创伤弧菌疫苗对青石斑鱼的免疫学效应和安全性

弧菌病是海水网箱养殖石斑鱼Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ主要疾病之一。本文利用致病菌－创伤弧菌Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ强毒菌株制备出安全性很高的福尔马林灭活疫苗（ＦＶ）和热灭活疫苗（ＨＶ）。这两种疫苗无论使用佐剂与否，通过肌肉注射接种青石斑鱼Ｅ．ａｗｏａｒａ都能使鱼体在较短时间内产生较强的体液免疫应答，而且抗体效价能维持较长时间。免疫学的青石斑鱼获得了良好的免疫保护力。     

网箱养殖青石斑鱼河流弧菌病研究

随着养殖规模的扩大 ,病害问题日益严重 ,严重地制约着石斑鱼养殖业健康发展。刘秀珍等１９９４年报道创伤弧菌是石斑鱼的病害弧菌病的病原。本文作者对１９９９年夏季厦门市同安区琼头村网箱养殖石斑鱼的严重病害进行了研究 ,试图能为养殖青石斑鱼（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓａｗｏａｒａ）的病害防治提供理论依据。１材料与方法１．１试验用鱼患病石斑鱼取自同安区琼头村养殖网箱 (体重９７～２４５ｇ) ;健康石斑鱼购自厦门火烧屿养殖网箱 (体重８１～１１４ｇ) ,暂养备用。１．２病原菌的分离将病鱼体表清洗消毒后 ,用无菌操作方法从肝脏、…     

海水网箱养殖石班鱼病原菌研究

从网箱养殖的石斑鱼Ｅｐｉｎｅｐｈｙｅｌｕｓｓｐ．中分离出一种致病菌－创伤弧菌Ｖｉｂｒｉｏｖｕｌ－ｎｉｆｉｃｕｓ。本文报道该病原菌的分离，形态，毒力，生理生化特性。该菌毒力较强，感染死亡率可达８０％以上。     

黑鲷和青石斑鱼对气泡幕反应的比较

在室内水池中观察了黑鲷（Ｓｐａｒｕｓｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｕｓ）和青石斑鱼（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓａｗｏａｒａ）对孔径０．５ｍｍ、孔距５．０ｃｍ，空气压力０．２５ｋｇ／ｃｍ２固定气泡幕的反应。结果表明，气泡幕对两种海水鱼都有显著的阻拦作用，平均阻拦率分别为黑鲷７５．１％、青石斑鱼８２．４％。分析显示，气泡幕对两种鱼的阻拦率间无显著差异。在本实验中，该两种鱼对气泡幕均无明显的适应现象     

饵料维生素C对青石斑鱼的非特异性免疫调节作用

调查了饵料维生素Ｃ对青石斑鱼Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓ ａｗｏａｒａ非特异性的体液和细胞免疫作用。在冰冻饵料鱼中添剂加不同剂量的维生素Ｃ（每公斤饵料鱼含量分别为０,５００,１０００,１５００和２０００ｍｇ）,连续投喂青石鱼２０周后,青石斑鱼血液白细胞总数及不同种类白细胞（包括淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞）组成比例不受饵料维生素Ｃ的影响。青石斑鱼血清补体经典型溶解羊红细胞的能力随乌料维生素Ｃ添加量的提     

检测海洋弧菌的酶联免疫吸附试验研究

研究建立中国对虾病原菌┐副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）快速检测技术。间接ＥＬＩＳＡ技术中的副溶血弧菌的特异抗血清由家兔制备，羊抗兔ＩｇＧ用碱性磷酸酶标记，酶的底物为对磷酸基硝基苯。将该技术标准化后，测定了抗血清与１３株其它副溶血弧菌菌株及２９株其它弧菌标准菌株的交叉反应，并进行了苗期对虾样品中副溶血弧菌的检测     

南海鱼类寄生粘孢子虫的研究：Ⅰ.角形虫属五新种

在南海鱼类胆囊中发现寄生粘孢子虫角形虫属五新种。其中的肾形角形虫Ｃ．ｒｅｎｉｆｏｒｍａ和石斑角形虫Ｃ．ｅｐｉｎｅｐｈｅｌａ寄生于赤点石斑鱼Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓａｋａａｒａ，桂山角形虫Ｃ．ｇｕｉｓｈａｎｅｎｓｉｓ寄生于青石斑鱼Ｅ．ａｗｏａｒａ，陈氏角形虫Ｃ．ｅｈｅｎｉ寄生于黄鳍鲷Ｓｐａｒｕｓ ｌａｔｕｓ，Ｊｉ角形虫Ｃ．ｃｌｕｐａｎｏｄａ寄生于斑Ｊｉ Ｃｌｕｐａｎｏｄｏｎ ｐｕｎｃｔａｔｕｓ．     

中国对虾血淋巴抗菌活力的测定

采用溶藻胶弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ）、副溶血弧菌（Ｖ． ｐａｒａｈａｅｍ ｏｌｙｔｉｃｕｓ）、哈维氏弧菌（Ｖ．ｈａｒｖｅｙｉ）、嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍ ｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）对中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）血浆样品、血细胞溶解物（ＨＬＳ）样品的抗菌活力进行了测定。表明中国对虾血浆样品对四种细菌均表现出一定的抗菌活力。其中,三种弧菌活细胞数在孵育１ｈ 时呈现最低;嗜水气单胞菌活细胞数在孵育４ｈ 时最少。在三种弧菌中,血浆样品对哈维氏弧菌表现出的抗菌活力最强,而对副溶血弧菌表现出的抗菌活力最弱。血细胞溶解物样品对三种弧菌几乎没有表现出抗菌活力;嗜水气单胞菌在与血细胞溶解物样品孵育２ｈ 时,其活细胞数呈现最低,说明血细胞溶解物样品对该菌表现出了一定的抗菌活力。由此显示,抗菌活力在中国对虾血浆样品中表现得较强,而在血细胞溶解物样品中表现得较弱,血淋巴抗菌因子可以在短时间内对细菌表现出其最强的活力,但对不同种细菌其抗菌作用强弱不同。     

海水鱼类病原弧菌对对虾的致病力及其疫苗的免疫预防

鱼类致病弧菌（溶藻弧菌Vibrio alginolyticus, 创伤弧菌V.vulnificus，河弧菌生物Ⅰ型V.fluvialis Ⅰ，鳗弧菌Ⅴ.anguillarum和副溶血弧菌Ⅴ.parahaemolyticus）同样可使斑节对虾Penaeus monodon患病，现对斑节对虾的致病性和免疫保护力作了研究。通过肌肉注射感染实验，发现5种弧菌对斑节对虾均有不同的致病作用。从5种弧菌中筛选出强毒株，以其制成福尔马林灭活疫苗。通过注射、浸浴和投喂等3种方式接种的斑节对虾，除投喂效果不明显外，注射和浸浴接种均有一定的免疫保护力。在注射接种组中，随着疫苗浓度的提高，其免疫力有升高的趋势。说明在鱼虾的弧菌病中，疫苗能起到共同的防御效果，为商用鱼虾疫苗的生产提供了可能。     

海水网箱养殖石斑鱼病原菌研究

从网箱养殖的石斑Ｅｐｉｎｅｐｈｙｅｌｕｓｓｐ．中分离出一种致病菌——创伤弧菌Ｖｉｂｒｉｏｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ。本文报道该病原菌的分离、形态、毒力、生理生化特性。该菌毒力较强，感染死亡率可达８０％以上。     

超声波对青石斑鱼体表吸收氯霉素能力的影响

应用超声波对8－20cm青石斑鱼体表吸收能力的影响研究表明，超声波的超声强度和作用时间及及浸泡的氯霉素溶液的浓度对青石斑鱼体表吸收氯霉素的能力有显著影响，且呈正相关关系。此外，不同的超声作用方法也能显著影响实验石斑鱼的体表吸收能力，其中，超声后浸泡和浸泡后超声以及脉冲超声比连续超声均能更显著地提高石斑鱼的体表吸收能力。     

青石斑鱼抗细胞凋亡因子DAD1的克隆及表达特征分析

抗细胞凋亡因子(Defender against cell death 1,DAD1)是一种重要的内源性细胞凋亡抑制因子.采用RACE-PCR方法,结合SMART cDNA合成方法、抑制性差减杂交技术,从青石斑鱼脾脏中克隆DAD1并研究其在正常的青石斑鱼和注射了脂多糖的青石斑鱼各组织中的表达模式.结果表明:DAD1基因cDNA全长721 bp,包含一个342 bp的完整阅读框,编码一个由113个氨基酸组成的蛋白.RT-PCR半定量分析显示DAD1在正常的青石斑鱼和注射了脂多糖的青石斑鱼的脾、心、头肾、肾、肝中都有转录,在脾、肝中表达水平较高,而在肌肉中未见明显表达.DAD1在注射了脂多糖的青石斑鱼各组织中的表达量均高于正常的青石斑鱼.     

Serum antibody levels against select bacterial pathogens in Atlantic bottlenose dolphins,Tursiops truncatus,from Beaufort NC USA and Charleston Harbor,Charleston, SC,USA

Concern over the emergence of zoonotic diseases in marine organisms is growing. In response to this concern, this study set out to measure antibody activities against bacterial pathogens in Atlantic bottlenose dolphins, Tursiops truncatus, from the coastal estuaries of NC and SC, USA. Individuals from Charleston SC harbor, a heavily industrialized shipping harbor estuary, and from Beaufort NC, a non-shipping estuary, were examined. Purified IgG was obtained from pooled sera using ammonium sulfate precipitation steps and protein-G procedures, which was then used to generate a panel of IgG-specific monoclonal antibodies. Two of these antibodies, mAbs BB-10-2 (IgG1) and BB-32-2 (IgG2b), were then used to determine total serum IgG concentrations using a sandwich capture ELISA. Circulating IgG levels were variable between individuals and between the two pods. MAb BB-10-2 was then used in an indirect ELISA to determine serum antibody activities against several common marine bacteria as well as the human pathogens E. coli and E. coli strain 0157:H7, Vibrio parahemolyticus, V. vulnificus, V. cholerae, Mycobacteria marinum, M. fortuitum, and M. chelonae. The highest antibody activities were against mycobacteria, two of which are zoonotic pathogens. Males had the highest antibody activities, thus suggesting low cell-mediated immunity against intracellular pathogens in these individuals. T-cell proliferation in response to Con-A, an indicator of cell-mediated immune function, was then measured in the Beaufort population. Males had the lowest proliferation responses, however a negative correlation between antibody activities and T-cell proliferation in individuals could not be established for either of the Mycobacteria species. Overall, antibody activities against all bacteria, including innocuous species such as V. anguillarum, V. natrigens, and M. xenopi were highly variable between individual dolphins and the two pods, with some animals exhibiting very high activities. These studies suggests that dolphin populations should be monitored by following the health and seroprevalence of pathogens of interest in select individual animals over time.     

南极超微细菌ANT52(Alteromonas stellipolaris)外膜蛋白和脂多糖的提取物对黑鲷的免疫活性研究

从南极超微细菌ANT52(Alteromonas stellipolaris)提取粗外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP)和粗脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),分不同处理(OMP、LPS、OMP+LPS)免疫注射黑鲷,在免疫后的第1、7、14、21、28、35天时检测试验鱼的白细胞吞噬活性、溶菌酶活力、抗菌活力以及酚氧化酶活力等非特异性免疫指标的变化.结果表明,自南极超微细菌ANT52提取的LPS及OMP 均能够显著提高黑鲷的白细胞吞噬活性(P<0.05),增强黑鲷血清中的抗菌活力、溶菌酶的活力和酚氧化酶活力(P<0.05).各免疫处理对黑鲷免疫活性的影响效果不同,LPS、OMP单独注射的免疫促进效果优于组合注射(LPS+OMP);且LPS、OMP单独注射的黑鲷各免疫指标基本上在接种后的第28天时最高,而组合注射LPS+OMP在接种后的第21天最高.上述物质表现的免疫作用机理有待于进一步研究.     

6种海洋致病性弧菌36kDa外膜蛋白特性分析

研究本着筛选和制备弧菌共同外膜蛋白亚单位疫苗,用十二烷基肌氨酸钠抽提并结合超速离心的方法提取了鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、鱼肠道弧菌(V.ichthyoenteri)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(V.harveyi)和创伤弧菌(V.vulnificus)6种海洋致病性弧菌的主要外膜蛋白, SDS-PAGE图谱比较发现这6种弧菌都存在36 kDa的外膜蛋白条带.通过电泳洗脱分离纯化这6种弧菌的36 kDa外膜蛋白,并制备了鳗弧菌菌株SJ060621的36 kDa外膜蛋白多抗.ELISA和Western-blot印迹结果显示,仅鳗弧菌SJ060621、S010610-1和哈维氏弧菌的36 kDa外膜蛋白存在免疫交叉反应;双向电泳分析了鳗弧菌SJ060621、S010610-1、哈维氏弧菌和溶藻弧菌的36 kDa外膜蛋白,2-DE图谱显示出鳗弧菌SJ060621和S010610-1均由3种等电点相近的蛋白组成,存在很高的同源性,2株鳗弧菌与溶藻弧菌和哈维氏弧菌在蛋白质组成数量和等电点上都存在较大的差异,结果说明通过主要外膜蛋白的分子量和免疫特性研究,可为筛选不同弧菌共同外膜蛋白的亚单位疫苗提供有利参考.     

抗鳗弧菌单克隆抗体免疫保护作用的实验研究

本文对鳗弧菌感染牙鲆幼鱼为动物模型,对我们制备的五株抗鳗弧菌单抗４Ａ６,３Ｂ２,４Ｅ１２,３Ｅ７,３Ａ４的免疫保护效果进行了研究,结果表明：４Ａ６,３Ｂ２和４Ｅ１２具有明显提高受５ＬＤ＾５０鳗弧菌感染的牙鲆存活率的作用,同时它们还可明显延长受大齐量鳗弧菌（１０ＬＤ＾５０）感染的牙鲆的平均存活时间,揭示：４Ａ６,３Ｂ２和４Ｅ１２具有中和或减弱鳗弧菌毒性的作用。     

致病性鳗弧菌W-1外膜蛋白ompU基因克隆及在大肠杆菌中的表达

从致病性鳗弧菌W-1基因组DNA扩增并克隆了1 156bp的特异性片段,含有完整的外膜蛋白ompU基因阅读框,由993个核苷酸组成,编码330个氨基酸残基的蛋白质。与国外已发表的鳗弧菌外膜蛋白基因的序列同源性为100%,与创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、费氏弧菌(Vibrio fischeri)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的序列同源性分别为72%,69%,68%和64%。将该外膜蛋白基因克隆于pBV220表达质粒,在大肠杆菌中得到了表达,SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子量约38kDa,Western blot分析发现表达蛋白能与鳗弧菌外膜蛋白抗体很好的反应。     

A culture-free method for detection of Vibrio vulnificus from coastal seawater based on loop-mediated isothermal amplification targeting vcgC gene

Vibrio vulnificus is an opportunistic pathogen widely distributed in estuarine and coastal seawaters. In this study, a culture-free method was developed to rapid detection of V. vulnificus in all seasons, based on loop-mediated isothermal amplification (LAMP) targeting virulent-correlated gene (vcg). The new assay method allows differentiation between the virulent and non-virulent strain of V. vulnificus accurately. This method also allows effective detection of the pathogeny in winter when the bacterium lives in the viable but non-culturable (VBNC) state. A total of 30 costal seawater samples collected in all seasons were used for the evaluation of this method. The results show that the method is sensitive, accurate and convenient.     

青石斑外周血细胞显微结构的观察

报道了青石斑外周血细胞的显微结构,血涂片经过wright染色液染色,可区分出:红血细胞、血栓细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等5种血细胞,未发现嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞。白血细胞中,血栓细胞体积最小,单核细胞体积最大;在数量上,血栓细胞最多,淋巴细胞次之,单核细胞和嗜中性粒细胞则较少。青石斑的淋巴细胞可分为以下三种类型:大淋巴细胞、中淋巴细胞和小淋巴细胞。此外,在外周血液中还观察到少量未成熟的红血细胞和嗜中性粒细胞,幼稚型、成熟型和功能衰退型以及三者之间过渡类型的嗜中性白细胞皆可见到。偶尔可见正在分裂的红血细胞及单核细胞,提示红血细胞及白血细胞的部分种类也可在外周血直接分裂。     

副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）tdh2基因和鳗弧菌（Kanguillarum）ompU基因二联DNA疫苗制备及其对大菱鲆（Scophthalmusmaximus）免疫保护作用

采用基因工程的方法,将副溶血弧菌的热稳定直接溶血素基因tdh2和鳗弧菌外膜蛋白基因ompU进行融合,在大肠杆菌中得到表达,并利用该融合基因构建二联DNA疫苗pEGFP．N1／tdh2-ompU。用DNA疫苗按10和50μg／尾的剂量通过肌肉注射免疫大菱鲆,对大菱鲆抵抗致病性副溶血弧菌和鳗弧菌的免疫效果进行研究。结果表明...