海洋微生物潜在的抗肿瘤活性物质的初步筛选

采用生化诱导分析（ＢＩＡ）法对海洋微生物发酵液中潜在的抗肿瘤活性物质进行初步筛选,从供筛选的６５５株海洋微生物中筛选到１６株能产生潜在抗肿瘤化合物的菌株,阳性率约为２．４％。用ＭＴＴ法检测具有强诱导活性的Ｎ３５０菌株发酵液,发现其对Ｐ３３８和ＫＢ肿瘤细胞生长具有很强的抑制作用。这表明海洋微生物能产生以ＤＮＡ为靶点的抗肿瘤活性特,从中可望筛选出有临床应用前景的抗肿瘤药物。     

海洋微生物抗肿瘤活性菌株的分级组合筛选

为探索如何快速获取活性菌株的筛选模式 ,组合使用海虾生物致死法和tsFT2 10细胞的流式细胞术筛选模型 ,对从青岛前海和胶州湾潮间带海泥、动植物样品中分离的 162株海洋微生物 ,进行了抗肿瘤活性的分级组合筛选。经海虾生物致死法一级初筛 ,得到活性菌株 5 8株 (LC50 <5 0 0 μg/mL) ,阳性率为 3 5 .8%。对初筛有效的 5 8株菌利用流式细胞术筛选模型进行二级复筛 ,得到对tsFT2 10细胞有各种活性的活性菌株共 2 5株 ,阳性率为复筛菌株数的 43 .1%、初筛菌株总数的 15 .4% ,其中 ,诱发细胞坏死伴有凋亡诱导活性的菌株 7株 (占总菌株的 4.3 % ) ,具有细胞周期抑制活性的菌株 18株 (占总菌株的 11.1% )。该分级组合筛选模式与流式细胞术筛选模型的单独筛选模式相比 ,无漏筛 ,具有成本低、速度快、宜于大规模筛选等特点。     

海洋微生物抗肿瘤活性产物研究进展

海洋环境造就了海洋微生物有别于陆地微生物的代谢途径,使他们往往能代谢生产与陆地微生物不同的结构新颖、活性独特的抗肿瘤活性产物,从海洋微生物发酵产物中已发现了很多抗肿瘤活性新化合物。本文按化合物结构类型归纳介绍近十几年研究发现的几类较重要的部分海洋微生物抗肿瘤活性产物。     

国外海洋抗肿瘤活性物质的研究与开发

海洋生物是抗肿瘤活性物质的重要来源。近十几年来，已从不同的海洋生物中分离鉴定了许多结构新颖的抗肿瘤活性物质，显示出诱人的研究开发前景。本文综述了目前国外从海洋动物、海洋植物和海洋微生物抗肿瘤活性物质的研究开发进展。     

山东沿海21种海洋无脊椎动物抗肿瘤活性初步筛选

采用四氮唑盐比色法(MTT)测定了21种青岛及其附近海域常见无脊椎动物94％乙醇粗提物对人白血病细胞HL-60和人肺腺癌细胞A-549的抑制率，同时测定了海筒螅Tubuaria marinha Torrey等动物不同极性溶剂萃取物的活性。发现海燕Asterina pectinifera的正丁醇萃取物、海筒螅的乙酸乙酯萃取物、红条毛肤石鳖Acanthochiton rubrolineatus的94％的乙醇提取物对HL-60的抑制作用很强，在浓度为0．063mg／mL时抑制率分别为96．7％、63．9％、50．5％；海筒螅的乙酸乙酯萃取物对A．549的抑制率较高，浓度为0．063mg／mL时的抑制率可以达到65.4%.     

海洋细菌抑菌活性菌株的筛选

从不同海区的海洋底质，生物样，水样中分离到480株海洋细菌，其中包括150株芽孢细菌和108株粪大肠杆菌，利用纸片法对其抑菌活性进行检测，结果表明：117株海洋细菌具有抑菌活性，占总分离菌株的24.4%；一般细菌，芽孢细菌，粪大肠杆菌的抑菌活性菌株分别占各供测菌株的17.1%,27.3%,35.2%；抑菌活性菌株的比例与样品来源密切相关，且各类海洋细菌的抗菌谱有很大的不同。     

海藻抗肿瘤物质的筛选及其活性研究概况

国际上海洋药物研究的热潮自20世纪60年代开始，20世纪70-80年代开展了大规模筛选，迄今为止发现具有抗肿瘤、抗病毒、抗心血管疾病、增强免疫系统等活性的海洋生物活性物质5000余种。海洋天然产物的药理活性侧重于抗肿瘤方面，从海藻中发现的抗肿瘤活性物质占有重要的地位，因为海藻具有较好的生物多样性，而且其多变的生态环境和原始的进化地位使其拥有许多结构独特的活性物质，其研究始于巨大鞘丝藻的脂溶性提取物抗白血病活性的发现。20世纪80年代初美国和日本的科学家开始系统地筛选海藻的抗肿瘤活性物质，发现了许多新的化合物，如从松香藻中分离的Halomon，Scytophycin B目前已进入临床前药理评估阶段。 海洋药物的发展首先应着重可再生资源的开发和利用方面的研究，而海藻是一种取之不尽的药源物质，随着现代化生物技术的发展，特别是生物工程技术的发展和应用，基本上解决了药源藻类的养殖问题，为海藻抗肿瘤物质的研究提供了充足的材料和可行性，迄今海藻抗肿瘤生物活性物质的研究已取得了引人注目的成就。本文根据有关文献着重就海藻中抗肿瘤活性物质的筛选，以及相应的活性化合物作一综述。     

海洋疣荔枝螺体外抗肿瘤活性

荔枝螺是福建海域常见食用螺类,古方记载和民间长期食用证实具有良好药用价值,但国内外对其生物活性物质的研究还较少.本研究以福建海域疣荔枝螺(Thais clavigera)为研究材料,从疣荔枝螺消化腺部位获得抗癌组分E-EA-2,通过液相色谱、气质联用色谱分析发现其主要成分为6-溴靛红(6-bromoisatine),分子结构式C_8H_4BrNO_2.E-EA-2能有效抑制人乳腺癌MCF-7、人肝癌QGY-7703细胞增殖,药物浓度高于40μg/cm~3时,癌细胞存活率显著降低.E-EA-2能诱导肝癌细胞QGY-7703发生PARP蛋白剪切,加入泛caspase抑制剂使细胞存活率显著提高.同时,E-EA-2使MCF-7细胞核产生固缩,线粒体膜电位显著下降,凋亡细胞数量显著增加.E-EA-2对肝癌细胞QGY-7703的IC50为46μg/cm~3,对乳腺癌细胞MCF-7的IC50为28μg/cm~3,对癌细胞的增殖抑制作用主要是以促凋亡方式实现的.     

山东沿海海藻抗肿瘤活性的筛选

于1997年4月和2000年5月对山东沿海海藻进行较系统的采集，对其中39种海藻的96个样品采用高通量方法进行选择性细胞毒筛选，结果表明，小粘膜藻（Leathesia dif-formes)、多管藻（Polysiphonia urcedata)、萱cytosiphon lomentarius)、海萝（Gloiopeliis fur-cata)、叉开网翼藻（Dictyopteris diuaricata)、点叶菜（Punctaria latifolia)等对KB细胞或HT-29细胞具有选择性抑制活性。局醇、氯仿的提取效率较高，多管藻的乙醇、氯仿提取物，萱藻的乙醇提取物和叉开网翼藻的正己烷提取物都有强的选择性细胞毒活性。     

3株海洋来源微生物代谢产物及其抗肿瘤活性

从3株海洋微生物发酵物的抗肿瘤活性部位分离鉴定了放线菌内酯素(1)、2-吡咯酸(2)、5,7,4'-三羟基异黄酮(3)、7,4'-二羟基异黄酮(4)、环(脯-甘)二肽(5)、N-甲酰基-星形孢菌素(6)、过氧化麦角甾醇(7)、6,9-环氧麦角甾-7,22-二烯-3-醇(8)等8个化合物。这些化合物分别产自2株放线菌L39-3(1和2)、L20-1d1(3~6)和1株真菌LJW-110(7和8)。抗肿瘤活性初步测试结果表明,除2和5以外对K562细胞均有不同程度抑制作用,在100μg/mL浓度下的抑制率约在32%~66%范围之内。     

海洋放线菌ACMA006抗肿瘤活性成分的分离纯化及结构鉴定

对从中国江苏连云港海域中筛选出的海洋放线菌ACMA006的发酵产物进行了分离纯化,获得2种抗肿瘤活性化合物,并进一步鉴定其结构．海洋放线菌ACMA006经大规模发酵后,发酵液采用溶剂萃取法提取其中的抗肿瘤活性成分,并利用硅胶柱层析、制备薄层及HPLC等方法对萃取物进行分离得到单体化合物．利用红外光谱、质谱、核磁共振‘H—HMR谱和”C—NMR谱等波谱数据对单体化合物的结构进行解析和鉴定．结果表明化合物B为放线菌素D,其分子式为c62：H86N12016含有2个多肽酯环,由L一苏氨酸、D一缬氨酸、L．脯氨酸、N一甲基甘氨酸和L—N一甲基缬氨酸组成,通过羧基与发色母核吩唾嗪酮相连接．化合物A可能为放线菌素D的衍生物．这是国内外首次从海洋放线菌中分离提取出放线菌素D．     

文蛤多肽的体外抗癌活性研究

采用硫酸铵沉淀、有机溶剂分离、Sephadex G-25分子筛层析等实验方法,从文蛤肉中提取了一种低分子量的多肽,命名为Mer2．本文以溴化二苯偶氮盐（MTT）法检测Mer2对体外培养的癌细胞的抑制作用．结果表明Mer2对体外培养的人肝癌细胞株（HepG2）、宫颈癌细胞株（Hela）、胆管癌细胞株（QBC939）、肺癌细胞株（SPC—A-1和LTEP—a-2）的生长均有很强的抑制作用,且抑制效果随着Mer2含量的增高和处理时间的延长而增强,证明Mer2具有广谱的抗癌活性．其中Mer2对人肝癌HepG2细胞株抑制作用最为显著,光学显微镜观察经Mer2细胞培养液处理后的细胞形态发生明显的改变,流式细胞仪实验的结果表明处理后的细胞周期发生明显的改变,并在G0／G1期前出现凋亡峰．     

从培养的微藻中初步筛选抗菌和抗肿瘤活性物质

从8种微藻中制备水溶和脂溶性的提取物,用来筛选抗菌和抗肿瘤活性.抗菌活性是用抑菌豳法(细菌用金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌和大肠杆菌为指示菌,真菌用黑曲霉和产黄青霉为指示菌).实验选用的所有的微藻均有不同程度的抗一种或多种菌活性,抗金黄色葡萄球菌微藻提取物中的57.14%有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性,采用MTT法体外...     

一株海洋放线菌发酵液抗肿瘤活性初探

用四氮唑蓝(MTT)法对96株海洋放线菌、细菌、真菌的发酵液进行细胞毒活性的筛选,结果显示13%的放线菌和3%的细菌发酵液具有细胞毒活性.其中放线菌ACMA006具有显著细胞毒活性,而且能抑制多种肿瘤细胞的生长.进一步用DNAladder电泳分析和荧光染色法观察到放线菌ACMA006发酵液能明显诱导肿瘤细胞凋亡.这株具有抗肿瘤潜力的放线菌ACMA006值得进一步开发研究.     

胶州湾产蓝色素海洋链霉菌的初步研究

在胶州湾沿海采取泥样和水样,从中分离了300余株海洋链霉菌(marine Streptomyces),并对其生理生化性质作了初步研究,建立了胶州湾海洋链霉菌菌种库。在该菌种库中,约有3%的菌株可产生天然蓝色素。其中一株海洋链霉菌(marine Streptomycessp.)M259能够高产天然蓝色素。M259对绿脓杆菌(Pseudomonas areuginosa)、隐球菌(Crytococcal meningitis)有较强的抑菌活性。对其生理生化性质进行了鉴定,结果表明它可以利用可溶性淀粉、甘油、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、D-半乳糖、果糖、阿拉伯糖、肌醇、木糖、D-甘露糖、核糖等碳源;能利用大部分氮源,尤其对酵母粉的利用很显著;最适生长pH为7.0~7.4;最适培养温度为28~30℃。结果提示它属于蓝色类群,并与天蓝色链霉菌(Streptomyces cyanogenus)和产蓝链霉菌(Streptomyces ceolicolor)亲缘关系最为密切。此外还优化了M259的发酵培养基和培养条件,使得蓝色素在摇瓶条件下,OD590达到7.74。通过对M259所产蓝色素性质的研究,发现此色素水溶性较强,耐热性较好,在酸性条件下呈红色,在碱性条件下呈蓝色。此外,毒性实验的结果表明所提纯的蓝色素没有毒性,为进一步开发和利用该色素提供了可能。     

海洋微生物在船舶用结构钢表面附着成膜过程及其腐蚀研究

通过紫外分光光度计测定了海洋微生物需钠弧菌 Vibrio natriegens 的生长曲线,通过扫描电镜和原子力显微镜观测了该细菌在船舶用结构钢(DH32)钢样表面成膜过程及试样腐蚀形貌,探讨了生物膜的形成过程及其对材料表面腐蚀的影响。结果表明,生物膜的形成过程与微生物生命活动关系密切。根据对比暴露在菌液和无菌培养基中的试样表面形貌,发现细菌的附着及成膜过程的不均匀性,改变了DH32钢样表面的物理和化学状态。细菌附着区与周围形成的氧浓差电池,以及细菌新陈代谢主要产物对金属离子的络合,共同促进了试样局部腐蚀加速。     

不同方法制备的海星皂甙细胞毒性评价

考察超临界CO2萃取、乙醇萃取两种方法制备的南海产多棘海星皂甙的溶血过程,采用分光光度法测定溶血指数,结合红细胞形态血观察,评价其细胞毒性。结果显示,两种方法制备的海星皂甙都具有明显溶血作用,超临界CO2萃取、溶剂萃取的海星皂甙溶血指数分别为19231,12821,超临界CO2萃取的海星皂甙保持了更强的细胞毒性,这为海星皂甙制备工艺的选择,探索其物质基础提供了参考依据。     

海洋无脊椎动物细胞培养与细胞干性的捕获

细胞系的构建在生物学领域具有重要意义,与其他动物(如昆虫)不同,经过数十年的发展,海洋无脊椎动物细胞研究仍停留在原代培养水平,没有建立起克隆化的永生细胞系.本文主要介绍了近年来海洋无脊椎动物细胞培养的研究进展,还介绍了一个基本原理,即海洋无脊椎动物永生细胞系的建立,可以通过捕获细胞的干性而实现.捕获细胞干性的第一条途径...     

海洋真菌Neosartorya fischeri 1008F1的次级代谢产物抑菌及抗肿瘤活性的研究

通过抑菌及抗肿瘤活性实验,明确海洋真菌Neosartorya fischeri 1008F1次级代谢产物中的活性有效组分。应用对峙培养法和生长速率法,对菌株的抑菌活性进行测定。应用MTT法,对菌株的抗肿瘤活性进行测定。应用凝胶(Sephadex LH-20)柱层析的方法,对菌株发酵产物的提取物进行分离。结果发现,海洋真菌Neosartorya fischeri 1008F1的水溶性提取物对番茄早疫菌(Alternaria solani)具有一定的抑制活性。菌株的粗提物浸膏经Sephadex LH-20柱梯度洗脱后,得到的组分B、C、D、E和F。在0.5 g/L的供试浓度下,组分B、C和D对胃癌细胞SGC-7901的抑制率均高于80%,而组分B、C、D、E和F对肝癌细胞BEL-7404的抑制率均高于70%。     

五种海洋鱼类消化道G细胞的定位

应用胃泌素多克隆抗体和链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学方法(SP法),对中华乌塘鳢(Bostrichthys sinensis)、黄鳍鲷(Sparus latus)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)、褐篮子鱼(Sigauns fusces-ens)和大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)消化道胃泌素细胞(G细胞)进行免疫组化鉴别和定位。结果显示:中华乌塘鳢G细胞主要分布在小肠,直肠偶见。黄鳍鲷G细胞仅在小肠发现。牙鲆G细胞大量位于幽门胃和小肠。褐篮子鱼G细胞在幽门盲囊和小肠有少量分布。大弹涂鱼G细胞在贲门胃、幽门胃和小肠均有出现,大量分布于幽门胃。5种鱼类G细胞主要出现在胃和小肠的分布状况,与胃泌素调节胃肠消化吸收的功能相一致。5种鱼类G细胞形态类型多样,提示了胃泌素以不同的内分泌方式参与消化生理过程。