大黄鱼精子生理特性及其冷冻保存

研究了大黄鱼精子的生理特性及其冷冻保存技术。实验结果表明,大黄鱼精液pH值为6.72—7.25。精子平均密度为14.45×109·ml-1。精子离体后在精液中3.5h(25℃)仍有80.5%可以存活。在精子激活液中,不同的盐度和酸碱度对精子的活力、存活时间和运动状况影响很大。精子适宜的盐度为20—35,pH值为6.60—8.50。在海水中精子的直线快速运动仅持续3min。使用筛选出的精液稀释液和抗冻剂组成精子冷冻保存液。采用快速冷冻保存方法在液氮中保存精子。经保存1a,采用室温(21—23.5℃)自然解冻冻精,精子活力可达到89.5%±4.2%。利用冻精进行大黄鱼的人工授精试验,受精率达82.7%±5.5%,孵化率达85.7%±5.8%,与鲜精对照组相近。     

鱼类精液超低温冷冻保存的研究展望

精液的超低温冷冻保存是从上世纪50年代开始的，此项技术发展至今已取得很大成就。国外学者的工作主要集中在冷水性鲑鳟鱼类及某些海水鱼上，而国内以研究四大家鱼及其他淡水鱼类精液的超低温保存居多，只有少数学者研究如真鲷、黑鲷、花鲈、大弹涂鱼等海水鱼类精液的超低温保存。本文就开展鱼类精液冷冻保存研究的意义、鱼类精子超低温保存的基本生物学原理，及有关鱼类精液冷冻保存的研究现状等作一综合评述。     

点带石斑鱼精子超低温冷冻保存研究

为建立点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)精子冷冻保存技术,保存点带石斑鱼种质资源,作者通过选用TS-19、TS-2、Hank’s、MPRS、Cortland、0.75%NaCl等作为稀释液及10%~25%二甲亚砜、甘油、甲醇作为抗冻液,对繁殖季节中3个不同时期的点带石斑鱼精液进行超低温冷冻保存研究。研究结果表明:(1)Hank’s溶液为点带石斑鱼精子冷冻保存最适冷冻稀释液;(2)Hank’s溶液与10%~15%DMSO溶液为点带石斑鱼精子保存的最适冷冻保护液组合,可以获得60%以上的冻精成活率,而使用不同浓度的MeOH作为抗冻液时,冻精成活率均为0%;(3)以10%~25%Gly作为抗冻液时,冷冻前未加天然海水时均能激活点带石斑鱼精子正常运动,其效果与天然海水相似,加入天然海水后精子运动效果急剧下降,精子冷冻保存后也存在同样现象;(4)为保证获得更高的冻精成活率,点带石斑鱼精液冷冻保存样品的最佳获取时期是在亲鱼自然繁殖期前进行为宜。     

小黄鱼(Larimichthys polyactis)精子的生理特性及超低温冷冻保存研究

为了解养殖小黄鱼精子的生理特性及超低温冷冻保存效果,用计算机辅助精子分析系统(CASA)检测了小黄鱼精子的运动参数及盐度、pH、葡萄糖、离子等环境因子的变化对其精子活力的影响;探究了稀释液、抗冻剂、稀释比及降温高度等对精子冷冻保存效果的影响。结果显示:小黄鱼精液的精子密度为(6.92±1.20)×109/mL。精子经自然海水激活后,运动率、运动时间及寿命分别为(59.31±4.85)%、8.44±0.87min及12.20±0.50min,直线运动速率(VSL)、曲线运动速率(VCL)及平均路径运动速率(VAP)分别为11.96±5.21、25.38±7.19和22.33±6.88μm/s。精子运动适宜的盐度范围为25—30、适宜的pH范围为7.5—8.5,精子在盐度25或pH8.0的海水中活力较好。精子激活效果较好的葡萄糖浓度为0.7—0.9mol/L;浓度0.9mol/L时,精子活力较好。精子激活效果较好的KCl、NaCl、MgCl2及CaCl2溶液浓度分别为0.4—0.5、0.4—0.6、0.7—1.0和0.2—0.3mol/L;精子在KCl及CaCl2溶液中活力相对较差,运动率等参数显著低于对照组;精子在不同人工海水中的运动率显著低于自然海水中的运动率,但精子在单一离子缺陷型人工海水及全人工海水中的运动率无显著差异。以0.25mL麦细管为冻存管, 6种稀释液、不同浓度的4种抗冻剂、5种稀释比及5种降温高度对小黄鱼精子冷冻保存效果的影响试验发现,以HBSS液1︰3稀释精液,添加10%DMSO及15%PG为抗冻剂,液氮面上3.5cm处降温5min后投入液氮中保存效果较好,冻精解冻后运动率达(43.57±2.59)%及(43.06±6.77)%。     

花鲈精子生理特性及其精液超低温冷冻保存

以精子的活率、寿命和运动状态为参数,探讨了花鲈鲜精在不同盐度、酸碱度和离体条件下的生理特性,并对花鲈精液进行超低温冷冻保存研究.结果表明:盐度和酸碱度主要影响精子的寿命,对精子的活率影响不大;精子离休后置于室温(15～17℃)下8h,其活率和寿命随时间的延长而呈下降趋势,运动状态也逐渐减弱;不同组成成分的基础溶液以及抗冻保护剂的种类、浓度和使用方法均影响精液超低温冷冻保存效果;精液冷冻前经30min降温平衡(0～2℃),效果好于直接冷冻;冻精采用水浴快速解冻法(38～40℃)的效果优于室温(15.5～17.5℃)解冻法.     

牙鲆精子的超显微结构

不同种类的硬骨鱼,其精子的超显微结构也各不相同［１～３］。牙鲆是我国一种重要海产鱼类,本实验对其精子的超显微结构进行了观察,并与其他鱼类精子的超显微结构进行了比较。１　材料与方法实验中所用的雄性牙鲆亲鱼取自中国科学院海洋研究所水族楼亲鱼饲养池。取性腺发育成熟的亲鱼,用人工挤压的方法,将精液挤压入干燥、洁净的玻璃器皿中,然后加入三倍体积２．５％戊二醛磷酸缓冲液中（ｐＨ４．７）,混合均匀,以４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ,弃去上清液,沉淀包埋于甘油明胶中。包埋块再置于２．５％戊二醛中,４℃过夜。１％…     

Cryopreservation of amphioxus (Branchiostoma belcheri) spermatozoa

Amphioxus, Branchiostoma belcheri, a closest relative of vertebrates, is at a high risk of extinction due to a combination of low effective population size, altered native habitats and environmental pollution, yet little is known about cryopreservation of its gametes. This study deals with the cryopreservation of amphioxus semen. The main findings are that (1) the extender of Yao et al. is the best one among the four extenders examined; (2) the appropriate ratio of semen to extender of Yao et al. plus cryoprotectant is from 1:5 to 1:7; (3) dimethyl sulfoxide (DMSO) and methanol are the better cryoprotectants than glycerol, with DMSO giving the best results; (4) the eggs fertilized with post-thaw spermatozoa are capable of developing to at least hatching stage, and the highest hatching rate is (12.4±3.0)%. This is the first report on freezing and thawing of amphioxus spermatozoa, providing a simple and practical protocol for cryopreservation of amphioxus spermatozoa and laying a foundation for safeguarding this endangered species.     

保存和激活对真鲷精子生理特性的影响

就真鲷的新鲜精子和冷阈保藏精子的活力特性及对环境变化的适应进行了研究。结果表明,真鲷精子在普通冰箱的冷冻室中能存活１２０ｈ以上;淡水对真鲷精子具有可逆的抑制作用;液氮保存使精子对ｐＨ值和盐度变化的适应性更强。     

中国对虾精子超低温保存的研究

于1991年11月-1993年5月对中国对虾纳精囊中精子进行超低温保存研究。结果表明，以自然海水或人工海水作基础液添加10％DMSO（V／V）及5％－10％的甘油配制成抗冻稀释液，稀释中国对虾精子进行超低温保存最有效，存活率在60％以上；保存94-138d，解冻后作人工授精，受精率最高达59％；稀释液中Mg2+，K+，Ca2+为超低温保存所必需，但Ca2+浓度过高则不利于精子的保存。光镜及电镜观察表明。冷冻对中国对虾精子的损伤主要表现为“棘突”的折断，严重时须体脱落仅剩精核；冻伤的精子不发生正常项体反应，不形成项体丝。     

太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)精液的超低温保存研究

筛选了六种抗冻保护剂(GLY[甘油],DMSO[二甲基亚砜],PG[丙二醇],EG[乙二醇],DMA[二甲基乙酰胺],MeOH[甲醇])及其五种不同浓度(6%,8%,10%,12%,14%,V/V)、三种稀释液(HBSS溶液,人工海水[ASW],过滤海水[FSW])、四种稀释比例(1︰1,1︰2,1︰4,1︰6)、三种添加剂(蔗糖,葡萄糖,海藻糖)、三个分步降温程序(程序A,程序B,程序C)对太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)精液冷冻保存的影响,成功建立了太平洋牡蛎精液超低温保存方法:以10%DMSO为抗冻保护剂,HBSS溶液为稀释液,1:4的稀释比例,添加海藻糖,采用分布降温法冷冻保存太平洋牡蛎的精液,37°C水浴解冻后精液运动率达到71.27%±3.24%,显著高于其它实验组(P0.05),受精率和孵化率分别达到95.04%±1.99%、93.33%±1.33%,与鲜精(88.89%±15.16%,94.90%±0.95%)、程序冷冻前精液(95.96%±2.15%,92.67%±14.83%)差异不显著(P0.05),证明该太平洋牡蛎精液超低温保存方法可以应用于生产实践和科学研究中。     

扇贝精液超低温冷冻保存技术的研究

于１９９７年３月￣１９９７年５月,取山东长岛和青岛太平角海区的虾夷扇贝和栉孔扇贝,采用自然排放法和解剖法取精液,用自然海水作基础溶液,采用不同的抗并保护剂、冷冻速度、平衡时间,对精子的存活率、受精率和孵 进行了研究。结果表明,两种扇贝的精子以自然海水为基础溶液,加８￣１０％的ＤＭＳＯ作为抗冻保护剂,距液氮表面２５ｃｍ、２０ｃｍ、１０ｃｍ各停留８ｍｉｎ,移入液氮中保存;解冻时,距液氮表面１０ｃｍ、１     

渤海鱼类区系分析

关于渤海的鱼类区系,张春霖等(1955)曾报道了116种;林福申1)根据1958年6月-1959年11月渤海大面试捕资料(其间12-3月未调査)记载了渤海底层鱼类74种,他在分析了这些鱼类的区系性质后提出,其中暖水性鱼类19种、温水性鱼类44种、冷温性鱼类11种,并认为渤海鱼类的区系性质属温水性。根据中国科学院海洋研究所1982年4月至1983年5月在渤海进行的底拖网逐月试捕调査和1983年6,7月上层拖网试捕调査资料,以及有关文献和本所历年来的采集记录鉴定,渤海已记录的鱼类有19目,66科,156种,其中我所试捕调查获108种,文献和采集记录补充了48种。本文根据以上资料,对渤海鱼类的种类组成和区系性质进行分析。渤海鱼类名录和种的区系性质按分类系统(成庆泰、郑葆珊,1987)列于附表。由于调査范围、时间及捕捞工具有限,遗漏种类在所难免，但作者认为上述材料已基本上能反映渤海鱼类的全貌。     

黑鲷精子的超低温保存研究

对黑鲷精子的超低温保存技术进行了初步探讨，黑鲷（Sparus macrocephalus)精子经过超低温保存后复苏率，存活率最高可以达到61．37％和61．4％，保存黑鲷精子时发生冷冻伤害的温度范围是－21－－60℃，适宜的降温速率为20度／min；使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20％，样品体积对保存效果有相关性；利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高pH值的溶液；使用20％DMSO和20℃/min降温速率处理，在液氮中保存黑鲷精子66d后解冻，其复苏率和存活率分别为59．81％和58．45％。     

中国对虾(Penaeus chinensis)精子ATP酶活力与生殖关系的探讨

首次报道了中国对虾精子存在有Ｎａ，Ｋ－ＡＴＰ酶及Ｍｇ－ＡＴＰ酶活力，并对 其生物功能进行了探讨。对来自不同季节的雌虾纳精囊中精子的两种ＡＴＰ酶活力 进行了测定。酶分析的结果为春虾精子的 Ｎａ，Ｋ－ＡＴＰ酶活力为 １．１４５±０．２２９μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ，秋虾则为 １． ０５８±０． ４３１μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ；春虾精子的 Ｍｇ－ＡＴＰ酶活力为 １． ６４７±０． ６９１μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｍ· ｈ，秋虾则为 １． ５８４±０． ３１５μｍｏｌ Ｐｉ／ｍｇ· ｈ。因此在表观 上，春虾精子的两种ＡＴＰ酶活力均略高于秋虾，但差异不够显著。     

鱼类白化病的研究进展

白化病是由于动物的眼睛和皮肤中的黑色素细胞缺乏或黑色素的生成发生障碍所导致的一种体色异常病。在各种脊椎动物,如哺乳动物、两栖类、鸟类和鱼类中都常有白化个体出现。由于白化个体通常会伴随着一系列病理学上的改变,如贫血、内耳功能缺陷、巨结肠、骨硬化症、小眼和神经系统疾病等,又由于缺乏保护色,易被天敌捕食,因而白化个体在自然环境中的生存能力大大低于正常个体,这也是野生白化个体比较少见的主要原因。     

鱼类活动代谢研究简况

自１９６７年Ｗａｒｒｅｎ和Ｄａｖｉｓ提出鱼类的生物能量收支式Ｃ＝Ｆ＋Ｕ＋ＳＤＡ＋Ｒｓ＋Ｒａ＋Ｇ以来,鱼类能量学的研究迅速开展并成为国内鱼类学研究的一个热点。式中的Ｃ,Ｆ,Ｕ,ＳＤＡ,Ｒｓ,Ｒａ,Ｇ分别指摄食、排粪、排泄、特殊动力作用、标准代谢、活动代谢和生长。崔奕波１９８９年已对各参数与环境因子的关系及研究方法进行了概括总结。谢小军等１９８９年,１９９１年,对ＳＤＡ及影响鱼类代谢的主要生态因素进行了详细的综述。而活动代谢由于测定比较困难,以及是否把它作为鱼类能量收支中的一个恒定的组分还存在争议,…