加味丹参饮通过PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制IRI作用的研究

目的：探讨加味丹参饮预处理通过抑瘤基因/磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PTEN/PI3K/Akt）信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用及机制。方法：将75只雄性远交群（SD）大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、加味丹参饮组、加味丹参饮+PI3K/Akt通路抑制剂（LY294002）组、LY294002组,采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30min后再灌注60min的方法制备IRI模型。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组大鼠心肌肌钙蛋白I（cTnI）表达;取心肌梗死边缘区心肌组织,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测心肌凋亡指数,采用免疫组化法检测各组大鼠心肌组织Akt、PTEN的表达。结果：与假手术组比较,模型组cTnI水平显著升高,大鼠心肌凋亡指数增加,PTEN、Akt表达均显著升高（P<0.05）;与模型组比较,加味丹参饮组cTnI水平均显著降低,Akt表达升高,心肌凋亡指数和PETN表达降低（P<0.05）;与加味丹参饮组比较,加入抑制剂后,cTnI水平均明显降低,Akt表达降低,PTEN表达升高（P<0.05）。结论：大鼠心肌缺血再灌注时,加味丹参饮可以通过降低PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,抑制大鼠心肌细胞的凋亡,从而减轻心肌损伤,保护心肌。     

EGb761对视神经损伤后视神经节细胞自噬的影响

目的：观察银杏提取物EGb761对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞自噬活性及自噬流的影响,并探讨其作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为EGb761组和对照组,分别给予EGb761（150mg/kg·d）和0.9%氯化钠注射液灌胃,均每天1次,直到处死。分别于损伤后第7天、第14天取材,采用免疫组化检测2组视网膜神经节细胞自噬相关蛋白LC3B、自噬标记蛋白p62及自噬基因Beclin-1及mTOR通路蛋白p-mTOR、p-S6表达水平,腺病毒GFP-mRFP-LC3荧光瞬时转染技术检测自噬流表达。结果：与对照组相比,EGb761组LC3B表达水平升高,p62、p-mTOR和p-S6蛋白表达水平均下降（均P<0.05）;2组Beclin-1差异无统计学意义（P＞0.05）;2组GFP和mRFP荧光点数比较,EGb761组的红点多于对照组,黄点少于对照组（均P<0.05）。结论：EGb761能够促进大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞自噬流,其机制可能与促进mTOR信号通路中的相关蛋白表达有关。     

月华丸（胶囊）对耐多药结核分枝杆菌感染后细胞自噬的影响

目的：研究月华胶囊对耐多药结核分枝杆菌感染后细胞自噬的影响,以探寻其可能的抗耐多药结核分枝杆菌作用机制。方法：以月华胶囊含药血清作用于耐多药结核分枝杆菌感染的小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）,观察其对感染后细胞自噬的影响。实验分组：①阴性对照组（耐多药结核分枝杆菌+小鼠单核巨噬细胞）;②月华胶囊含药血清组;③月华胶囊含药血清+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组;④阳性对照雷帕霉素组;⑤正常空白组。指标检测：在透视电镜下观察月华胶囊含药血清对耐多药结核分枝杆菌感染的小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）自噬体出现和形成的影响。结果：透射电镜显示,阴性对照组、空白对照组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组中均未见自噬小体;10%月华胶囊含药血清组及阳性对照雷帕霉素组可见自噬小体的出现和形成。结论：月华胶囊含药血清对耐多药结核分枝杆菌感染小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）自噬有促进作用,通过诱导巨噬细胞自噬杀灭结核分枝杆菌可能是月华胶囊抗结核、抗耐多药结核的机制之一。     

清瘟败毒饮对脓毒症大鼠炎症反应和脏器损伤的影响

目的：观察清瘟败毒饮对脓毒症大鼠炎症反应和脏器损伤的影响。方法：将80只大鼠随机分为模型组、西药组及中药高、低剂量组,每组各20只。采用盲肠结扎穿刺术进行造模。西药组灌胃盐酸小檗碱0.27 mg/kg,中药高剂量组灌胃清瘟败毒饮4.6 g生药/kg,中药低剂量组灌胃清瘟败毒饮2.3 g生药/kg,模型组灌胃等量0.9%氯化钠注射液。1次/d,连续3 d。观察比较各组大鼠进食、活动、皮毛色泽等一般情况,血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17A（IL-17A）水平以及大鼠肺脏、肝脏组织病理情况。结果：模型组出现寒战、呼吸加快、活动度降低、皮毛倒立、精神萎靡等情况,中药高、低剂量组大鼠的一般情况优于模型组;与模型组比较,中药高、低剂量组和西药组均可降低血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A水平（P<0.05）,但中药高、低剂量组与西药组比较,指标差异无统计学意义（P＞0.05）。中药高、低剂量组肺脏、肝脏组织病理损伤程度较模型组改善。结论：清瘟败毒饮可以抑制脓毒症模型大鼠炎症反应,减轻脏器损伤。     

益气活血化痰法对动脉粥样硬化大鼠NF-κB信号通路影响的实验研究

目的：通过观察益气活血化痰法对动脉粥样硬化（AS）模型大鼠核因子κB（NF-κB）信号通路表达的影响,阐明护心康片抗动脉粥样硬化的部分作用机制。方法：采用注射大剂量维生素D3注射液及喂养高脂饲料法制备大鼠动脉粥样硬化模型,随机分为护心康片高、中、低（1.64g/kg、0.82g/kg、0.41g/kg）剂量组,阳性对照组（阿托伐他汀钙片,2mg/kg）,模型组（蒸馏水,10ml/kg）和空白组。治疗12周后处死,采用双抗体夹心酶联免疫分析法（ELISA）检测血清炎症因子白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达水平;取动脉组织采用蛋白免疫印记法（Western blotting）检测NF-κB信号通路的蛋白表达量,用图像分析系统分析其灰度值,以目的蛋白与β-acting内参蛋白的比值来表示组织蛋白中NF-κB的表达量。结果：与模型组比较,护心康片中、高剂量组及阳性对照组的血清内炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平与NF-κB信号通路蛋白的表达水平均显著降低（P<0.01）。结论：益气活血化痰法通过下调NF-κB信号通路蛋白的表达水平,阻断该信号通路的活化,从而抑制模型大鼠炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的释放,达到抗动脉粥样硬化的作用。     

基于响应面法对丹参毛状根诱导条件的优化研究

目的：应用响应面法优化丹参毛状根诱导条件,提高其诱导率。方法：采用发根农杆菌ATCC15834侵染丹参无菌苗获得毛状根,在单因素实验的基础上,利用Box-Benhnkcn设计和响应面分析方法对丹参毛状根诱导过程的培养条件（叶片大小、农杆菌活力、侵染时间、共培养时间、抗生素浓度）进行分析,优选最佳培养条件。结果：丹参毛状根在无外源激素的MS培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根的最优培养条件为：叶片大小0.8cm,农杆菌OD600为1.0,共培养时间2d,农杆菌侵染时间5min,头孢噻吩浓度400ng/L。在此条件下,丹参毛状根的诱导率为69.8%。结论：该研究优化了丹参毛状根的培养条件,为丹参的进一步开发利用提供了依据。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究参苓白术散对IBS-D大鼠的干预机制

目的：基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究参苓白术散对腹泻型肠易激综合征（IBS-D）大鼠的干预机制。方法：将48只大鼠随机分为空白组、模型组、匹维溴铵组［20 mg/(kg·d）］、参苓白术散组［SLBZ组,1.44 g/（kg·d）］、TLR4抑制剂组［TAK-242组,1 mg/（kg·d）］、TLR4抑制剂+参苓白术散组（TAK-242+SLBZ组）,每组各8只。除空白组外,其余各组均采用4%乙酸构建IBS-D大鼠模型。造模成功后,各给药组给予相应的药物灌胃,连续7 d。观察大鼠一般情况,体质量及粪便Bristol评分,结肠组织病理学变化,血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）及白细胞介素-1β（IL-1β）水平,结肠组织闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、紧密连接蛋白（Occludin）、Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）蛋白表达水平。结果：成功造模38只。与空白组比较,模型组大鼠体质量下降,粪便Bristol评分升高,HE染色可见炎症细胞浸润,血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平升高,结肠组织ZO-1与Occludin蛋白水平降低,TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平升高（P＜0.05）。与模型组比较,匹维溴铵组、SLBZ组、TAK-242组、TAK-242+SLBZ组大鼠体质量增加,粪便Bristol评分降低,HE染色炎症细胞浸润减少,血清IL-6、IL-1β及TNF-α水平均显著下降,ZO-1和Occludin蛋白表达水平升高,TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白表达水平下降（均P＜0.05）。与匹维溴铵组、SLBZ组、TAK-242组比较,TAK-242+SLBZ组大鼠结肠组织ZO-1与Occludin蛋白表达水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平下降（均P＜0.05）。结论：参苓白术散可改善IBS-D大鼠腹泻症状,降低血清炎症因子水平,修复肠黏膜,其机制可能是通过调控TLR4 /MyD88 /NF-kB信号通路来达到减轻肠道炎症反应的目的。     

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨半夏泻心汤对PLGC大鼠黏膜微环境的影响

目的：对胃癌前病变（Precancerous Lesion of Gastric Cancer,PLGC）模型大鼠从整体、细胞及分子水平的指标进行观察,分析其胃黏膜微环境的特点,并初步探讨半夏泻心汤对其胃黏膜的作用机制。方法：清洁级雄性SD大鼠70只,随机分成3组：模型组50只,造模加中药干预组10只,空白组10只。采用改良MNNG+复合法制备PLGC大鼠模型,于造模中期第10周、造模结束期第20周,各组随机抽取5只大鼠,分别从整体水平、细胞水平及分子水平检测半夏泻心汤对其胃黏膜微环境的影响。结果：1）启动子PTEN,造模加中药干预组较模型组表达高,但仍低于空白组;2）调控器PI3K/Akt/mTOR信号通路,PI3K、Akt、mTOR的表达造模加中药干预组较模型组低,但仍高于空白组;3）效应子HIF-1α及其下游基因,造模加中药干预组较模型组表达低,但仍高于空白组;上述结果差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：中药半夏泻心汤通过影响PLGC大鼠胃黏膜组织微环境变化的3个关键环节,即PI3K/Akt/mTOR信号通路中的启动子、调控器及效应子,从而影响并阻断PLGC的发生发展。