海水鱼类病原弧菌对对虾的致病力及其疫苗的免疫预防

鱼类致病弧菌（溶藻弧菌Vibrio alginolyticus, 创伤弧菌V.vulnificus，河弧菌生物Ⅰ型V.fluvialis Ⅰ，鳗弧菌Ⅴ.anguillarum和副溶血弧菌Ⅴ.parahaemolyticus）同样可使斑节对虾Penaeus monodon患病，现对斑节对虾的致病性和免疫保护力作了研究。通过肌肉注射感染实验，发现5种弧菌对斑节对虾均有不同的致病作用。从5种弧菌中筛选出强毒株，以其制成福尔马林灭活疫苗。通过注射、浸浴和投喂等3种方式接种的斑节对虾，除投喂效果不明显外，注射和浸浴接种均有一定的免疫保护力。在注射接种组中，随着疫苗浓度的提高，其免疫力有升高的趋势。说明在鱼虾的弧菌病中，疫苗能起到共同的防御效果，为商用鱼虾疫苗的生产提供了可能。     

对虾暴发病的实验室生态学研究

于１９９４,１９９５年在实验室条件下探讨了溶藻弧菌、副溶血弧菌、和非－０１霍乱弧菌的单一菌株与对虾病毒感染的关系;在此基础上,进一步探讨了２３．５￣２５℃和２９．５￣３１℃温度条件下用病虾匀浆感染时,实验水体中细菌数量、弧菌数量的消长情况及其与对虾感染病毒的关系。结果表明,３种弧菌单独感染均可使对虾致病,但在与对虾病毒匀浆共同感染时,感染结果有较大差异,其中溶藻弧菌与对虾病虾匀浆的共同感染结果比单     

副溶血弧菌胶体金快速检测试纸的研制及应用

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是海水养殖动物弧菌病的主要病原菌之一。为实现对该菌的现场快速检测,本文以制备的兔抗副溶血弧菌多克隆抗体作为金标抗体,提取副溶血弧菌的外膜蛋白、鞭毛蛋白、胞外产物和全菌蛋白,以不同浓度的4种抗原蛋白作为4条检测线(T1~T4),特别在T4线设置全菌蛋白,基于竞争免疫层析原理研制出副溶血弧菌胶体金快速检测试纸。使用该试纸检测了副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、鳗弧菌(V.anguillarum)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、哈维氏弧菌(V.harveyi)和鱼肠道弧菌(V.ichthyoenteri),检测结果表明其能够准确鉴别副溶血弧菌感染,排除其他菌的交叉反应干扰。副溶血弧菌快速检测试纸的最低检测限为5×105 cfu·mL^-1,感染副溶血弧菌的牙鲆组织的检测结果与ELISA结果一致。本文研制的试纸具有较高的特异性与准确性且操作简单,为现场快速检测副溶血弧菌提供了有力工具。     

福建西洋岛海域浮游植物的分布

鉴定分析了于１９９０年５、８、１１月和１９９２年２月采自福建西洋岛海域的７２份样品。记录浮游植物１２７种，其中蓝藻１种、硅藻１０５种、甲藻２０种、金藻１种。浮游植物月平均细胞总量为５１．４２×１０＾４个／ｍ＾３。其年高峰出现于夏季８月，达１３７．０５×１０＾４个／ｍ＾３，低谷出现在冬季２月，仅有６．９６×１０＾４个／ｍ＾３。     

大黄鱼病原菌──溶藻弧菌的ELISA快速检测研究

以灭活溶藻弧菌（0.05%甲醛，30℃,8h）制成菌苗，注射免疫实验兔获得抗血清。该抗血清经吸附后与副溶血弧菌、河流弧菌等10株对照菌株无交叉反应，用该抗血清进行溶藻水中溶藻弧菌浓度均低于最低检测限、外观健康大黄鱼肝脏中溶藻弧菌的阳性检出率为20%、患病大黄鱼的阳性检出率为80%，表明ELISA法不仅可以用于诊断大黄鱼的溶藻弧菌病，也可能检测无病症带菌大黄鱼。     

海水养虾池的几种致病弧菌生态

研究了对虾养成期中养殖海水和虾体中弧菌的数量变化、种类组成及其相关因素，初步探讨了弧菌数量与虾病的关系。结果表明，无论养殖水和虾作中弧菌检出率均为100％，养殖水中弧菌测值为2.3×102～4．9×105个／dm3，均值1．78×105个／dm3；虾体中弧菌数是4.4×102～2．9×106个／g，均值为2.9×104个／g。出现于虾体和养殖水中的弧菌有副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）、溶藻弧菌（Vibrioalginolyticus）、创伤弧菌（Vibriovulnificus）、河弧菌（Vibriofluvialis）和模拟弧菌（Vibriomimicus）．其中副溶血弧菌和溶藻弧菌是各地的优势种。检测期间，虾池水的生化和理化因素较稳定，对弧菌数量无明显影响。个别虾池出现虾病与弧菌数量较高有关。以分离菌株进行浸染试验的结果表明，副溶血弧菌和溶藻弧菌能使对虾出现与病虾同样的病症。     

副溶血弧菌胞外产物对中国对虾的致病性分析

１９９０年６－９月,从青岛上马镇对虾养殖场患败血病的中国对虾血淋巴内分离到副溶血弧菌２５－Ｃ菌株,利用平板玻璃纸覆盖技术,获得２５－Ｃ菌株的胞外产物（ＥＣＰ）,进行成分分析和致病性研究。结果表明,副溶血弧菌２５－Ｃ菌株的胞外产物具有多种酶活性和溶血活性,是病原菌感染中国对虾的主要因素,单独注射感染即可导致中国对虾的严重发病至死亡,ＥＰＣ蛋白可以破坏中国对虾血清的体外杀菌活力,提高２５－Ｃ菌株对中国     

大黄鱼溶藻弧菌LPS的间接ELISA检测

用酚 水法从20dm3溶藻弧菌培养液中分离得到脂多糖(LPS)97.6mg,以0.5mg cm3的LPS溶液通过耳缘静脉注射免疫实验兔,经过3次加强注射后从颈动脉放血制备抗血清.该抗血清的效价为1∶2560,对副溶血弧菌等10株细菌的交叉反应效价都较低.用免疫吸附过滤法去除血清中的非特异性成分.用吸附后的抗血清进行溶藻弧菌间接ELISA检测,其检测限为97×104个 cm3.以ELISA进行大黄鱼体内溶藻弧菌检测.结果表明:用LPS抗血清可以较为灵敏地检测大黄鱼体内的溶藻弧菌,该方法不仅可以用于诊断大黄鱼的溶藻弧菌病,也可以检测无病症带菌大黄鱼.     

抗鳗弧菌单克隆抗体免疫保护作用的实验研究

本文对鳗弧菌感染牙鲆幼鱼为动物模型,对我们制备的五株抗鳗弧菌单抗４Ａ６,３Ｂ２,４Ｅ１２,３Ｅ７,３Ａ４的免疫保护效果进行了研究,结果表明：４Ａ６,３Ｂ２和４Ｅ１２具有明显提高受５ＬＤ＾５０鳗弧菌感染的牙鲆存活率的作用,同时它们还可明显延长受大齐量鳗弧菌（１０ＬＤ＾５０）感染的牙鲆的平均存活时间,揭示：４Ａ６,３Ｂ２和４Ｅ１２具有中和或减弱鳗弧菌毒性的作用。     

对虾红肢病发病机制的研究

１９９０－１９９３年试验使用副溶血弧菌及溶藻弧菌感染获得成功。在试验过程中发现，环境及对虾体质对驿虾感染死亡率影响甚大，恶劣环境中的死亡率比优良环境中的死亡率出８３．３％；体质差的对虾感染的后的２４ｈ死亡率是正常对虾的２．５－３倍。为此，在对虾虾养殖生产中除应注意消灭病原菌外，还应注意优化养殖环境与增强对虾体质的问题。     

养殖大菱鲆细菌性红体病病原菌的分离与鉴定

从患有红体病的养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)的肌肉中分离得到一株优势菌并记为H1.经人工注射感染证实H1即为引起养殖大菱鲆红体病的病原菌,其半致死量LD50为2.82×105CFU/mL,而低浓度(1.41×103 CFU/mL)没有造成死亡,但注射部位有脓肿现象,注射相同体积1.5%无菌生理盐水的对照组没有明显的症状,注射部位也无异常.革兰氏染色显示该菌为革兰氏阴性,菌体呈杆状,周生鞭毛.综合该菌的形态、常规生理生化特征和API32E鉴定结果,发现H1与迟钝爱德华氏菌的表性特征非常相似,相似率迭到99.9%.在分子水平上对其16SRNA基因序列的测定,同源性分析,结果表明H1与迟钝爱德华氏菌的亲缘关系最近,相似度达到99%.综合上述研究结果,将该菌株初步鉴定为迟钝爱德华氏茵(Edwardsiella tarda).     

褐点石斑鱼脱鳞病病原菌的分离与鉴定

从海南陵水新村港网箱养殖脱鳞病濒死褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)体内分离到3 株优势菌株XC08061、XC08062 和XC08063, 经回归感染试验确定为致病菌。这3 株细菌经生化鉴定以及16S rDNA 测序分析, 确定均为哈氏弧菌(Vibrio harveyi)。其中, XC08061 对体长为12～14 cm 褐点石斑鱼的半致死剂量为5.8×10² CFU/g 鱼体质量。药敏试验表明, 该菌具有较强的耐药性, 在所检测的25种抗菌药物中, 仅对新生霉素、头孢噻肟、先锋必/舒巴坦、诺氟沙星、依诺沙星和庆大霉素6 种抗菌药物敏感。     

海带基因工程选择标记的研究

海带幼孢子体对抗生素的敏感性实验证明，氯霉素可以作为海带基因工程中较理想的选择压力。本文得出了氯霉素对海带的半致死剂量，提示ＣＡＴ（氯霉素乙酰转移酶）基因可以用作海带基因工程的阳性选择标记基因。     

枯草芽孢杆菌对泥蚶及养殖底泥中细菌总数和弧菌总数的影响

以平板计数法,研究了不同浓度枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)对泥蚶(Tegillarca granosa)及养殖底泥中细菌总数和弧菌总数的影响.试验分为1×10~6,5×10~6和10×10~6CFU/L 3个浓度试验组和对照组,试验共进行28 d,在第0、7、14、21和28天时采底泥和泥蚶,采用平板计数法检测细菌总数和弧菌总数.结果显示,在投施枯草芽孢杆菌后7 d内,养殖底泥和泥蚶体内细菌总数均呈明显上升趋势(P<0.05),7～28 d内缓慢下降,但差异不显著(P<0.05);投施枯草芽孢杆菌后,各试验组底泥和泥蚶体内弧菌总数显著低于对照组(P<0.05),5×10~6CFU/L和10×10~6 CFU/L试验组弧菌总数显著低于1×10~6CFU/L试验组(P<0.05).结果表明枯草芽孢杆菌具有抑制弧菌增殖的作用,枯草芽孢杆菌可应用于泥蚶池塘养殖.     

青岛地区近岸海水和几种海产品中付溶血性弧菌的调查分析(英文)

付溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是水产品中的一种重要食物中毒菌,它在沿岸海水和海产动物体上都有广泛的分布。本文报告了青岛地区近岸海水和几种常见水产品污染了该菌的情况。在检测方法上,改进了一种选择性较强的培养基(SAC),经实验表明,SAC培养基较其他常用的几种培养基对付溶血性弧菌检出的阳性率和灵敏度均较高,与普通采用的TCBS法比较,x~2=4.28,ρ<0.05,有显著效果的意义。青岛近岸海水中付溶血性弧菌的平均出现率为63.25—463CFU/100ml,生鲜的水产食品中平均含有745～6900CFU/100g,其中贝类含量最多,季节性和海区对其检出率有明显影响,夏季检出率最高,冬季最低,对不同方法所检出的菌株,选出部分作了它们的主要生理、生化特性的鉴定,并与参考菌株对比,证实SAC法检出的菌株有85％以上的株数符合付溶血性弧菌的特征,而TCBS法所检出菌株只有55％的真实性。并初步证明,这是一种温血动物和冷血动物的共患菌。     

人工养殖点带石斑鱼弧菌病病原菌的分离及鉴定

广东、海南两省多个海水网箱养殖场养殖的点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)发生严重的弧菌病,从海南三亚和广东深圳的发病鱼病灶上分离到2株致病性细菌VAL02和VAL00,经人工回接感染实验证明这2株菌引起点带石斑鱼弧菌病,VAL02对点带石斑鱼苗的半致死量是2.25×10~5 cfu/g。经形态及生理生化特征分析,鉴定出VAL02及VAL00均为溶藻弧菌。应用药敏纸片法研究了22种化学疗剂对VAL02及溶藻弧菌标准株的生长抑制作用,发现VAL02对氯霉素、氟哌酸、卡那霉素和乙酰螺旋霉素等产生耐药性,对复方新诺明和环丙沙星等敏感。     

中国对虾血清中酚氧化酶活力研究

１９９５年７－９月,以养殖中国对虾为材料,实验室用弧菌菌悬液注射感染对虾,血甭中测得一定量的酚氧化酶（ＰＯ）。正常状态下对虾血清中ＰＯ活力变化不大,而濒死对虾血清中ＰＯ活力变化较大。较低浓度的菌悬液能有效地提高ＰＯ活力,促使有机体对病原体的防御能力,这在实践中有重要意义。     

氨氮对中国对虾抗病力的影响

１９９６年５月２４日－６月１４日,８月１－１９日,分别在青岛的两个养殖场采集海捕产卵后中国对虾亲虾和养殖中国对虾,采用人工添加氨氮并检测对虾和抗菌有关因子的活力的方法,进行氨氮对中国对虾抗病力影响的实验。结果表明,在氨氮浓度较高的实验组,对虾血细胞数目减少,其结构也有变化;酚氧化酶,超氧化物歧化酶和过氧化物酶活力,以及溶菌和抗菌活力都较对照组有明显下降;对病原菌的易感性明显提高。     

利用核酸适配体的竞争置换作用检测溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是水产养殖中致病性较强的一种条件致病菌,为更灵敏、高效地对其进行检测,研发出一种基于核酸适配体竞争置换作用的检测方法。首先设计并制备出磁珠-核酸适配体-荧光报告探针的检测复合物(MAP检测复合物),然后利用溶藻弧菌与其核酸适配体有较好的亲和特异性,在对样品进行检测时,样品中的溶藻弧菌就会竞争MAP检测复合物中的核酸适配体,从而置换出与该核酸适配体结合的荧光报告探针,再通过检测置换出的报告探针的荧光强度来表征溶藻弧菌的浓度,从而实现对溶藻弧菌的定量检测。结果表明,该方法对溶藻弧菌的检测限可达到1CFU/mL,与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、大肠杆菌(Escherichia coli)等水产养殖中的常见致病微生物没有交叉反应,并在1~20、20~100和100~1000 CFU/mL范围内都表现出较好的线性关系。另外还对MAP检测复合物的制备条件进行了优化,较为理想的制备条件为:100nmol/L核酸适配体与100nmol/L荧光报告探针按体积比1︰1混合结合30 min,制备出50 nmol/L的核酸适配体-荧光报告探针复合物,然后该复合物再与25μg/mL的磁珠按体积比1︰1混合结合60 min,制备出相应的MAP检测复合物。利用核酸适配体的竞争置换作用检测溶藻弧菌有较好的灵敏度和特异性,展现了较好的应用前景。