斑节对虾虾苗白斑综合症杆状病毒的检测和养殖跟踪

利用 2步 PCR检测技术对湛江和阳西地区的虾苗进行白斑综合病杆状病毒 ( WSSV)检测。在仔虾 2日龄最早检测到病毒 ,有 2 5%的虾苗带有 WSSV病毒。带病毒虾苗和不带病毒虾苗分别在不同养殖模式的养殖过程中跟踪。前者在湛江湖光镇普通虾塘跟踪养殖 ,它们在变化的环境中容易发病 ,p H、盐度和温度是重要的诱发因子 ,在养殖 50～ 60 d时发病死亡 ;后者在高位池和普通池养殖跟踪 ,它们对变化的环境有较大的适应性 ,养殖时间为 80～ 1 1 0 d,在相对优良的养殖技术条件下大部分可望养殖成功。环境中有 WSSV病原传入 ,不带病毒虾苗在养殖后期可以带有 WSSV病毒 ,出现白斑虾。跟踪的普通池有爆发病害 ,但是时间延后 ,跟踪的高位池没有爆发病害。     

斑节对虾白斑综合症杆状病毒感染的实验模式

在建立斑节对虾实验室养殖模式的基础上．对野外采集的有白斑综合症病毒(WSSV)病典型症状的斑节对虾初步纯化其病毒．并进行WSSV的PCR检测，得到WSSV的感染用样品。对健康斑节对虾分别进行浸浴感染，投喂感染和注射感染。对感染死亡个体进行WSSA的PCR检测和细菌检测，证实WSSV感染性和致死性。浸浴感染、投喂感染和注射感染的感染量分别为4mL／L、0．2g／10g虾体、1／2稀释液0．05mL／10g虾体，死亡开始时间分别为16d、42h、28h，三种感染模式最终死亡率100％．从开始死亡到全部死亡延续时间分别为15d、82h、44h。     

斑节对虾白斑综合症杆状病毒感染的实验模式

在建立斑节对虾实验室养殖模式的基础上，对野外采集的有白斑综合症病毒（WSSV）病典型症状的斑节对虾初步纯化其病毒，并进行WSSV的PCR检测，得到WSSV的感染用样品。对健康斑节对虾分别进行浸浴感染，投喂感染和注射感染。对感染死亡个体进行WSSA的PCR检测和细菌检测，证实WSSV感染性和致死性。浸浴感染、投喂感染和注射感染的感染量分别为4mL/L、0.2g/10g虾体、1/2稀释液0.05mL/10g虾体，死亡开始时间分别为16d、42h、28h，三种感染模式最终死亡率100%，从开始死亡到全部死亡延续时间分别为15d、82h、44h。     

凡纳滨对虾和斑节对虾对WSSV敏感性的比较

用6.0×104拷贝、1.2×104拷贝和6.0×103拷贝3种剂量白斑综合症病毒(WSSV)对凡纳滨对虾和斑节对虾进行人工注射感染,比较了两种对虾对WSSV敏感性的差异。结果表明,凡纳滨对虾死亡时间随病毒剂量降低而延长,斑节对虾死亡时间没有明显差异;随病毒剂量的降低,凡纳滨对虾人工注射感染后病毒复制高峰时间显著延长,斑节对虾感染后病毒复制高峰时间相同,WSSV在凡纳滨对虾体内比在斑节对虾体内复制慢。对虾携带WSSV数量最低为3.3×107拷贝.g-1,最高为4.3×108拷贝.g-1。凡纳滨对虾比斑节对虾对WSSV的抵抗性更强。     

斑节对虾高密度养殖配合饲料的研制

为了适应斑节对虾高密度养殖业迅猛发展的需要,研制了粤海牌斑节对虾饲料。该饲料配方合理,工艺先进,不加粘结剂,能达到水中稳定性的要求。试验结果表明。饵料系数１．３９－２．１８,饲养７９－１２６ｄ,产量６８７０－９２４０ｋｇ／ｈｍ＾２,收规格５４－７２属／ｋｇ,饲养的斑节对虾肌肉饱满,活力强。     

斑节对虾高密度养殖配合饲料的研制

为了适应斑节对虾高密度养殖业迅猛发展的需要,研制了粤海牌斑节对虾饲料。该饲料配方合理,工艺先进,不加粘结剂,能达到水中稳定性的要求。试验结果表明：饵料系数1．39～2．18,饲养79～126d,产量6870～9240kg／hm2,收虾规格54～72尾／kg;饲养的斑节对虾肌肉饱满,活力强。     

斑节对虾细菌性烂鳃病的病理组织学观察

对自然发生的斑节对虾烂鳃病进行了病理组织切片观察,发现病虾由杆状细菌感染造成鳃丝萎缩、坏死,鳃小片呼吸上皮脱落,鳃血中有菌团存在,而且病虾的肝胰脏、胃、肠、心脏等器官组织受毒素影响而发生组织变性坏死。证实斑节对虾烂鳃病由杆状细菌感染引起。本文对细菌引起虾体的损害及对虾的防御机制进行了探讨,认为斑节对虾是由于细菌感染造成鳃呼吸功能障碍和细菌毒血症造成肝胰脏功能障碍而死亡。     

凡纳滨对虾对虾杆状病毒PCR检测方法的建立及初步应用

根据Gen Bank中公布的对虾杆状病毒(Baculovirus penaei,BP)基因片段序列,设计1对特异性检测引物,建立快速检测凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)对虾杆状病毒的PCR方法。用该方法对BP阳性虾进行PCR扩增,结果得到380 bp的特异性扩增条带,与实验设计相符,而对白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉病毒(TSV)、传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)阳性虾和健康虾的扩增结果为阴性。测序比对结果证实,该PCR方法检测结果准确,最低可检测出约1 pg的病毒DNA。利用建立的PCR方法对来自广东、广西、福建、海南和浙江的2 722份临床病料进行检测,共检出阳性病料133份,表明该PCR方法可用于对虾杆状病毒的临床快速检测。     

氟乐灵对斑节对虾卵和幼体的毒性研究

采用静水生物试验法测定了氟乐灵对斑节对虾卵和幼体的急性毒性。结果表明：氟乐灵对斑节对虾无节幼体、蚤状幼体、糠虾幼体和仔虾的２４ｈＬＣ５０／×１０－６分别是１．６８，０．８３，１．８４和２．０９；４８ｈＬＣ５０／×１０－６分别是０．７６，０．５３，１．０９和１．５１。５．０１×１０－６氟乐灵浸浴受精卵１２ｈ，５０％的受精卵可孵化。第２２天仔虾用１０×１０－６以下浓度的氟乐灵浸浴５ｍｉｎ，对其存活率无影响。     

蜕壳促长素对斑节对虾、刀额新对虾蜕壳和生长的作用

在对虾人工配合饲料中添加蜕（脱）壳促长素，喂养斑节对虾（ＰｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎＦａｂｒｉｃｉｕｓ）和刀额新对虾（ＭｅｔａｐｅｎａｅｕｓｅｎｓｉｓＤｅＨａａｎ），观察其促进蜕壳、生长的作用。试验证明：饲料中添加不同浓度（０．５‰。、１．０‰、１．５‰）的蜕壳促长素，均不同程度地促进对虾的蜕壳和生长。添加浓度为１．５％。效果最为明显。值得在生产中应用。     

“克毒丹”和“虾丹特”提高斑节对虾成苗率的初步探讨

１９９３年,全球虾病大流行,使虾产量下降１２％,而我国虾病则从南到北发生了空前的大暴发,致使年产量大幅度地下降了一半以上［１］,因而养虾业遭受惨重损失。据分析,这次虾病流行的原因主要有：工农业和生活污水污染沿海,使养虾业直接受害;虾池老化,自净能力较差;对虾育苗滥用抗菌素,致病菌因而获得抗药性;更为严重的是,有多种病毒性病原侵害对虾苗种和成虾,致使对虾的抗病机能减弱,当减弱到一定的程度时,加上环境、水质、营养和细菌等不良因素,使虾病暴发,在短时间内遭受毁灭性的打击。目前,已发现的对虾病毒共１０余…     

不同海水相对密度对斑节对虾胚胎发育和无节幼体变态的影响

斑节对虾俗称草虾,具有个体大,生长快,食性杂,适盐范围广,耐干能力强,经济价值高等特点而深受广大养殖者的欢迎,在我国南方沿海地区广泛养殖。目前,斑节对虾的人工育苗技术已过关,但由于种种原因,大部分的对虾育苗场都依靠购买无节幼体进行育苗,由于不同海区海水相对密度有所差别,有时造成无节幼体变态率不高,即使能变态而幼体活力差,育苗存活率低。另一方面,低海水相对密度对斑节对虾培育和产卵孵化影响较大,探索适宜的孵化相对密度是十分必要的,为此,我们做了这方面的试验,供斑节对虾育苗生产者参考。１　材料和方法１…     

溶藻弧菌肽聚糖和vp28-siRNA对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用

对感染白斑综合征病毒(WSSV)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05和0.10μg/μL的vp28-si RNA,干扰效果实验表明,si RNA最佳浓度为0.10μg/μL。凡纳滨对虾感染WSSV 24 h时注射0.10μg/μL的vp28-si RNA,检测免疫后不同时间点的干扰效果。结果表明:在注射vp28-si RNA 6 h后,实验组与对照组WSSV病毒拷贝数差异有统计学意义(P0.05);在48 h时实验组病毒拷贝数急剧下降,对照组则保持较高水平,可较好干扰WSSV病毒复制,干扰效果持续120 h,对凡纳滨对虾的保护率为40%。凡纳滨对虾用0.10 mg/m L肽聚糖(Peptidoglycan)免疫24 h后感染WSSV,检测6、12、24 h注射vp28-si RNA的保护率。结果显示:6 h注射组的保护率为80%,12 h注射组为63.33%,24 h注射组为56.67%。凡纳滨对虾在肽聚糖和vp28-si RNA作用后,可增加其对WSSV抗感染作用,降低死亡率,干扰时间越早,对对虾的保护率越高。