红鳍笛鲷、紫红笛鲷和白斑笛鲷的核型研究

以红鳍笛鲷（Lutjanus erythopterus)、紫红笛鲷(Lutjanus argentimaculatus)、白斑笛鲷（Lutjanus bohar)为材料，胸腔注射PHA及秋水仙素溶液，取头肾细胞经空气干燥法制片，姬姆萨染液染色，观察分析获得染色体核型：染色体数目2N＝48，染色总臂数为48。     

紫红笛鲷的养殖

紫红笛鲷（Ｌｕｔｉａｎｕｓ　ａｒｇｅａｔｉｍａｃｕｔａｔｕｓ）也称红细，属笛鲷科、笛鲷属。分布于印度洋和太平洋中部及西部，我国产于南海及东海南部。８０年代末，台湾人工繁殖紫红笛鲷取得成功。海水网箱养殖紫红笛鲷也相应开展。但大陆对紫红笛鲷的池塘养殖尚未见完整报道。作者１９８７年曾从海南省文昌市冯家湾引进天然紫红笛鲷鱼苗进行海水网箱养殖，取得初步成功后，１９９２～１９９３年将其进行池塘集约化养殖，并于１９９３年在国内首次将其驯化到淡水池塘集约化养殖，取得了较好效果。现将几年来的研究结果报告如下。１材…     

紫红笛鲷白点病的防治试验

紫红笛鲷 (Ｌｕｔｊａｎｕｓａｒｇｅｎｔｉｍａｃｕｌａｔｕｓ)俗称红 ,为暖水性大型底层鱼类 ,是粤琼两省沿海网箱和渔养殖的名优种类。环境适应性强 ,海水、咸淡水都能养殖 ,甚至淡水中也能正常生长。在自然海区网箱养殖的紫红笛鲷很少发生暴发性的海水小瓜虫病 ,而在室内培养池里 ,当环境适宜时 ,海水小爪虫大量繁殖 ,疾病迅速蔓延 ,对紫红笛鲷产生极大危害。海水小瓜虫又称刺激隐核虫 (Ｃｒｙｐｔｏｃａｒｙｏｎｉｒｒｉｔａｎｓ) ,是一种纤毛虫类寄生虫 ,主要寄生于海水鱼的皮肤、鳍、鳃、眼角膜等处 ,对鱼的种类和个体大小没有明…     

紫红笛鲷遗传多样性的AFLP分析

针对广东、海南省4个不同地方(阳江、湛江、榆林、琼海)网箱养殖的紫红笛鲷(Lutjanus argentimaculatus)群体和在三亚采集的野生紫红笛鲷群体,利用AFLP分子标记技术分析我国南方养殖的紫红笛鲷的遗传多态性。最适合的AFLP引物组合是E AGC／M CAA,扩增出的AFLP特征位点为107,养殖样品扩增出的AFLP的带数在5474之间,野生样品扩增出的AFLP的带数为63,4个养殖点紫红笛鲷的多态性标记百分率都超过了40．00％,呈现一定程度的遗传多样性。总的来讲,4个养殖地的紫红笛鲷群体之间的遗传距离差异较小,但与野生群体的遗传距离相对较大,UPGMA聚类分析明显将养殖群体与野生群体分开,表明紫红笛鲷养殖群体已经与野生群体存在一定程度的遗传隔阂。     

紫红笛鲷线粒体全序列与笛鲷属鱼类分化年代的贝叶斯分析

利用常规 PCR 未纯化产物直接测序的方法,获得紫红笛鲷(Lutjanus argentimaculatus)全长为16543 bp 线粒体 DNA 全序列, GenBank 登录号为 JN182927.结合 GenBank 中的已有数据比较分析表明:紫红笛鲷与笛鲷属(Lutjanus)线粒体基因组成基本一致,符合脊椎动物的特征,各基因间进化速率差异显著;13个蛋白编码基因拼接序列贝叶斯建树的后验率显著高于单基因或全序列,更适用于笛鲷属的贝叶斯法系统分化分析和年代推断;13个蛋白编码基因及其拼接序列进行的系统进化分析均支持紫红笛鲷与勒氏笛鲷(Lutjanus russellii)及海鸡母笛鲷(Lutjanus rivulatus)亲缘关系较近;基于13个蛋白编码基因拼接序列的贝叶斯松散分子钟推算出笛鲷属鱼类两个主要支系大约在61.5Ma 前古新世的达宁阶与蒙蒂阶交界时期发生分化.     

大亚湾紫红笛鲷野生群体遗传多样性的RAPD分析

紫红笛鲷野生群体样品取自广东大亚湾海区,取背部肌肉,提取DNA,用RAPD技术检测遗传多样性。40个随机引物当中,有11个引物得到了条带清晰、位点较多且重复性好的电泳图谱。11个引物共得到76个条带,其中48个多态位点,多态位点比例为63.16%。平均遗传距离为0.2144。遗传多样性指数为0.1876。结果显示,大亚湾海区的紫红笛鲷具有较丰富的遗传多样性,工程建设以及人为捕捞等对紫红笛鲷的遗传结构影响不明显。在该海区进行紫红笛鲷的养殖,可以选择野生紫红笛鲷作为亲本培育种苗,但应该注意合理的保护,防止遗传多样性的丧失。     

紫红笛鲷繁殖特性及诱导产卵的初步研究

描述紫红笛鲷Lutjanusargentimaculatus繁殖特性及人工诱导产卵的试验结果。紫红笛鲷养殖群体具有不完全的先雄后雌的性转化现象。1、2龄鱼全部为雄鱼,性腺成熟系数(GSI)为2.07%—4.85%;3龄亲鱼80%为雄鱼,20%转化为雌雄同体;4龄亲鱼性别转化基本确定,多数亲鱼为纯粹具有生殖机能的雄鱼,而在雌雄同体的亲鱼性腺中具有明显雌性第一性征的雌鱼仅占30%左右;雌雄同体的亲鱼性腺GSI为4.12%—8.09%,其中的卵巢GSI小于2%,4龄雌鱼怀卵量约70—100万粒;紫红笛鲷卵母细胞属非同步性发育,一个生殖季节能多次产卵。试验结果表明:低剂量的LHRH A2(3μg·kg-1)多次注射能有效地促进性腺发育、逐步成熟,并最终产卵,但对卵径小于300μm的亲鱼卵巢没有明显的诱导效果。在5μgLHRH A2+1000I UHCG·kg-1或5μgLHRH A2+500IUHCG·kg-1两种不同剂量的混合激素作用下,亲鱼的性腺都能迅速发育成熟,并能在小型循环式产卵池中自然产卵和受精。在水温为26.0—29.5℃的产卵池中,激素效应时间为35—43h。LHRH A2和HCG混合激素对卵母细胞直径达到400μm以上的紫红笛鲷亲鱼具有良好的促熟和催产效果,催产率达100%。如何减轻亲鱼之间相互残杀是改善雄鱼生理状况、保证雄鱼质量和提高卵子受精率必需解决的重要问题。     

不同食物对紫红笛鲷幼鱼的生长和氮排泄的影响

以紫红笛鲷Lutjanusargentimaculatus幼鱼为研究对象,进行了摄食水平和食物种类对其生长和氮排泄影响的实验。结果表明,投喂鳗鱼饲料的紫红笛鲷幼鱼的特定生长率(SGR)为4.19%·d-1,投喂斑节对虾Penaeusmonodon肉和蓝圆Decapterusmaruadsi肉组的特定生长率分别为3.83%·d-1和3.90%·d-1;不同食物组的紫红笛鲷幼鱼的氮排泄率存在差异,以投喂鳗鱼饲料组的幼鱼最高,个体氮排泄率为4.080mg·尾-1·d-1,而投喂斑节对虾肉和蓝圆肉组的幼鱼个体氮排泄率分别为3.759和3.869mg·尾-1·d-1,摄取3种食物的紫红笛鲷幼鱼的氮排泄率(NE)和氮摄取率(NI)均为直线关系,直线方程分别为NE1=2.107+0.310NI1,NE2=1.749+0.316NI2,NE3=1.879+0.348NI3。     

试验水槽中多种人工鱼礁模型组合对紫红笛鲷幼鱼的诱集效果

摸清多种人工鱼礁模型组合对紫红笛鲷幼鱼的诱集效果,可为人工鱼礁礁体组合设计和礁区布局设计等方面提供科学依据.本研究参照深圳杨梅坑人工鱼礁区的实际建礁情况,制作并模拟4组三种模型礁体组合、4组四种模型礁体组合,在方形试验水槽中以鱼类行为学的方法研究了这8组模型礁体组合对紫红笛鲷的诱集效果.4组三礁组合礁体模型试验结果表明,FHJ三礁组合对紫红笛鲷的集鱼效果非常明显,BFH、BCG、CHJ三礁组合对紫红笛鲷的集鱼效果较为明显.其诱集效果排序为:FHJ组合礁(53.84%)>BFH组合礁(44.85%)>BCG组合礁(38.11%)>CHJ组合礁(36.01%).4组四礁组合礁体的试验结果表明,4组四礁组合礁体模型对紫红笛鲷均具有较强的诱集效果,其诱集效果排序为:BGHJ组合礁(52.27%)>CFHJ组合礁(51.26%)>BCGJ组合礁(50.01%)>BCGH组合礁(45.05%).总体上,四礁组合的诱集效果优于三礁组合,人工鱼礁建设的礁群配置以多礁组合为佳.     

四种海水养殖鱼类血清免疫球蛋白的分离纯化及分子量测定

利用Protein A-sepharose亲和性层析一步法，首次分离纯化了4种海水养殖鱼类（3种暖水性鱼类：紫笛鲷Lutjanus argentimaculatus,青石斑鱼Epinephelus awoara，尖吻鲈Lates calcarifer和1种冷水性鱼类牙Ping Paralichthys olivaceus）血清中的免疫球蛋白（Ig)。3种暖水性鱼类Ig的分离效果较好，牙Ping较差。层析曲线的洗脱峰值说明牙Ping血清的Ig同紫红笛鲷，青石斑鱼，尖吻钙3种暖水性鱼类血清的Ig在结构和功能上有明显的差异。通过SDS－PAGE电泳测得其重链分子量分别为紫红笛鲷79.5kDa和75.0kDa，青石斑鱼77.2kDa，尖吻鲈81.8kDa和75.7kDa，牙Ping 73.5kDa，轻链分子量分别为30.1kDa，31.1kDa,29.7kDa和15.0kDa。     

抗鳗弧菌单克隆抗体免疫保护作用的实验研究

本文对鳗弧菌感染牙鲆幼鱼为动物模型,对我们制备的五株抗鳗弧菌单抗４Ａ６,３Ｂ２,４Ｅ１２,３Ｅ７,３Ａ４的免疫保护效果进行了研究,结果表明：４Ａ６,３Ｂ２和４Ｅ１２具有明显提高受５ＬＤ＾５０鳗弧菌感染的牙鲆存活率的作用,同时它们还可明显延长受大齐量鳗弧菌（１０ＬＤ＾５０）感染的牙鲆的平均存活时间,揭示：４Ａ６,３Ｂ２和４Ｅ１２具有中和或减弱鳗弧菌毒性的作用。     

牙鲆(Paralichthys olivaceus)红细胞单克隆抗体与五种养殖鱼类血细胞的交叉反应

以牙鲆血细胞为抗原免疫Balb／c小鼠，选用聚乙二醇(PEG)作为细胞融合剂，将免疫的小鼠脾细胞与P3 X63 Ag8U1骨髓瘤细胞融合，筛选、克隆出3株生产抗牙鲆红细胞单克隆抗体(Mabs)的杂交瘤细胞(1C7、286、3A1)。应用免疫荧光抗体法(IFAT)研究3株单抗与5种常见养殖鱼类(大菱鲆、花鲈、真鲷、许氏平鲉、鲫鱼)红细胞的交叉反应，结果显示，3株单抗与5种鱼类红细胞有不同程度的阳性反应；应用Western blotting法分析单抗识别的蛋白分子量，结果显示，单抗1C7与大菱鲆血细胞结合的蛋白分子量为52kD、47kD、45kD、32kD、29kD、27kD，与花鲈、许氏平 结合的蛋白分子量是52kD、29kD，与真鲷结合的为29kD，与鲫鱼结合的为44kD、29kD、28kD；单抗286与大菱鲆、花鲈血细胞结合的蛋白带分子量是30kD、28kD，与真鲷结合的为30kD，与许氏平 结合的为29kD、28kD；单抗3A1没有Western blotting反应。结果表明，这6种鱼红细胞存在相同或相似的抗原决定簇，蛋白成分具有相似性。     

6种笛鲷属鱼类Cyt b基因片段序列的比较

采用聚合酶链式反应直接测序法，获得紫红笛鲷(Lutjanus argentimaculatus)、白星笛鲷(L．stellatus)、千年笛鲷(L．sebae)、勒氏笛鲷(L．russelli)、红鳍笛鲷(L．erythropterus)5种笛鲷属鱼的线粒体细胞色素b(Cyt b)425bp序列，并结合基因库中的斜带笛鲷(L．decussatus)Cytb同源序列进行比较分析，共发现88个核苷酸位点存在变异(20．7％)。用MEGA2．1软件中的Pairwise distance工具计算了6种笛鲷属鱼类的相对遗传距离，表明6种笛鲷属鱼类的序列差异在0．096-0．129之间，其中红鳍笛鲷和紫红笛鲷序列差异最大为0．129，千年笛鲷与红鳍笛鲷的序列差异最小为0．096；序列变异的转换／颠换比值较低，平均只有2．160。     

抗杂交鳢(Channa argus×C. maculate)弹状病毒卵黄抗体制备及ELISA检测方法的建立

为确定杂交鳢(Channa argus×C. maculate)弹状病毒卵黄抗体效价水平消减规律并验证抗体对病毒的中和能力,采用杂交鳢弹状病毒灭活疫苗免疫蛋鸡,使用醋酸-醋酸钠-辛酸法制备卵黄抗体,建立间接ELISA检测方法以监测卵黄抗体产生过程抗体水平消减情况,以中和试验评估卵黄抗体中和杂交鳢弹状病毒效果。结果显示, ELISA检测方法 最佳条件为抗原包被浓度0.5×10^5.8 TCID₅₀/0.1 mL, 37℃包被2 h, 37℃封闭2 h。与大口黑鲈蛙虹彩病毒卵黄抗体、SPF蛋黄提取物、免疫前蛋黄提取物以及MBC空细胞均无交叉反应。以S/N(sample/negative)>2.1且敏感性最高为标准确定阳性、阴性样品。卵黄抗体于首免后28 d产生效价,四免后达到最高水平,效价为1︰25 600,平台期可持续40～60 d,通过中和抗体检测结果证明平台期内抗体中和效价在免疫周期内最高,约为46.3。通过ELISA检测方法对卵黄抗体产生规律进行监测,通过中和检测方法评估卵黄抗体中和病毒效果。高滴度卵黄抗体具有被开发为新型抗杂交鳢弹状...     

乙酰褐藻酸丙二酯的制备与表征

为了改变褐藻酸丙二酯的溶解性,本文以氢碘酸为催化剂,将褐藻酸丙二酯与乙酐反应,制备了乙酰褐藻酸丙二酯。生成物不溶于水,可溶于多种中等极性的有机溶剂。本文用IR,~1H-NMR,HGPC对其进行了表征,并对反应条件对产率的影响进行了探讨。