的方法研究了不同温度和pH值对南美白对虾淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性的影响。结果表明，南美白对虾肝脏、肠道、胃的淀粉酶最适温度分别为30℃、35℃、30—35℃，最适pH均为6．2。肝脏、肠道、胃的蛋白酶最适温度分别为50—65℃、55—65℃、60℃，肝脏蛋白酶最适pH为8．5—9．0，肠道蛋白酶最适pH为7．5—8．5，胃蛋白酶最适pH为2．0和5．5—6．5。脂肪酶的活力很小，肝脏、肠道、胃的脂肪酶最适温度均为37℃ ，最适pH均为7．7。同时测得南美白对虾肠道、肝脏、胃组织内的pH分别为6．7—7．0、5．9—6．1、5．1—5．3。在三种消化酶各自最适的温度、pH值下，比较其活力大小，在肝脏、肠道、胃均为蛋白酶>淀粉酶>脂肪酶。     

许氏平鲉(Sebastes schlegelii)EST-SSR标记开发及通用性检测

利用已发表的EST序列设计引物并结合PCR筛选的方法,对许氏平鲉多态EST-SSR引物进行了开发。结果表明:(1)许氏平鲉EST-SSR位点发现率为9.14%,核心序列以二碱基重复出现频率最高,占到33.03%,其中以TG/CA基序最为丰富。(2)共设计引物56对,46对实现有效扩增,其中18对具有多态性。(3)野生群体遗传多样性分析显示,每个位点观测等位基因数(Na)为2—9,平均观测等位基因数为3.89;观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)及平均值分别是0.0333—0.8000、0.0333—0.7927和0.3037、0.3757;每个位点的多态信息含量(PIC)在0.0323—0.7522之间,其中高度多态位点5个,中度多态位点5个;经Bonferroni校正后,3个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡,但两两位点间不存在连锁不平衡现象。(4)许氏平鲉多态EST-SSR引物对朝鲜平鲉、褐菖鲉通用性检测结果表明,引物对二者的通用率和多态率分别为88.89%、100.00%和33.33%、88.89%。研究表明,这些通用引物可用于相关物种的遗传多样性评价、系统进化分析和比较基因组作图等研究。     

不同饵料对斑节对虾(Penaeus monodon)幼虾的生长及对WSSV 敏感性的影响

采用5种不同饵料投喂斑节对虾幼虾,研究各饵料对幼虾的体长、体重及成活率的影响,实验周期为20天;然后用投喂攻毒的方法分别感染WSSV,观察不同饵料对幼虾WSSV敏感性的影响。实验周期为12天。结果表明,投喂卤虫无节幼体组的幼虾,其体长、体重增长明显优于其它各组（P〈0．01）,随后依次为贝肉组、鱼肉组、人工配合饲料组、虾片组。不同饵料对幼虾WSSV敏感性的影响也有差异：投喂感染WSSV后,卤虫组和鱼肉组成活率最高,明显高于贝肉组、人工配合饲料组和虾片组（P〈0．01）。PCR检测表明,感染后全部幼虾个体为病毒阳性。     

日本对虾野生种群和养殖种群遗传结构的RAPD标记研究

于１９９７年４月在福建和山东青岛分别采集地虾野生种群和养殖群体的样品,采用ＲＡＰＤ标记技术对其遗传结构进行初步研究。用２０个随机引物在野生种群和养殖群体中分别扩增出１５７和１５３条ＤＮＡ片段,其中多态性段数分别为８５和５８条,多态性片段的比例分别为５４．１４％和３７．９１％,平均杂合度分别为０．２５１７和０．１３４３。     

日本对虾(Penaeus japonicus)病原需钠弧菌(Vibrio natriegens)表型与分子特征及LAMP检测方法的建立

采用常规表观生物学特性及16S rRNA、gyrB及rpoA基因同源性检索与系统发育学分析等方法,对分离自江苏连云港某育苗场的大批死亡日本对虾蚤状幼体的优势生长菌进行了综合鉴定。结果表明,其形态和生理生化特征与弧菌属的需钠弧菌相近;16S rRNA、gyrB及rpoA基因同源性检索也均与需钠弧菌相似性最高,分别为98%、89%和95%,且三种基因的NJ系统发育树也均与需钠弧菌聚为一个分支;分离菌的致病性试验表明其半数致死量LD50为1.8×106CFU/ml。综合分离菌的致病性、形态与生理生化特征及基因同源性与系统发育分析结果,认为引起日本对虾蚤状幼体大批死亡的病原为需钠弧菌。基于gyrB基因序列设计1套LAMP特异性引物,建立了需钠弧菌的快速特异性检测方法,可用于由需钠弧菌引起的水产动物疾病的诊断及分子流行病学的调查研究。     

中国对虾血淋巴中的抗菌、溶菌活力与酚氧化酶活力的测定及其特性研究

以海捕中国对虾亲虾为材料，对其血淋巴中的抗菌、溶菌活力及酚氧化酶活力进行测定，并研究经注射大肠杆菌、海洋弧 菌及酵母聚糖等糖等刺激物以后，其活性的变化规律等。结果表明，适当的免疫刺激可提高对虾自身的抗病能力、为免疫药物的研究制造等提供依据。     

泥蚶(Tegillarca granosa)基因组SSR和EST-SSR的开发及比较研究

采用SSPHunter软件在泥蚶(Tegillarca granosa)磁珠富集文库和454转录组文库中搜索核心序列长度12bp以上的2—6核苷酸重复序列,根据富集文库所得基因组SSR侧翼序列设计47对引物,可成功扩增17对且均为多态性引物,多态率100%,平均等位基因数(Na)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态性信息含量(PIC)分别为6.8、0.468、0.785、0.733。11344条EST序列中得到1683个SSR位点,检出率14.83%,平均每3.85kb出现1个位点。根据部分EST序列设计120对引物,62对可扩增出目的片段,其中29个位点具有多态性,多态率为46.77%,平均Na、Ho、He、PIC分别为4.2、0.372、0.554、0.500,均低于基因组SSR。双变量相关性分析的结果表明,46个多态性SSR位点的核心序列长度与其Na、Ho、He、PIC极显著正相关,Spearman相关系数分别为0.632、0.387、0.657、0.6640     

基于SLAF-seq技术的黑棘鲷微卫星标记开发及其在鲷科鱼类中的通用性研究

黑棘鲷(Acanthopagrusschlegelii)是广泛分布于西北太平洋的暖温性中下层经济鱼类,也是我国沿海重要的海洋捕捞鱼类和增养殖对象。然而,目前有关黑棘鲷的微卫星标记研究报道较少,难以对其种质资源状况作出精确评估。本研究采用SLAF-seq技术测序共获得22489个二至六碱基重复的黑棘鲷微卫星序列,短重复序列(二、三碱基)占总微卫星序列的90.8%,长重复序列(四至六碱基)占有9.2%。经过157对随机合成引物的多态性筛选,开发出49个高多态性的黑棘鲷微卫星标记,其中短重复序列位点有25个,长重复序列位点有24个。每个位点的等位基因数(Na)为2—20(均值为8.3),观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)分别为0.097—0.938和0.122—0.922(均值分别为0.663和0.701),多态信息含量(PIC)为0.118—0.897(均值为0.655)。经Bonferroni校正后,有47个位点符合哈迪-温伯格平衡(HWE),各位点间未检测到连锁不平衡现象,仅2个位点偏离HWE。结果表明,所开发的大部分微卫星标记具有高多态性,蕴含的遗传信息含量较为丰富,能够为黑棘鲷的种群遗传资源评估提供数量充足、类型多样的有效分子标记。跨物种扩增结果显示,有43个黑棘鲷微卫星标记可在9种鲷科鱼类中成功扩增,其中28个标记在太平洋棘鲷(Acanthopagruspacificus)、黄鳍棘鲷(Acanthopagruslatus)和澳洲棘鲷(Acanthopagrusaustralis)中具有较好的通用性,2个标记在平鲷(Rhabdosargussarba)、蓝点赤鲷(Pagruscaeruleostictus)、真赤鲷(Pagrusmajor)、二长棘犁齿鲷(Evynnis cardinalis)及黄牙鲷(Dentex hypselosomus)中具有通用性。这些通用性标记可为阐明鲷科属、种间的系统进化关系和棘鲷属鱼类的群体遗传学分析提供新的标记来源和研究角度。