自养小球藻(Chlorella autotropica)多糖提取纯化方法研究

应用超声破碎法分别在HCl(0.01 mol/L)、蒸馏水及NaOH(4%)3种不同介质中提取自养小球藻(Chlorella autotropica)多糖.经3%TCA除蛋白及色素、乙醇沉淀真空干燥后,采用二乙胺基乙基琼脂糖凝胶柱层析.实验结果表明,以NaOH(4%)为介质进行超声破碎法提取并层析纯化是一种较适合自养小球藻多糖提取纯化的方法.     

自养小球藻硫酸多糖的红外光谱分析

利用二乙胺基乙基琼脂糖凝胶柱层析纯化自养小球藻(Chlorella autotropica)粗多糖,得到3个硫酸多糖组分(A,B,C);利用高效液相色谱仪和熔点仪测定了3个多糖的分子质量和熔点;利用BaCl2浊度法测定了硫酸多糖中硫酸根的质量分数;利用傅立叶变换红外光谱分析了海水自养小球藻3个硫酸多糖组分的环状结构、半缩醛羟基构型及取代基类型。结果显示,3个硫酸多糖组分的硫酸根的质量分数分别为0.77%,8.46%,2.69%,3个组分均含有硫酸基、酰氨基,葡萄糖是3个硫酸多糖组分的主要组成单糖;3个硫酸多糖组分组成单糖的环构型均是吡喃环,成苷的半缩醛羟基构型有一定差异,A是α构型,B、C是α、β两种半缩醛羟基构型并存。为深入研究自养小球藻硫酸多糖的结构及抗癌活性提供基础。     

自养小球藻（Chlorella autotrophica）多糖体外抑菌活性的初步研究

选取了自养小球藻(Chlorella autotrophica)为研究对象,以超声辅助提取法进行硫酸多糖提取,所得粗多糖采用凝胶法在AKTA系统下进行分离纯化得到PCA2-1及PCA2-2共2种硫酸多糖,电泳及HPGFC法检验结果表明所得硫酸多糖的均为均一多糖。选取了4种在海洋环境或医学中常见的菌株为作为受试菌株,分别进行了PCA2-1和PCA2-2抑菌活性的初步实验,其中大肠杆菌抗生素检定株(Escherichia coli)和解藻朊酸弧菌(Vibrio alginolyticus)为革兰氏阴性菌,表皮葡萄球菌(Staphytococcus epidermidis)和溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)为革兰氏阳性菌。所得结果表明,这2种多糖均对某种特定的菌株表现出一定的抑制作用。其中,PCA2-2对溶壁微球菌和解藻朊酸弧菌有较强有抑菌作用,KI值可达70%以上。     

海绵内生真菌胞外多糖理化性质及自由基清除活性研究

从1株海绵内生真菌(Alternaria sp.)链格孢菌的发酵液中提取胞外多糖,对其进行Q Sepharose FF离子交换色谱分离纯化,得到2个组分JJY-W和JJY-S。运用各种化学方法及波谱方法对JJY-W和JJY-S的理化性质及结构进行分析,并对多糖清除自由基活性进行了评价。结果表明,JJY-W和JJY-S的分子量分别为1.4KD和1.8KD;JJY-W以半乳糖、葡萄糖为主,含有少量甘露糖,摩尔比为:甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=1∶2.5∶11。JJY-S以甘露糖、葡萄糖为主,含有少量半乳糖,摩尔比为:甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=3∶2∶1。JJY-W总糖含量为46.3%,未检测出糖醛酸,蛋白含量为2%。JJY-S总糖含量为52%,糖醛酸含量为6.1%,蛋白含量为14%。活性分析表明,2种多糖均具有一定的体外抗氧化活性,并随着浓度的增加清除自由基能力均增强,JJY-W清除DPPH自由基的活性要强于JJY-S,而JJY-S清除OH.自由基的活性要强于JJY-W。     

紫球藻胞外多糖抗氧化和免疫调节活性的研究

采用密闭微波法降解紫球藻胞外多糖。通过测定多糖对羟自由基OH·、超氧阴离子O2-·和二苯代苦味酰基自由基DPPH·的清除效果及对小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7和淋巴细胞的增殖效果,考察低分子量紫球藻多糖的体外抗氧化活性和免疫调节活性。结果表明,在一定的浓度范围内,降解后的紫球藻多糖对OH·、O2-·和DPPH·的清除能力与浓度呈正相关性,它们的半抑制率IC50分别为0.619,0.114和0.015mg/mL,表明紫球藻胞外多糖具有体外抗氧化活性。溶液浓度在50～200μg/mL的多糖都表现出体外免疫促进作用,与对照组相比,100μg/mL的多糖对巨噬细胞RAW264.7的促进作用最大,其增值指数为1.72。200μg/mL的多糖对脾淋巴细胞的增值指数为2.11。     

羊栖菜多糖的提取和抗氧化活性研究

羊栖菜(Sargassum fusiforme)是一种有"长寿菜"美誉的经济藻类,其中的多糖成分具有良好的抗氧化活性。本文依次用冷水和热水处理羊栖菜藻粉,得到两种多糖:冷水浸提多糖(SFCP)和热水煮提多糖(SFHP);随后对这两种多糖的理化性质进行比较,并通过测定二者对DPPH和羟自由基的清除能力评价其抗氧化活性。结果表明,两种多糖都是含有硫酸根的岩藻聚糖,但是SFCP中糖醛酸含量较高,分子质量分布集中,而SFHP中硫酸根含量较多,分子质量分布较宽,且二者硫酸根取代位置不同。两种多糖对DPPH和羟自由基均有一定的清除效果,且清除率与浓度存在剂量依赖关系。相比较而言,SFCP对自由基的清除效率较好。     

营养盐对小球藻的生长、脂肪含量及EPA含量影响的研究

二十碳五烯酸(EPA)是n-3系列高度不饱和脂酸,具有降血脂、抑制血小板聚集、降血压、抗动脉粥样硬化等作用(刘玉军,1987;Clemons, et al.,1985)。人和动物体几乎不能合成EPA,只能从食物中获取,而海藻是不饱和脂防酸的(原始)初级生产者。 在以往研究的基础上,我们选择了EPA含量较高,且易于养殖的小球藻 Chlorella sp-2 (李荷芳等,1999)为原料,用不同的营养液对其进行培养,分析藻体中的脂肪和EPA的含量变化,以便选择能使小球藻生长好、脂肪含量及EPA含量均高的营养条件,为开辟EPA的新来源提供依据。     

紫球藻胞外多糖抗辐射的生物学活性研究

研究了单细胞红藻紫球藻（Porphyridium sp.)对^60Coγ－射线辐射后小鼠免疫功能的影响。紫球藻胞外多糖（Plysaccharide of Porphyridium sp.PSP）在体内对小鼠免疫功能具正调节作用，具体表现为显著提高小鼠脾细胞增殖水平，自然杀伤（Natural Killer Cell,NK细胞）杀伤活性和白细胞介素2（Interleukin 2,IL-2)活性。IL－2可以激活T细胞，增强NK细胞的活性，改善^60Coγ－射线辐射引起的免疫功能低下而对机体造成的不利影响，使小鼠的免疫功能达到甚至超过正常水平。     

海洋放线菌胞外多糖发酵工艺及其条件研究

以具有明显海洋特性的、产胞外免疫活性多糖的链霉菌2305菌株作为发酵菌种，对其胞外多糖的发酵工艺及其条件进行了研究，考察了不同碳源、氮源、水质、培养基初始pH值、发酵温度、通气量等因素对发酵菌种的生物量及胞外多糖产量等的影响，建立和优化了胞外多糖摇瓶发酵培养基配方、发酵工艺及发酵条件，胞外多糖产量达到4．58g／L，转化率达到6．90％。研究了发酵过程中菌体生物量、底物糖残余量、pH值、产物多糖积累量等的动态变化，分析讨论了2305菌株胞外多糖发酵的动力学类型。     

产胞外多糖极地微生物的筛选及其胞外多糖对大菱鲆免疫活力的初步研究

采用苯酚硫酸法和醇沉淀法,从600余株南极微生物中筛选得到10株胞外多糖产量较高的菌株.分子鉴定与系统发育分析表明,9株菌株属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas),1株属于嗜冷杆菌属(Psych robacter).对10株菌株进行发酵培养,发酵液经醇沉、除蛋白、冷冻干燥后得到粗胞外多糖.其中菌株3-3-1-2的胞外多糖产量达0.6 g/L.对粗多糖产量较高的4株菌所产的胞外多糖进行免疫活性试验,粗胞外多糖20#3在注射3d时,实验组AKP活性比对照组增加了39％,CAT活性比对照组增加了24％,二者均差异显著(P＜0.05),注射5d时,ACP活性比对照组增加了20％,差异显著(P＜0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性比对照组增加了14％,差异极显著(P＜0.01);粗胞外多糖33-1-2在注射3d时,实验组AKP活性比对照组增加了12％,差异不显著(P＞0.05),注射5d时,酸性磷酸酶(ACP)活性比对照组增加了24％,过氧化氢酶(CAT)活性比阳性对照组增加了5％,二者均差异显著(P＜0.05).研究结果表明,菌株20#3与3-3-12产生的胞外多糖对大菱鲆(Scophthalmus maxoimus)具有显著的免疫促进作用.由此可知,筛选出的极地细菌胞外多糖20#3和3-31-2可显著提高大菱鲆非特异性免疫力,可作为水产饲料添加剂应用于大菱鲆的生产养殖.     

NaHCO3浓度对塔胞藻、小球藻和新月菱形藻生长的影响

在温度为 ( 2 2± 1 )℃ ,盐度为 2 8的条件下 ,用不同浓度的NaHCO3( 0 ,1 0 0 ,2 0 0 ,40 0 ,80 0 ,1 2 0 0和 1 60 0mg/L)对青岛海洋大学微藻种质库保存的塔胞藻 (Pyramidomonassp.)、小球藻 (Chlorellaspp .)和新月菱形藻 (Nitzschiaclosterium )进行培养。实验结果表明 ,NaHCO3浓度对 3种海洋微藻生长的影响差异显著 ,经过 6d的培养 ,塔胞藻和小球藻的细胞浓度都在NaHCO3浓度为 1 2 0 0mg/L时达到最大值 ;新月菱形藻的细胞浓度在NaHCO3浓度为 40 0mg/L时达到最大值。     

扇形游仆虫对细菌及小球藻摄食的初步探讨

选用大肠杆菌及小球藻投喂海洋腹毛目纤毛虫扇形游仆虫 ,对其摄食习性、种群自然增长率及其间的能量转化进行了观察和探讨。结果显示 :游仆虫摄食细菌和小球藻的种群自然增长率分别为 0 .6 4 /d和 0 .37/d,其能量转化率分别为 4 4 .2 %和 2 1.6 % ;在适宜密度的细菌和小球藻存在条件下 ,游仆虫能迅速形成较高的增长率 ,而不出现明显的诱发生长期。     

Metabolic and physiological regulation of Chlorella sp.(Trebouxiophyceae,Chlorophyta) under nitrogen deprivation

A freshwater green microalgae Chlorella sp., UMACC344 was shown to produce high lipid content and has the potential to be used as feedstock for biofuel production. In this study, photosynthetic effciency, biochemical pro?les and non-targeted metabolic pro?ling were studied to compare between the nitrogen-replete and deplete conditions. Slowed growth, change in photosynthetic pigments and lowered photosynthetic effciency were observed in response to nitrogen deprivation. Biochemical pro?les of the cultures showed an increased level of carbohydrate, lipids and total fatty acids, while the total soluble protein content was lowered. A trend of fatty acid saturation was observed in the nitrogen-deplete culture with an increase in the level of saturated fatty acids especially C16:0 and C18:0, accompanied by a decrease in proportions of monounsaturated and polyunsaturated fatty acids. Fifty-nine metabolites, including amino acids, lipids, phytochemical compounds, vitamins and cofactors were signi?cantly dysregulated and annotated in this study. Pathway mapping analysis revealed a rewiring of metabolic pathways in the cells, particularly purine, carotenoid, nicotinate and nicotinamide, and amino acid metabolisms. Within the treatment period of nitrogen deprivation, the key processes involved were reshu ? ing of nitrogen from proteins and photosynthetic machinery, together with carbon repartitioning in carbohydrates and lipids.     

硒对紫球藻抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响

利用添加0.5mg.L-1硒的人工海水(ASW)培养基培养紫球藻Porphyridium sp.UTEX 637,并采用试剂盒、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光化学还原反应法、紫外分光光度法、硫代巴比妥酸(TBA)分析法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量,着重探讨硒对紫球藻抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响。结果表明,硒明显促进紫球藻细胞的GSH-Px活性(p<0.05)。加硒处理组和未加硒对照组紫球藻的GSH-Px活性均在第15天达到最高;加硒组紫球藻的最大酶活性达到4.31个酶活力单位(U),为对照组的1.31倍。SOD和CAT的活性分别在第18天和15天达到最大值,但加硒组与对照组之间差异不显著(p>0.05),说明0.5mg.L-1硒对紫球藻的SOD和CAT活性影响不明显。加硒能明显降低藻细胞丙二醛的含量,加硒组藻细胞的丙二醛含量比对照组藻细胞的丙二醛含量降低了15.21%。     

硫元素对小球藻异养生产虾青素的影响

研究了不同浓度硫元素对小球藻Chlorella zofingiensis异养生长和合成虾青素的影响.结果表明,低硫条件下,细胞分裂受到严重抑制,虾青素迅速积累且含量显著提高,但限制藻细胞干重的增加.硫元素3μmol·L<'-1>浓度下,第14天虾青素含量最大,达到1.19mg·g<'-1>,高出300μmol·L<'-1>硫元素组40.68%.硫元素3000μmol·L<'-1>浓度下,在第14天时获得最大虾青素产量,达到9.99mg·L<'-1>.与300μmol·L<'-1>硫元素组相比,3000μmol·L<'-1>硫元素组获得了更高的生物量和虾青素产量.而前者在培养后期,出现了一定程度的蛋白质抑制现象.本研究认为,在单批异养培养中,硫元素300μmol·L<'-1>可能是葡萄糖代谢获得最大生物量所需的最低浓度,因此在流加葡萄糖培养的工业化生产中,一次性加入更高浓度的硫元素,可望获得更高的虾青素产量.     

含硒紫球藻胞外多糖的制备及对体内外肿瘤细胞生长的影响

采用在培养液中添加亚硒酸来实现藻对无机硒的富集和转化,制备一种含硒的紫球藻(Porphyridiumsp.)胞外多糖(Se-PSP);通过DAN荧光法测硒含量及红外光谱,对硒是否结合在多糖上进行了初步探讨;用四唑盐比色法(MTT)研究了不同浓度含硒的紫球藻胞外多糖对3种体外肿瘤细胞生长的影响。通过建立荷瘤小鼠模型,研究了含硒多糖对腹水瘤S180的作用。结果表明含硒的胞外多糖含硒量约为0.015mg/g,40,80mg/LSe-PSP对3种肿瘤细胞SMMC7721、A549、A357均有一定程度的抑制作用,尤其是对SMMC7721抑制程度最为明显。荷瘤小鼠模型实验结果表明100mg/(kg.·d)Se-PSP可以延长荷瘤小鼠的生存时间,Se-PSP有可能成为一种抗肿瘤药物。     

几种褐藻多糖硫酸酯的提取、成分分析及抗氧化活性研究

褐藻多糖硫酸酯是一种含有硫酸基的水溶性杂聚糖,其化学组成对抗氧化活性有较大的影响。本文对三种褐藻来源的褐藻多糖硫酸酯及其降解产物化学组成和抗氧化活性进行了研究,阐明了不同来源褐藻多糖硫酸酯体外抗氧化活性的构效关系。实验结果表明:1)分子量对抗氧化活性有较大影响,但是对不同褐藻来源的褐藻多糖硫酸酯的影响趋势并不一致。2)岩藻糖、硫酸基和糖醛酸含量对清除超氧阴离子自由基的影响与分子量有一定的关系。对于低分子量样品,岩藻糖和硫酸基含量与抗氧化活性成正相关。3)岩藻糖和硫酸根的比值对羟基自由基的清除能力有一定影响,比值越大,羟基自由基的清除能力越强。分子量、岩藻糖、硫酸基和糖醛酸的含量对褐藻多糖硫酸酯的抗氧化活性的影响依次减小。本研究为褐藻多糖硫酸酯在抗氧化剂保健品和功能食品中的应用提供了基础数据,也为裙带菜、羊栖菜和铜藻的高值化利用提供了理论依据。     

海洋微藻多糖提取纯化条件的研究

研究了提取介质、超声条件和洗脱条件对海洋微藻多糖提取纯化效果的影响。实验结果表明不同pH的提取介质可以提取得到不同种类的多糖，超声条件以300W、20min最佳，用葡聚糖凝胶Sephadex-G200柱(长50cm，直径2cm)纯化粗多糖，当加样量为4ml，用0．2mol／L NaCl溶液洗脱效果最好。     

海洋硫酸多糖916在2种酶作用下稳定性的研究

利用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)和明胶比浊法研究了海洋硫酸多糖916在溶菌酶和胰蛋白酶作用下的稳定性，分别考察了酶作用下916的重均分子量、分子量分布系数和游离硫酸根含量的变化。结果表明：在所选定的实验条件下，916的重均分子量、分子量分布系数和游离硫酸根含量均未发生显著变化，表明在所选择的实验条件下916对溶菌酶和胰蛋白酶是稳定的。