一株副溶血弧菌qdfsVp001的分离与鉴定

用弧菌选择从牙鲆饲育水中分离出1株细菌qdfsVp001,对该菌在培养基上的菌落形态、生理生化特性及其16SrDNA基因序列进行研究,结果表明该菌在TCBS平板上呈现大的蓝绿色菌落,在弧菌显色培养基上呈现紫色菌落,其生理生化特性具有副溶血弧菌的典型特征。16SrD-NA基因序列及系统发育树分析表明,该菌与弧菌的亲缘关系最近,其中尤与副溶血弧菌最为相似。结合qdfsVp001的形态、生理生化及16SrDNA基因序列分析结果,确定该菌株是1株副溶血弧菌。     

三疣梭子蟹死因探讨

本文报道海捕三疣梭子蟹暂养中出现大量死亡的原因。电镜观察结果表明，死蟹的肝脏和肌肉组织中有大量的弧菌寄生，鳃组织中未见弧菌，但附着有枪蟹茗荷儿Ｏｃｔｏｌａｓｍｉｓｌｏｗｅｉ，加上暂养环境条件和其原海洋生态环境的不同是造成其死亡的主要原因。     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)病原副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的表型及分子特征

采用常规的形态及生理生化特性检验及分子生物学等方法,对引起凡纳滨对虾幼虾发生毁灭性死亡的病原菌进行了致病性、表型生物学及分子生物学的系统研究。结果表明,分离菌为弧菌属(Vibrio Pacini 1954)的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),对凡纳滨对虾、中国对虾及日本对虾仔虾均有强致病性。分离鉴定的4株副溶血弧菌具有淀粉酶、明胶酶、卵磷脂酶活性,但不具有蛋白酶、脂肪酶活性,KP溶血均呈阴性,且均具有K抗原;代表菌株(JGB080708-1株)的16S rRNA基因序列(长度为1456bp,GenBank登录号为GQ205448)和gyrB基因序列(长度为1195bp,GenBank登录号为GQ205453)与副溶血弧菌的两种基因序列相似性均可达98%以上。病原菌的耐药性检测结果显示,对供试49种抗菌药物中的林可霉素等6种药物耐药。     

三疣梭子蟹抗溶藻弧菌感染品系与野生蟹形态学、16S rRNA和COⅠ比较研究

本实验测定了三疣梭子蟹抗溶藻弧菌感染品系和野生群体的形态特征,并分析了2个群体的16SrRNA和COⅠ序列特征。结果表明,抗溶藻弧菌感染品系的体重、第一侧齿间距和第二测齿间距形态比例参数显著小于野生蟹,其余比例参数间差异不显著。结果表明,抗溶藻弧菌感染品系在外形特征上与野生蟹有一定差别,但是,所有形态的差异系数都小于1.28,尚未达到亚种水平,该结果与16SrRNA和COⅠ分析结果一致。     

三疣梭子蟹增养殖技术

三疣梭子蟹（Ｐｏｒｔｕｎｕｓｔｒｉｔｕｂｅｙｃｕｌａｔｕｓ）简称梭子蟹，是著名的海产食用蟹类。营养价值和医用价值很高，在国内外享有盛名。在日本，梭子蟹在海产经济鱼类分类中，属超高级品种，与龙虾、日本对虾、鲍鱼、牙鲆、真鲷等一类。价格接近真鲷，与黑绸甚近，１９８２年平均价为１２２５日元／ｋｇ，折合人民币１００元以上，１９８９～１９９０年，日本市场批发价格已达１５００日元／ｋｇ。日本市场到岸价（ＣＮＦ）６００～７５０日元／ｋｇ，高于冻梭子蟹若干倍。我国已开始与日本进行少批量活蟹贸易，但由于海捕季节性…     

三疣梭子蟹肌肉乳化病的病原及其致病性研究

为进一步搞清养殖梭子蟹肌肉乳化病的病原及其致病机理,找到有效的防治方法,2002-2004年在浙江省宁波、舟山等地养殖场,从濒死的梭子蟹体内分离出1205-11和1205-21两株菌。通过菌体形态、培养特性和生理生化反应,鉴定这2株菌分别为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和葡萄牙假丝酵母(Candida lusitaniae)。人工感染试验证实,这2株菌是梭子蟹肌肉乳化病的病原菌,葡萄牙假丝酵母为继发性感染病原,蟹体外部的损伤及蟹之间相互残伤可能是传染的主要途径。     

溶藻弧菌对三疣梭子蟹抗氧化酶系统的影响

从患乳化病的养殖三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)体组织内分离出痛原菌--溶藻弧菌(Vibrioalginglyticus),通过肌肉注射的方式对三疣梭子蟹进行感染实验,对照组注射等量的生理盐水,在感染后O、24、48和72 h分别采集不同处理组三疣梭子蟹的血淋巴、肌肉和肝胰腺组织,测定溶藻弧菌对其各组织抗氧化相关酶活的影响.结果表明:注射生理盐水的对照组三疣梭子蟹体组织中抗氧化酶和MDA含量在不同的采样时间变化不显著(P>0.05).与对照组比较,三疣梭子蟹感染溶藻弧菌后血淋巴、肌肉和肝胰腺组织中SOD活性随着感染时间的延长显著降低(P<0.05).在感染溶藻弧菌24 h时血淋巴和肝胰腺组织中GSH-px活性有增强的趋势(P>0.05),随后在感染48 h后GSH-px活性显著降低(P<0.05);感染组各体组织中的MDA含量均随着感染时间的延长而显著上升(P<0.05).结果显示梭子蟹感染溶藻弧菌后机体消除氧化过程自由基的抗氧化酶活降低,脂质过氧化物水平升高,使得抗氧化防御能力下降.     

恩诺沙星在人工感染溶藻弧菌的三疣梭子蟹体内的代谢动力学

应用反相高效液相色谱法,研究了人工感染溶藻弧菌的三疣梭子蟹口灌恩诺沙星（给药剂量为10 mg/kg）后,其血淋巴、肌肉、肝胰腺等组织的药代动力学规律.结果表明,恩诺沙星在感染溶藻弧菌的三疣梭子蟹体内3种组织中的药物时量曲线关系均符合一级吸收二室模型.恩诺沙星在血淋巴、肌肉和肝胰腺中的主要药代动力学参数：给药后出现最高血药质量浓度的时间（Tp）为3.200、4.120、0.233 h,给药后的最高血药质量浓度（Cmax）为0.710、1.009、3.474μg/cm3,药时曲线下总面积（AUC）为22.710、39.632、146.727μg/（cm3.h）,表观分布容积（Vd）为11.231、7.514、2.813 dm3/kg,消除半衰期（t1/2β）为102.124、57.661、66.390 h.恩诺沙星在感染三疣梭子蟹体内吸收迅速,分布广泛,组织穿透力极强.代谢物环丙沙星在血淋巴、肌肉、肝胰腺3种组织中的含量均处于较低水平.感染三疣梭子蟹口灌恩诺沙星合理的休药期应不少于18 d.     

三疣梭子蟹肝脏的结构研究

于１９８９年９月－１９９０年８月，用电镜研究浙江舟山出产的三疣梭子蟹肝脏的结构。结果表明，三疣梭子蟹的肝脏主要由４种细胞构成；Ｂ细胞，大，长柱状，胞质中有许多液泡，粗面内质网发达；Ｒ细胞和Ｆ细胞，两者相似，均含丰富的粗面内质网，核糖体、脂滴、线粒体等结构，但Ｒ细胞脂滴数量多，体积大，Ｆ细胞的核糖体数量超过Ｒ细胞２；Ｅ细胞，多边形，核大而圆，粗面内质网少，线粒体小而狭长。     

三疣梭子蟹池塘养殖的研究

１９９３年，苍南县水产局从三疣梭子蟹（Ｐｏｒｔｕｎｕｓｔｒｉｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｕｓ　Ｍｉｅｒｓ）幼蟹开始，经苗种培育和养成两个阶段，完成整个池塘养殖试验过程。１材料与方法１．１试验场地苍南县沿浦镇沿浦村对虾场１号塘，面积１０６６７ｍ２（１６亩）。设闸门一处，大潮汛直接进、排海水，小潮依靠抽水机改善水质。水位可保持１～１．５ｍ。在该塘内侧原高坡面修建一口长３８．６ｍ，宽１２．１５ｍ大规格蟹种养成塘，编号为２。塘水进出通过１ｍ宽的缺口，与大塘相通。水位达０．６～０．７ｍ。又在大塘中，以网片围成无底…     

三疣梭子蟹家系的建立及生长性状比较

以莱州湾和舟山野生群体为材料,以完全双列杂交法设计搭配组合,采用1×3♀交配模式,首次利用人工控制定向交尾技术成功构建三疣梭子蟹家系,经过两代选育,对生长到80,100,120日龄10个F2代家系的生长和家系内的变异进行了比较分析。120日龄时,10个家系体重大小顺序为:J9J10J1J8J4J3J2J5J7J6,全甲宽大小顺序为:J9J10J1J4J8J3J2J5J7J6,甲宽大小顺序为:J9J10J1J8J4J3J2J5J7J6,甲长大小顺序为:J9J10J1J8J4J3J2J5J7J6,体高大小顺序为:J9J10J1J8J4J3J2J5J7J6。J9J、10的体重极显著大于其他8个家系(P≤0.01),J9体重比J6大96.10%,比J7大76.87%;J10体重比J6大72.77%,比J7大55.76%,表现出明显的生长优势,是两个生长性状良好的家系,为育种工作提供了良好的材料。     

四种三疣梭子蟹养殖系统的能值评价

为综合评价以三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)为主的不同混养系统的生态经济性能。本研究通过海水池塘陆基围隔养殖实验,收集苗种投入、人工、电能、饵料投入、产量、风能、雨水能、太阳能等基础数据;利用能值理论及分析方法,定量分析了蟹单养系统(C)、蟹虾二元混养系统的转换率(CS)、蟹虾贝三元混养系统的转换率(CSB)和蟹虾贝鱼四元混养系统(CSBF)4种三疣梭子蟹养殖系统的能流和物流特点;建立了能值评价指标体系,利用各能值指标综合对比了4种养殖系统对环境的影响及可持续性。研究表明:在太阳能值转换率方面,蟹虾贝鱼四元混养系统的转换单最低(3.65×106sej/J,P0.05),蟹单养系统的转换单最高(8.72×106 sej/J)。在产出能值交换率方面,四元混养系统显著高于其它3种养殖系统(P0.05),蟹虾二元混养与蟹虾贝三元混养系统之间无显著差异,蟹单养系统的转换单最低(1.34)。在环境负载率方面,四元混养系统略高于其它3种养殖系统(105.92),蟹单养系统最低(91.42)。在能值可持续发展指数方面,四元混养系统显著高于其它3种系统(P0.05),蟹虾二元混养、蟹虾贝三元混养和蟹单养3个系统之间无显著差异(P0.05)。综合比较表明,蟹虾贝鱼四元混养系统在环境负载率略高的前提下,获得了最低的太阳能值转换率和最高的产出能值交换率,能值可持续发展指数显著高于其他3种养殖系统。因此,虾蟹贝鱼四元混养系统是经济效益相对高、环境污染相对小的养殖模式,应该在生产中推广。     

砂粒粒径与砂层厚度对单体筐养养殖系统中三疣梭子蟹幼蟹摄食行为与生长特性的影响研究*

提要 在梭子蟹的单体筐养养殖系统中,试验了生态掩体(砂盒)中不同的砂粒粒径大小以及砂层厚度对梭子蟹幼蟹摄食行为与生长特性的影响。砂粒粒径设三个水平,分别为：>2 mm、<0.2 mm以及混合砂;砂层厚度有0cm、2cm、5cm、8cm四个水平。试验共进行6天,结果表明：砂粒粒径及砂层厚度对梭子蟹幼蟹的摄食与生长都有明显的影响。从砂粒粒径看,幼蟹在细砂(SPS)中挖洞休息,蟹体与砂面呈30-45°角,仅露眼睛及触角在外。一天内有3-6次进食,总进食时间为142.7±22.52 min,在摄食次数、总进食时间、平均摄食量(0.2427±0.0137 g/gBW)、以及脱皮及成活率都远高于其他粒径组,该组中幼蟹的体重增长最快,增加了0.814±0.113 g,增长率为91.5±3.43%;而该组的饵料系数(FCR)最低为1.17±0.11。因此,筐养养殖系统砂掩体的砂粒粒径最好为0.2 mm以下。砂层厚度也有类似结果,5 cm以上厚度养殖效果最佳。平均摄食量为0.2087±0.0046 g/gBW,该厚度下,幼蟹无死亡、100%脱皮,体重也增加最快,增加了0.791±0.121 g,增长率为88.9±3.74%,饵料系数(FCR)达到1.37±0.23,表明筐养系统掩体中砂层厚度要在5 cm以上。三种保护性酶类(SOD, POD, CAT)活性随着砂粒粒径变小和砂层厚度增加而降低,而消化酶类(淀粉酶、蛋白酶、脂酶)活性则表现与保护性酶类相反特性。从两类酶的活性变化也能证实,在优选条件下(细砂、厚度>5 cm),幼蟹所受的胁迫在降低。     

三疣梭子蟹消化酶的初步研究

开发研制配合饲料,以酶学分析方法研究了温度、pH对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)中肠腺3种主要消化酶(蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶)活性的影响及消化酶(蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶A、羧肽酶B、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶)在胃、中肠腺、肠道中的活性分布。结果表明:蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶的最适温度分别为55℃,55℃,65℃;蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶的最适pH分别为7~8,7.5,4.8;蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶在短时间内有很高的热稳定性及很广的酸碱稳定性范围。蛋白酶、胰蛋白酶、羧肽酶A、羧肽酶B活性均以中肠腺最高,胃和肠道中没有测出胰凝乳蛋白酶活性;淀粉酶活性在胃、中肠腺、肠道中差别不大;纤维素酶和脂肪酶活性在胃和肠道高于中肠腺。     

三疣梭子蟹和华溪蟹主要器官比较组织学的初步研究

近年来随着养殖业的发展,蟹类病害频繁发生,日趋严重。在开展病害研究过程中,由于三疣梭子蟹Portunus trituberculatus的SPF(无特定病原体)材料难于获得,而试验蟹的获得又受到养殖条件、养殖周期等因素的限制,因此阻碍了相关研究的开展,尤其是病毒学研究的进展。筛选一种可替代的模式生物,并开展相关研究显得尤为迫切。华溪蟹Sinopotamon和三疣梭子蟹亲缘关系较近,作为野生的蟹类容易获得,价格低廉,也容易在实验室条件下饲养。笔者在梭子蟹病原研究中发现,华溪蟹不带梭子蟹病原,但在实验条件下可感染相关病原,是开展此两类蟹病原体研究的较好实验动物,有必要开展这两种蟹的组织比较形态学的基础研究,以支持相关的应用研究。笔者经过对三疣梭子蟹和华溪蟹的组织石蜡切片观察发现,两种蟹的各组织器官结构基本相似,各组织结构都由4层构成,即粘膜层、粘膜下层、肌层和外膜。上皮细胞分泌物形成几丁质板,覆盖在上皮细胞表面。三疣梭子蟹的食管粘膜下层较发达。华溪蟹食管粘膜下层的肌层均相对较薄,食管腔较小。这两种蟹的胃壁结构无明显差别。在三疣梭子蟹的局部胃壁,可见嗜酸性几丁质层,上皮细胞顶部间有间隙,间隙中有一些嗜碱性物质。三疣梭子蟹肠粘膜下层不明显。华溪蟹的中肠非常细小,被肝胰腺等组织包裹,难以分离,管腔小,管壁外结缔组织少。两种蟹肝胰腺均由许多分枝的肝小管组成,小管间为结缔组织,血窦。肝小管由单层柱状上皮构成,高低不等,可以明显区分出分泌细胞、吸收细胞、储存细胞和胚性细胞4种形态的细胞,其功能也不同。三疣梭子蟹鳃轴基本弯曲,窄处鳃轴与鳃丝粗细相当,鳃丝和鳃小片间隔较大。华溪蟹鳃轴笔直延伸,窄处鳃轴明显粗于鳃丝,鳃丝间隔较小。两者鳃小片均由扁平上皮组成,外侧有薄层几丁质板。华溪蟹的鳃血管中可以明显看到较多染成红色的血细胞。三疣梭子蟹心肌纤维排列松散,线粒体较少,形态多样。华溪蟹心肌纤维排列致密,线粒体多呈群分布,且数量更多。心肌由梭形心肌细胞组成,有横纹,彼此相连成网,其周围有少量原生质。肌细胞的核呈棒状。     

中国三疣梭子蟹Portunus trituberculatus Miers的研究

本文概述了国内有关三疣梭子蟹形态、习性、繁殖、发育、生长、种群、生理、成分和养殖等方面的研究现状，探讨了关于三疣梭子蟹研究的发展方向。     

Dynamic metabolite alterations of Portunus trituberculatus during larval development

A mass mortality often occurs from molting to the megalopa stage during the larval development of the swimming crab Portunus trituberculatus. Larvae with insuffcient nutrient accumulation during the zoeal stages are probably unable to develop into juvenile swimming crabs. However, the nutritional information such as the primary metabolites is scarce for P. trituberculatus larvae. The aim of this work is to obtain an insight into the metabolite traits of P. trituberculatus at early developmental stages. 1 H nuclear magnetic resonance spectroscopy coupled with multivariate data analysis was used to determine how the metabolite pro?les shift during larval development in P. trituberculatus. Our results show that the trend of total metabolites exhibited a rise from zoea 1 to zoea 3, followed by a drop from zoea 4 to megalopa and recovery during the ?rst juvenile stage. A large-scale depletion of total metabolites in the zoea 4 and megalopa stages suggests a deep depression of metabolic activity, which may be linked to the mass mortality from molting to the megalopa stage. These ?ndings provided essential metabolic information about the larval development of P. trituberculatus and important clues for understanding the nutritional requirements of P. trituberculatus in early developmental stages.     

三疣梭子蟹4个野生群体肥满度的初步研究与比较分析

采用Le Cren相对状态指数Kn,比较4个野生群体(鸭绿江口、莱州湾、海州湾、舟山)三疣梭子蟹的肥满度情况,发现鸭绿江口>莱州湾>海州湾>舟山,其中10月中旬鸭绿江口群体与舟山群体肥满度存在极显著差异(P<0.01);4个野生群体雄性个体肥满度均大于雌性个体,但无显著差异(P>0.05)。三疣梭子蟹选育品系在养殖过程中肥满度为120日龄>100日龄>80日龄,但差异不显著(P>0.05)。     

用RAPD方法对不同色三疣梭子蟹的分析

为寻找三疣梭子蟹体色相关的分子标记,本文用RAPD方法对紫色和茶绿色两种三疣梭子蟹基因组DNA进行体色相关遗传标记的筛选及其遗传多样性分析。从80个随机引物中共筛选了30个重复性好多态性高的引物,RAPD分析结果表明：紫色梭子蟹个体组成的群体多态性位点比例为61.29%,Nei氏基因多样性指数为0.3756,Shannon信息指数为0.5545;茶绿色梭子蟹个体组成的群体多态性位点比例为62.44%,Nei氏基因多样性指数为0.3451,Shannon信息指数为0.5099。紫色和茶绿色三疣梭子蟹之间Nei氏无偏差遗传相似性指数为0.9682,遗传距离为0.0323。这些结果表明,紫色和茶绿色三疣梭子蟹群体的遗传多样性程度接近,具有相似的遗传多样性基础。另外,有2个随机引物（SBSA09和SBSG16）扩增得到群体特异性片段各1条。