中华绒螯蟹多倍体诱导技术改进

采用抑制第二极体排放的方式对15℃孵育的中华绒螯蟹自然受精卵人工诱导三倍体,通过抑制第一次卵裂对18℃孵育的自然受精卵人工诱导四倍体,应用流式细胞仪进行倍性鉴定.分别使用CB,6-DMAP和KCl三种试剂对受精卵处理,发育至囊胚期检测,获得的最高三倍体诱导率依次是49.1%,51.7%和77.5%,获得的最高四倍体诱导率依次是50.3%,54.9%和79.8%.使用KCl试剂对抱卵蟹诱导处理,孵出潘状幼体检测,最高三倍体诱导率为85.3%,最高四倍体诱导率为27.3%.克服了以往三倍体诱导中离体培养的困难,首次获得了中华绒螯蟹三倍体潘状幼体,并极大提高了潘状幼体阶段四倍体诱导率.     

用mRNA差异显示技术分析中华绒螯蟹早期发育的基因表达

用中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis)未受精卵、受精卵、二细胞胚、囊胚、原物胚为材料，提取总RNA，分别用Oligod T12GA、GC、AC3种锚定引物合成以上5种材料的cDNA第一链，然后以此cDNA为模板用30种随机引物进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳分析。得出了5个早期发育的特异表达片段。结果表明，未受精卵、受精卵、二细胞胚之间的差异不大，都表面为母型调控，囊胚期有新mRNA的转录，开始进入合子型调控。     

氯化钾诱导中华绒螯蟹三倍体参数的优化

基于受精卵早期发育形态学的观察,对利用氯化钾诱导中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)三倍体的条件进行了优化.实验结果表明:中华绒螯蟹受精卵在产出后经历了变圆、体积膨大及卵黄团物质位置移动的过程;在15℃下,中华绒螯蟹受精卵在产出后40 min左右释放第一极体,80 min左右孵化膜形成并举起,5 h左右第二极体释放;氯化钾诱导中华绒螯蟹三倍体的优化参数为:产卵后1.5～2.0 h,用6 g/L的氯化钾处理4 h;孵化膜形成并举起可以作为中华绒螯蟹三倍体诱导开始点的形态学标记,其最高诱导率可以达到100%.实验结果为实现中华绒螯蟹三倍体苗种的批量生产提供了参考和依据.     

Cytochalasin B induced triploidy in Penaeus chinensis

ＣｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢｉｎｄｕｃｅｄｔｒｉｐｌｏｉｄｙｉｎＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ￥ＢａｏＺｈｅｎｍｉｎ，ＺｈａｎｇＱｕａｎｑｉ，ＷａｎｇＨａｉａｎｄＤａｉＪｉｘｕｎ（ＲｅｃｅｉｖｅｄＡｐｒｉｌ５，１９９３；ａｃｃｅｐｔｅｄＡｕｇｕｓｔ１...     

半滑舌鳎三倍体诱导研究

采用冷休克抑制第二极体排出的方法诱导了半滑舌鳎三倍体,并探讨了三倍体诱导的最佳条件.通过流式细胞仪倍性检测和染色体观察验证各组三倍化率.结果显示:在受精后5 min开始,将受精卵放在4℃海水中进行冷休克处理,持续时间为20 min,三倍体诱导率最高为35％.通过对三倍体染色体进行分析,辨认其雌雄染色体型为ZWW/ZZZ,出现频率为1∶1,没有发现ZZW型雌鱼,暗示半滑舌鳎Z染色体和W染色体之间的交叉和互换受到严重抑制.     

杂色鲍和九孔鲍三倍体的化学诱导

本文首次报道了用化学药物法（ＣＢ、咖啡因以及高ＰＨ高钙溶液）休克杂色鲍和九孔鲍受粗卵诱导产生三倍体的试验结果。结果表明,用ＣＢ诱导杂色鲍,三倍体诱导率高达５９．０￣７６．２％;用咖啡因诱导杂色鲍和九孔鲍,三倍体导率低,分别为３０￣２０％。本就它们在诱导中的作用机理进行了讨论。     

Effects of salinity on embryonic and larval development of Chinese mitten crab Eriocheir sinensis(Decapoda: Brachyura) and salinity-induced physiological changes

To investigate the effects of salinity on early development of Chinese mitten crab ( Eriocheir sinensis ), and the salinity tolerance mechanism of embryos, different developmental stages of embryos (gastrula, eyespot and pre-hatching stage), and hatched stage I zoea and megalopa, were exposed to a range of salinities (1, 5, 10, 15 (control), 20, 25, 30, 35 and 40). Hatching, survival and molting were monitored. Effects of 24-hour hypersaline (35) and hyposaline (1) stress on egg diameter, water content, Na +/K +-ATPase (NKA) activity, and crustacean hyperglycemic hormone (CHH) gene mRNA expression in embryos and megalopa, are reported. Embryos are more tolerant of low (≤ 5) than high (≥25) salinities, with optimum ranges for gastrula and pre-hatching stage embryos being 5-20, and for eyespot embryo and stage I zoea, 10-20. Most megalopa can molt to the first juvenile instar by day 5 at salinities between 1 and 40, whereas molting of megalopa stages was delayed at 40. Hypersaline conditions resulted in a loss of moisture, reduction of egg volume, and a signifi cant increase in NKA activity and CHH mRNA expression at some developmental stages. Hyposaline conditions did not affect moisture content or egg volume, but resulted in decreased NKA activity and CHH mRNA expression in embryos. For megalopa stages, NKA activity was significantly upregulated following both hypo- and hypersaline stress. Our results suggest high salinity will inhibit development and hatching of E. sinensis embryos, and low salinity will affect the survival of their stage I zoea. Increased NKA activity in embryos and megalopa stages might indicate a hyporegulation response under hypersaline conditions. These findings provide useful information for spawning ground protection of indigenous E . sinensis and enrich the knowledge of embryonic tolerance mechanisms of hyperregulating crustaceans following osmotic stress.     

香港巨牡蛎♀×太平洋牡蛎♂异源三倍体的初步研究

本文以香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和太平洋牡蛎(C.gigas)为研究对象,进行牡蛎异源三倍体研究试验。在水温25℃条件下,香港巨牡蛎剥离卵子于海水中浸泡促熟1.5h后,与太平洋牡蛎精子受精,获得最高卵裂率为(24.40±3.79)%。受精后20min,采用盐度为10的低渗海水处理杂交受精卵25min,可获得68.65%的异源三倍体幼虫,孵化率为12.71%。异源三倍体幼虫的存活率和生长率均未表现出优势。受精后第9天,异源三倍体幼虫的存活率仅为(0.116±0.023)%,平均壳长为(103.50±0.85)(m;对照组的存活率和壳长分别为(42.17±2.74)%和(123.25±8.60)μm。幼虫在附着变态前死亡。     

海蜇人工授精的研究

根据海蜇的产卵习性,进行了两种不同方法的人工授精实验。结果证明:海蛰是可以进行人工授精的,受精后孵化率与受精时间有关,受精卵发育成浮浪幼虫后,能正常变态附着为螅状体。     

6—DMAP抑制九孔鲍受精卵第二极体的释放诱导三倍体

当50％九孔鲍受精卵出现第一极体后，用6－DMAP不同的浓度进行不同的持续时间诱导三倍体。结果表明，6－DMAP的诱导浓度为300μmol/dm^3、诱导持续时间为10min时，其诱导的三倍体率为90％以上，并且胚胎的孵化率高达85％，幼体的畸形率较低，为50％－55％。用该方法多次进行了九孔鲍三倍体生产诱导和苗种培育试验。本文还对6－DMAP的作用机理以及九孔鲍三倍体诱导中的诱导因子等问题进行了讨论。     

毛嵌线螺的研究Ⅰ.繁殖及幼虫发生特征

毛嵌线螺(Cymatium pileare)的繁殖过程包括交配、产卵、孵育及幼虫从卵囊中游出等4个阶段。交配一般在产卵前10～15d进行,产卵后母体并不离开卵群,而是持续静伏在卵群的开口上进行孵育,直至其中的幼虫离开卵囊。温度和盐度对毛嵌线螺受精卵的发育有重要影响,在22～30℃的适宜温度区域内,将受精卵孵育成能自由生活的晚期面盘幼虫需438日度左右的总积温。毛嵌线螺受精卵的发育与其他前鳃类腹足动物相似,包括卵裂、囊胚期、原肠期及面盘幼虫期4个阶段。     

两种方法诱导太平洋牡蛎三倍体在生产上的应用效果

本文就太平洋牡蛎三倍体育苗中，常用的低温休克法和6－DMAP法进行了生产性试验比较。其结果为：在三倍体诱导率方面，低温休克的三倍体率低且不稳定，6－DMAP法诱导三倍体率高且稳定；在生长方面，低温休克法诱导的三倍体在养成期的生长和成活均差于6－DMAP法诱导的，三倍体率差异明显，但在幼虫期二者差异不显著。     

不同卵密度对太平洋牡蛎三倍体诱导效果影响的研究

本实验主要研究用70mg／L浓度的6－MDAP（二甲基氨基嘌呤）对太平洋牡蛎的受精卵进行三倍体诱导，研究受精卵的密度对诱导效果的影响，以及诱导后受精卵的孵化率和畸形率。实验结果表明：当受精卵的密度为4万个／ml时三倍体率最高，相应的孵化率最高，综合来看，4万/ml的卵密度是生产上较好的受精卵处理密度。     

栉江珧第1卵裂抑制型雌核发育二倍体人工诱导的研究

利用6-二甲基氨基嘌呤(60 mg/L;6-DMAP)抑制第一卵裂,成功诱导出栉江珧(Atrina pectinata)雌核发育二倍体.研究结果表明在培养温度为24℃的条件下,受精后60 min用质量浓度为60 mg/L的6-DMAP处理栉江珧受精卵15 min进行雌核发育二倍体的诱导效果理想,D形幼虫发生率和诱导率分别为14.7%和22.7%.细胞学观察显示,6-DMAP阻止了纺锤体的形成和染色体的移动,导致一个融合的二倍性雌性原核的形成.本研究结果首次提供了栉江珧雌核发育二倍体的细胞学证据.     

栉孔扇贝第1卵裂抑制型雌核发育二倍体的研究

利用6-二甲基氨基嘌呤(60μg/cm3;6-DMAP)和细胞松弛素B(0.5μg/cm3;CB)抑制受精卵的第1次卵裂,授精后60和65 min分别用CB和6-DMAP持续处理20和15 min,可诱导出12.5%和27.5%的第1卵裂抑制型雌核发育二倍体.细胞学观察显示,6-DMAP抑制第1次卵裂产生的雌核发育二倍体主要在第1次有丝分裂后期的受精卵,由于破坏了纺锤体和阻止了染色体分离,导致一个二倍性雌核的形成,而CB有效地阻止了第1次卵裂的胞质分裂.尽管倍化率和D型幼虫发生率较低,但该研究首次报道了栉孔扇贝第1卵裂抑制型雌核发育二倍体诱导的可行性.     

氯化钾诱导仿刺参(Apostichopus japonicus)幼虫附着变态的研究

以不同浓度的氯化钾(KCl)溶液处理仿刺参(Apostichopus japonicus)樽形幼虫,处理不同时间后,分析KCl对仿刺参幼虫附着变态的诱导作用。结果表明,使用较低浓度的KCl溶液(10、30和50 mmol/L)分别诱导仿刺参樽形幼虫6、12和24 h均可以显著提高其附着变态率,诱导24 h附着变态率分别提高27.67%、32.67%和19.67%。较高浓度的KCl溶液(100、300和500 mmol/L)也可以诱导仿刺参幼虫附着变态,但随着KCl浓度的升高和诱导时间的延长,幼虫死亡率逐渐升高。低浓度KCl溶液,特别是在30 mmol/L诱导仿刺参幼虫12 h时,可以显著提高幼虫的附着变态率,增加发育的同步性,降低死亡率,对仿刺参幼虫变态的诱导效果较好。     

热休克诱导斑马鱼异源三倍体的研究

于１９９７年５月在广东省珠海市集斑马鱼和豹纹斑马鱼,采用热休克方法研究阻止第三极体排放诱导异源三倍体斑马鱼的适宜条件。按正交实验方案组合诱导参数,结果表明：在卵受精后２ｍｉｎ,采用３９℃持续处理２ｍｉｎ,三倍化率可达５３．８％,原肠期相对存活率为９１．０％,尾芽期相对存活率为９１％,孵化期相对存活率为９１．１％。本研究分析了热休克处理的参数与三倍体出现率和胚胎相对存活率的关系,并得出诱导参数中起始     

皱纹盘鲍三倍体生长的初步研究

将用低温休克法和细胞松弛素B诱导法,获得的皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)三倍体诱导群与二倍体的个体,在室内同样条件下饲育,对其生长情况进行了比较,结果表明:(1)三倍体与二倍体的当年稚鲍在壳长和体重的增长上无明显差异。(2)三倍体与二倍体的2龄鲍,在第二年前期生长无明显差异,但从第二年后期开始,三倍体的壳长、体重增长逐渐优于二倍体。(3)统计学分析表明,三倍体与二倍体的3龄鲍在体重、软体部和足肌的增长方面,存在着明显差异。(4)在室内饲育19个月的鲍,三倍体诱导群的壳长比二倍体大10.2％,体重比二倍体大20.1％,足肌湿重比二倍体大17.6％。     

盘鲍三倍体及二倍体生长的比较

在室内工厂化养殖条件下 ,于 1 997年 1 0月对正常盘鲍二倍体个体及用细胞松驰素 B诱导法获得的盘鲍三倍体群的生长情况进行了比较。结果表明 :(1 )在育苗期的 1 4月龄内 ,盘鲍的三倍体群与二倍体个体间在生长上无明显差异 ;(2 ) 1 4月龄后盘鲍的三倍体群与二倍体个体间在生长上出现分化。两周龄的盘鲍三倍体群在壳长和体重上分别比二倍体个体大 1 4.76 %和5 0 .1 9%;两周龄半的盘鲍三倍体群在壳长和体重上分别比二倍体个体大 2 0 .0 0 %和 41 .89%;(3 )如按 6 cm壳长作为商品盘鲍的标准 ,则盘鲍三倍体群只需养殖 2 6个月 (包括育苗期 )即可达到商品盘鲍的标准 ,而二倍体个体则需养殖 3 0个月 (包括育苗期 )。由此可见 ,三倍体商品盘鲍比二倍体商品盘鲍在养殖时间上可缩短 4个月 ;(4)盘鲍三倍体群与二倍体个体群的氨基酸组分相同 ,但盘鲍三倍体群的氨基酸总量比二倍体个体的氨基酸总量高。     

Transcriptome of Eriocheir sinensis under air exposure

Chinese mitten crab,Eriocheir sinensis,is an economically important crab in China.Air exposure is a common stress for E.sinensis,especially during the harvest a...