生物胺对锯缘青蟹精巢发育的调控作用

采用活体注射和体外培养方法,以精巢指数、精巢生精小管的成熟节段比例和促雄腺B型细胞比例为量化指标,观察3种生物胺对雄性锯缘青蟹生殖神经内分泌的调控作用.活体注射实验表明:5-HT组锯缘青蟹精巢发育和促雄腺分泌活动具有显著的促进作用;DA组精巢发育受到抑制,但促雄腺细胞的分泌活动不受影响;OA组与同步对照组差异不显著.离体实验表明:5-HT刺激了脑和胸神经团的分泌活动,从而促进促雄腺分泌活动;OA和DA对脑和胸神经团分泌活动没有明显影响.视神经节的生殖内分泌活动几乎不受3种生物胺的影响.本实验首次报道了体外条件下生物胺对雄性甲壳动物生殖神经内分泌的调控作用,支持了5-HT首先刺激脑和胸神经团分泌GSH,再通过促雄腺活动从而促进精巢发育的观点.     

生物胺对锯缘青蟹大颚器发育的调节作用

雌性锯缘青蟹(Scylla serrata)于实验的第1天、第5天、第10天，分别注射100μL剂量为1μg／g体质量的5-HT，OA和DA，第15天解剖。结果表明，5-HT对锯缘青蟹大颚器发育具有显的促进作用，OA和DA的作用不明显。经免疫细胞化学检测，大颚器内存在5-HT免疫阳性细胞，免疫阳性细胞多数为卵圆形，少数具有很长的胞突，该结果首次为5-HT参与大颚器的生理活动提供了形态学证据。     

锯缘青蟹神经器官对卵巢发育的调节作用：离体实验

器官联合培养研究表明，锯缘青蟹（Scylla serrata)的脑和胸神经团分泌的性腺刺激激素（GSH）对卵母细胞的生长具有直接的促进作用，对视神经节则没有显的影响。在卵巢发育过程中，脑和胸神经团GSH的生物活性逐渐增强。     

锯缘青蟹大颚器发育的组织学研究

采用组织学方法对锯缘青蟹（Scylla serrata)大颚器进行研究。大颚器位于大颚肌几丁质腱的后侧基部，发育过程可分为4期：I期大颚器很小，肉眼难以辨认，腺细胞数量少，细胞界限不清晰；Ⅱ期大颚顺形状不确定，腺细胞开始形成腺泡；Ⅲ期大颚器通常呈肾形，腺泡多；Ⅳ期大颚器体积最大，呈柱状，腺细胞发达，未见退化现象。锯缘青蟹体长、卵母细胞直径、生精小管直径与大颚器腺细胞直径具有良好的线性关系。实验结果提示了锯缘青蟹大颚器与生长、生殖活动密切相关。     

锯缘青蟹大颚器的显微和超微结构

采用组织切片和电镜技术,对锯缘青蟹大颚器的形态结构进行了观察.大颚器位于大颚肌几丁质腱的后侧基部.腺细胞胞质丰盈,质膜大量内陷和作不同程度的卷绕,内含大量具管状脊的线粒体和滑面内质网.卵巢成熟时大颚器腺细胞内线粒体增多,少数线粒体形态异样,高尔基体易见,散布的小管状滑面内质网(tSER)少,高度汇合的tSER增多,大小形状不同的空泡数量明显增加,且近质膜分布,质膜内陷和卷绕程度加剧.表明此时锯缘青蟹大颚器的合成与分泌能力增强,其生理功能与卵巢发育密切相关.     

锯缘青蟹大颚器对卵巢发育的调节作用:离体实验

器官联合培养研究表明。锯缘青蟹大颚器对卵黄发生前期和卵黄发生期卵母细胞的发育具有促进作用。随着大颚器的发育。其生物活性逐步增强。     

锯缘青蟹前脑神经分泌细胞的超微结构

经透射电镜观察，锯缘青蟹（Scylla serrata)前脑具有3种类型的神经分泌细胞。I型细胞最大，胞质中存在许多大小不同的空泡，分泌颗粒数量很少；Ⅱ型细胞中等大小，细胞器发达，分泌颗粒数量较多，形态多样；Ⅲ型细胞最小，分泌颗粒数量最多，电子密度低，细胞器很少。锯缘青蟹前脑神经分泌细胞的特点，为甲壳动物系统演化处于较低的地位提供了形态学证据。     

锯缘青蟹X器官神经分泌细胞的细胞学研究

锯缘青蟹(Scylla serrata)眼柄X器官神经分泌细胞有2种类型,即B、C型;每种类型还可分为4个亚型。各种类型的神经分泌细胞多以集群的方式分布在视神经节终髓基部一定的位置。超微结构的观察进一步表明:2种类型细胞的特征有明显的差别。C型细胞具有十分发达的粗面内质网,内质网聚集成群,使胞质呈斑块状。B型细胞缺乏发达的内质网。B细胞产生小的分泌颗粒,C型细胞可产生大型和中型分泌颗粒。在轴突中,可以观察到5种类型的分泌颗粒。此外,还观察了神经胶质细胞的超微结构,它们的突起中含有大量的清亮小泡和平行的膜状结构。     

锯缘青蟹(Scylla serrata)幼体胃磨发育的比较研究

在青蟹幼体发育过程中，胃磨呈现出明显的变化。Ｚ１缺乏胃磨的结构，ＺⅡ开始出现中齿和侧齿的雏形，明显的可以识别的中齿和侧齿出现在ＺⅢ，．从ＺＶ开始胃磨已臻完善，除具有中齿和侧齿外，还出现了４个附属齿，包括两个附属的中齿和两个附属的侧齿。大眼幼体期，中齿和侧齿比ＺＶ更加尖锐，附属齿也更加锋利。在仔蟹前，中齿齿尖发生特化，形成垫状角质化区域，侧齿、附属齿更加锋利。这表明青蟹幼体发育过程中胃磨结构的变化与     

乙醇对锯缘青蟹碱性磷酸酶活力与构象的影响

应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究锯缘青蟹碱性磷酸乙醇微扰后的分子构象变化情况。乙醇对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增加,荧光发射峰逐渐发生红移,说明酷氨酸、色氨酸残基的微环境发生明显的变化;紫外吸收光谱在278nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强。这些结果表明,酶蛋白分子中的生色基因残 基的微环境发生变化;酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降,经乙醇失活的酶在正常的测活体系中监测酶活力,发现酶活力可以回升到92％以上,说明酶的乙醇失活是可逆的,可以通过稀释复活。测定乙醇对酶的抑制动力学,表明乙醇对青蟹碱性磷酸酶的抑制作用是反竞争性机制,其抑制常数Ki为11．8％。     

锯缘青蟹(Scylla serrata)不同种群的杂合性研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 ,研究了锯缘青蟹 (Scyllaserrata) 6个自然种群杂合体缺乏及过量情况 ;进行了 1 1种等位酶的电泳检测和谱带遗传分析 ,在所研究的锯缘青蟹 2 2个等位酶位点和 30个等位基因中 ,有 7个位点是多态的 ,分别为Est 1、Est 2 (在此位点厦门锯缘青蟹为单态 )、Est 3、Sod 1、Me 2、Mdh 2 (在此位点厦门锯缘青蟹为多态 )、Mdh 3,在这些位点有 2— 3个等位基因。结果表明 ,宁海和三亚种群的Est 1和Est 2位点、厦门种群的Est 1和Mdh 2位点、深圳和北海种群的Est 1位点符合H W平衡标准 (P >0 .0 5 ) ;连江种群的Est 1位点显著偏离H W平衡 (P <0 .0 5 ) ;而宁海、三亚和厦门种群的Est 3、Sod 1、Me 2和Mdh 3位点、连江种群的Est 2、Est 3、Sod 1、Me 2和Mdh 3位点及深圳和北海种群的Est 2、Est 3、Sod 1、Me 2和Mdh 3位点均非常显著偏离H W平衡 (P <0 .0 1 )。另外 ,除连江种群的Est 1位点表现出杂合子缺失 (F >0 )外 ,各种群中每个多态位点均表现为杂合子过量 (F <0 )。总结了各种群中每个多态位点的观察杂合度和期望杂合度 ,认为导致杂合子缺乏的主要原因可能是自然选择、近交、哑等位基因、Wahland效应等。杂合子缺乏会导致某些基因从基因库中消失 ,造成种群遗传多样性的降低 ,从而降     

锯缘青蟹(Scylla serrata)特异性过敏原的研究

采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对锯缘青蟹肌肉中可溶性蛋白质进行分离,以过敏患者阳性血清和正常人阴性血清作对照,通过Western blot鉴定出分子量为14.3kDa的蛋白为锯缘青蟹的特异性过敏原.然后用Sephadex G75凝胶过滤层析和DEAE-52离子交换层析纯化出该过敏原,再经MALDI-TOF/TOF-MS检测,利用Blastz在线分析.结果表明,锯缘青蟹特异性过敏原为血蓝蛋白亚基,经Clustal W分析该蛋白的多肽片段序列与可口美青蟹、邓杰内斯蟹、加州龙虾、艾氏真蟹的血蓝蛋白亚基序列有很高的同源性,经Prosite数据库检索后发现肽段1和肽段2有酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点,是过敏原参与机体反应的重要活性位点.     

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)PP2A调节亚基B的基因克隆与表达分析

采用RT-PCR、RACE等方法,获得了拟穴青蟹PP2A调节亚基B(PP2A-B)的cDNA全序列,全长2040bp,开放阅读框(ORF)为1332bp,可编码443个氨基酸残基。同源分析显示,该基因编码的蛋白与其它一些物种具有很高相似性,推测PP2A-B基因具有很高的保守性。经荧光定量PCR检测,PP2A-B基因在拟穴青蟹多个组织中有表达,且在脑、卵巢、鳃中表达量较高。在拟穴青蟹卵巢发育过程中,PP2A-B基因在卵巢未发育期(I期)表达量最高,此后各期逐渐下降,推测PP2A-B在卵巢中可能以PP2A全酶的形式存在,抑制卵巢发育。     

锯缘青蟹碱性磷酸酶分离纯化及部分理化性质研究

于１９９５年２月在厦门海域采集锯缘青蟹,取其内脏经正丁醇抽提,硫酸铵分级分离ＤＥＡＥ－５２离子交换柱层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤柱层析纯化,获得碱性磷酸酶 制剂,以快速 蛋白液相色谱及聚丙烯酰胺凝胶电泳检验萁 纯度,获得单一蛋白纯的酶 制剂。     

锯缘青蟹(Scylla serrata)呼肠孤病毒5个结构蛋白互作分析

采用酵母双杂交系统,对青蟹呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus)5个结构蛋白(VP3,VP6,VP9,VP11,VP12)间的双向互作进行了分析。将5个结构蛋白对应的ORF分别亚克隆至诱饵载体p GBKT7和猎物载体p GADT7,成功构建了10个酵母双杂交重组载体。将重组诱饵载体或重组捕获载体转化至酵母菌Y2H Gold中进行自激活检测,结果显示5个结构蛋白均不能激活酵母菌报告基因HIS3的表达,表明5个病毒蛋白均不具有自激活活性。通过酵母双杂交实验,从5个结构蛋白25个可能性互作对中,共筛选出2个双向互作对(VP11VP6,VP11VP12)和3个自身互作对(VP3VP3,VP11VP11,VP12VP12)。本研究是有关Ss RV结构蛋白互作的首次报道。     

锯缘青蟹胸神经团的免疫细胞化学定位研究

采用兔抗哺乳类抗血清，应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫细胞化学技术，研究了锯缘青蟹（Scylla serrata）胸神经团中5-羟色胺（5-HT）、胰高血糖素（Glu）和神经肽Y（NPY）的分布。其分布的主要特征为：5-HT免疫阳性细胞在每对步足神经节都呈对称排列；GLU免疫阳性最强，胸神经节的阳性细胞排列成两条环境胸动脉孔分布的细胞带，神经髓质中免疫阳性物质呈斑块状分布；NPY阳性细胞主要分布于食道下神经节。这3种免疫阳性物质的特定分布模式可为腹神经链的系统演化和参与神经活动提供形态学证据。