Sephadex G-25用于YML-1脱盐条件优化

凝胶过滤（或称分子筛）层析是一种由限制分子通过多孔基质，按分子大小分离混合分子的技术。凝胶过滤方法常用于生物样品脱盐，其操作简便易行，脱盐效果可靠。由于可通过紫外和电导检测器监控整个层析过程、产品的纯度和回收率，又可连续自动进样和收集样品，自动化程度高，容易放大，所以，自上世纪60年代初始，随着层析介质技术的发展，Sephadex G-25系列凝胶过滤介质常用于实验室乃至工业规模的脱盐、小分子物质去除及缓冲液的置换。一般实验室脱盐常用透析方法，但其耗费时间长、缓冲液消耗量大，又易损失宝贵样品。笔者采用凝胶过滤法研究了YML-1（本实验室提取的一种海洋生物活性物质）脱盐的实验条件及效果。     

利用3S技术更新山东1∶25万地形数据库

国家1∶25万地形数据库的更新是一项十分复杂的系统工程,本文就如何利用3S技术更新山东1∶25万地形数据库的作业方法和技术流程进行了简要论述。其目的是采用3S技术快速有效地更新1∶25万地形数据库。通过对1∶25万地形数据库的要素更新需求和数据源更新分析,提出利用卫星影像既可以保证现势性、又能保证精度。如果选用地面分辨率更高的卫星影像,就可以采用此方法更新1∶5万、1∶1万地形图。随着GPS的应用普及和精度的提高,动态GPS和手持GPS将广泛应用于各种比例尺地形图的更新。事实证明广泛的利用3S技术挖掘地理信息发展的成果,能以更快的速度和更高的精度保证各种比例尺地形图的现势性,满足经济发展的需要。     

渤海湾盆地渤中凹陷25-1油田沙三段近岸水下扇沉积特征

渤海湾盆地渤中凹陷25-1油田沙三段主要发育低渗—特低渗型岩性油气藏,沙三段沉积相特征及其分布认识程度低。利用岩心观察、薄片鉴定和粒度统计,结合钻测井资料,研究渤中凹陷25-1油田沙三段沉积物类型、沉积特征、沉积序列及沉积相展布。结果表明:渤中凹陷25-1油田沙三段近岸水下扇主要发育具有鲍马序列的浊积岩、砂质碎屑岩和滑塌岩三种重力流沉积物,其中浊积岩分布于中扇辫状水道间、中扇前缘及外扇,砂质碎屑岩是内扇—中扇水道的主体组成部分,滑塌岩发育于全区同沉积断层活动带;扇体沙三段自下而上依次发育内扇—中扇—外扇的退积型沉积序列;自沙三段初期发育近岸水下扇且扇体规模最大,随之湖平面逐渐上升、构造活动减弱导致扇体向西南侧迁移并开始萎缩,沙三段末期扇体面积仅为原始面积的二分之一。该结果为渤中凹陷25-1油田未来勘探开发提供指导。     

红笛鲷NCCRP-1基因原核表达条件的优化及纯化

通过克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)非特异性毒性细胞受体蛋白-1(nonspecific cytotoxic cell receptor protein-1,NCCRP-1)成熟肽基因序列,然后与载体连接构建pET21a-NCCRP融合蛋白表达载体,将其转入大肠杆菌BL21进行诱导表达并优化条件。SDS-PAGE分析表明,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.8 mmol/L、37℃条件下培养3 h后表达量最大,分子大小与预期值相符,融合蛋白主要以包涵体形式高效表达,通过HisTrap HP柱子使其得到进一步纯化;Western blot分析表明,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明获得该表达产物。     

变质岩潜山储层结构及其生产动态响应——以渤海锦州25-1南油田为例

锦州25-1南油田为渤海首个投入开发的大型变质岩潜山油田,发育孔隙裂缝型储层,储层非均质性强,生产动态规律复杂.根据钻井取心、薄片、测井、地震及生产动态等资料,分析变质岩潜山储层特征,建立储层结构模式,讨论储层结构对油田生产的影响.结果表明:锦州25-1南油田潜山储层以构造裂缝为主,可进一步划分为张性裂缝、剪切裂缝及亚...     

草鱼NEDD4结合蛋白基因1原核表达条件的优化及纯化

通过PCR方法克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus)NEDD4结合蛋白基因1(简称CiN4BP1)的开放阅读框(ORF)序列,将扩增产物与pET-32a(+)表达载体相连接,构建原核表达载体pET-N4BP1,对重组质粒进行酶切和测序鉴定,然后将其导入大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,检测该蛋白表达情况。SDS-PAGE分析表明,在温度为37℃,IPTG浓度为0.06 mmol/L,诱导时间为4 h时,N4BP1重组融合蛋白的表达量最高,蛋白分子质量为40.2 ku,与软件预测值大小相符,该蛋白主要以包涵体形式表达。利用His Trap HP亲和柱纯化目的蛋白;Western blot分析表明,N4BP1融合蛋白能与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应,说明该表达的蛋白为目的蛋白。     

红笛鲷重组激活基因rag1原核表达条件的优化及纯化

克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)RAG1蛋白(recombination activating protein1)活性核心区的基因序列,并与pET-28a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-28a-RAG1,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用IPTG进行诱导表达。为提高融合蛋白的表达效率,运用传统的实验方法对诱导条件进行优化。SDS-PAGE分析表明,在37℃条件下,利用0.1 mmol/L IPTG诱导8 h后,RAG1重组融合蛋白的表达量最大,相对分子质量与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式高效表达,利用His Trap HP亲和柱使其得到进一步纯化;Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明表达蛋白为目的蛋白。