怎样培养螺旋藻

螺旋藻属于蓝藻门、颤藻目、螺旋藻属。在世界上已定名记录的有30余种,目前最有开发价值的螺旋藻有两种,即钝顶螺旋藻和巨大螺旋藻。螺旋藻繁殖快、高光效、适应性强。藻体是单细胞或多细胞丝体,无鞘、圆柱形,呈疏松或紧密的有规则的螺旋状弯曲。细胞或丝体顶部不尖细、横壁常不明显,不收缩或有收缩,顶端细胞圆形,外壁不增厚。多数种的藻丝由短圆柱形细胞组成,丝长50～250微米,宽3～8微米,细胞内有气泡,上浮性好。繁殖方式以细胞不断横分裂增加藻丝长度或藻丝断裂增多数量。3～5     

植物激素在条斑紫菜原生质体固体培养中的作用

利用酶解技术制备高活力的条斑紫菜原生质体；通过优化原生质体的制备工艺和培养条件，建立了条斑紫菜原生质体的无菌培养体系，同时首次证明了高等植物组织培养中常用的两种激素NAA和6－BA对紫菜细胞生长具有明显地促进作用，并应用这两种激素建立了条斑紫菜原生质体的固体培养方法，为开展紫菜遗传转化中阳性克隆的定向筛选，以及探讨紫菜的基础生理生化反应机制奠定了良好基础。     

MreB在钝顶螺旋藻中的表达和定位

为了研究Mre B在钝顶螺旋藻Spirulina platensis形态建成中的作用,克隆了mre B基因并进行原核表达,对表达的融合蛋白进行了纯化,免疫小鼠制备了Mre B的多克隆抗体,分别用Western blot和免疫荧光技术检测不同形态藻丝体中Mre B的表达和定位,结果显示Mre B表达量在螺旋形和直线形两种藻丝体中无明显差异;免疫荧光定位显示,荧光主要分布于细胞膜下一圈,侧面可观察到荧光呈双股螺旋状分布。实验结果说明,Mre B含量不是导致螺旋藻形态改变的因素,Mre B细胞骨架蛋白参与指导细胞壁肽聚糖的合成,所以有可能通过其双螺旋结构在藻细胞中的不对称分布影响螺旋藻的形态。     

雨生红球藻细胞形态转换和藻落形成差异研究

基于雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)培养过程中游动细胞和不动细胞的形态差异与转换,对比研究了两种细胞类型在离心收集与藻落形成效率上的差异。结果表明,雨生红球藻SCCAP K-0084在BYA培养基中培养4~6 d和9~12 d分别以绿色游动细胞与绿色不动细胞为主;早期游动细胞离心收集需要更高的离心力,但500~1 000 g离心5 min可以在不影响细胞存活率的情况下有效收获所有类型细胞;相比于传统直接涂布法,双层琼脂平板法可有效提高平板藻落形成效率,且游动细胞藻落形成效率比不动细胞藻落形成效率更高。TAP培养基由于藻落形成效率较低并不适合于雨生红球藻平板培养与筛选,自养型培养基虽然具有较好的藻落形成效率但是藻落形成速度较慢,相比而言,BYA培养基藻落形成效率较高且生长速度快,更适合用于雨生红球藻细胞的后期平板培养与筛选过程。     

锥状斯氏藻生活史及其生理生态调控

锥状斯氏藻ＳＴＤＰ０１克隆品系于１９９３年１月分离自大鹏湾底泥中的单个锥状斯氏藻孢囊，并经单细胞分离培养成藻侏。在电子显微镜下，对该藻的营养细胞和孢囊形态进行了观察，该藻营养细胞与多甲藻目的其它甲藻不同，没有非常明显的甲板；     

超声波对海带配子体克隆的作用

研究了超声波对海带配子体克隆粉碎效果、存活率及生长发育的作用。实验表明：在４００Ｗ处理３０ｓ后再用２００Ｗ处理６０ｓ,海带配子体克隆簇状体的粉碎效果较好：培养７天时细胞日生长速率为０．１５７;大量扩增７天雌、雄配子体克隆的鲜重增重最大为３．４７０ｇ：培养１４天雌性配子体克隆发育率为５２．１％。可作为一种快速、高速、简便的粉碎海带配子体克隆簇状体,制备单细胞悬液的方法。     

建立螺旋藻转基因体系初报

从钝顶螺旋藻单细胞克隆的制备、重组平台的 克隆、同源重组表达质粒的构建、质粒的电激转化和报告基因的表达等方面对螺旋藻转基因 表达系统进行了研究,初步建立起螺旋藻转基因体系。用次氯酸钠溶液处理获得无菌培养系 ;用钠、钙离子混合液处理,获得了可再生的螺旋藻单细胞。用含EDTA的培养基预培养和用 培养基洗涤可分别去除胞外核酸酶活性和抑制胞内核酸酶活性。以氯霉素乙酰转移酶基因替 换大肠杆菌表达质粒pBV220的抗性选择标记,同时插入系列同源重组片段和萤火虫荧光素酶 基因,构建了同源重组表达载体pBVCS01-04L。电激转化螺旋藻S6-4品系单 细胞,获得了具有稳定氯霉素抗性的培养系,并用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实了报告基 因的表达。     

三种螺旋藻及其蛋白质、多糖和脂类结合硒的研究

于1992年9月—1995年1月将极大、钝顶、盐泽等三种螺旋藻在加4—100mg／L硒浓度的培养基内培养，研究藻细胞及其蛋白质、多糖和脂类结合硒的量，探讨硒的结合机理。结果表明，极大螺旋藻累积的硒随外加硒的浓度而增加，但累积系数接近平均值2．184；在同样的硒浓度（8mg／L）条件下，盐泽螺旋藻对硒的累积远大于极大和钝顶两种螺旋藻的，高达696．968×10－6；极大螺旋藻中蛋白质和脂类结合的硒分别占藻细胞含硒量的14．63％和16．05％，两者均高于其它两种藻中相对应的量；三种藻细胞多糖结合硒的能力均很弱，但胞外多糖结合硒的能力较强。根据实验结果推测，螺旋藻累积硒的机理一方面是大分子化合物的吸附作用，另一方面是通过生化过程使硒与蛋白质和脂类结合形成大分子化合物。     

抑制螺旋藻胞内核酸酶活性的研究

螺旋藻细胞内较高的胞内核酸酶活性是外源基因转化螺旋藻的主要障碍。以供体质粒pEUTISI为酶消化底物，通过多种方法处理螺旋藻细胞，然后检测其内核酸酶粗提液对pEUTISI的降解作用，结果表明，2mmol/L以上的EDTA处理16h或无Mg^2 螺旋藻培养基培养72h以上，都可使处于对数生长期的螺旋藻胞内核酸酶活性显降低；低于28℃（如24℃）培养也可降低螺旋藻的胞内核酸酶活性。根据实验结果，建议在螺旋藻转化前72h开始低温、无Mg^2 培养，转化前16h提高培养基中EDTA的浓度至2mmol/L，就能获得胞内核酸酶活性极低的受体藻，有利于外源基因的转化。     

坛紫菜配子体离体细胞发育研究

本文以坛紫菜(Porphyra haitanensis Chang et Zheng)雌雄配子体为材料,酶解得到单细胞并再生培养,研究雌雄配子体体细胞发育途径以及不同部位(根丝段、基部、中部、顶部、成熟区)单细胞发育途径.结果表明,坛紫菜雌雄配子体体细胞发育途径大致相同,但存在一定差异,表现为雌性配子体体细胞发育成果孢子囊,少数体细胞直接发育成类孢子囊枝;而雄性配子体体细胞发育成精子囊,并能释放精子,极少数体细胞发育成类果孢子囊.单细胞再生研究显示,配子体体细胞发育方向受细胞所处部位影响,不同部位体细胞由于其分化程度不同,发育成不同类型的再生体.随着细胞所在藻体部位的上移,正常叶状体和根丝细胞叶状体比例均下降,畸形叶状体的比例下降或无明显差异,丝状体的比例逐渐增加.     

长石莼（缘管浒苔）（Ulva linza）原生质体再生与分化发育初步研究

采用细胞酶解技术获得长石莼（缘管浒苔）原生质体,再通过细胞培养观察原生质体再生以及各种分化发育途径。结果表明,长石莼（缘管浒苔）主要存在3种分化发育途径：1）部分原生质体可直接分裂形成有假根或无假根得单细胞苗。2）部分原生质体分裂成规则细胞团或不规则细胞团,最后形成苗簇。3）部分原生质体可发育为孢子囊／配子囊,其中部分...     

海带雌性原生质体的分离与培养

于1993年1月 - 1993年4月，为了制备遗传性纯一的基因工程受体，用酶法从海带雌配子体单性生殖系分离雌性单倍体原生质体。从皱纹盘鲍消化腺及消化器官提取出鲍酶，在25°C下、1％（W／V）的鲍酶与2％（W／V）的纤维素酶（Onozuka R－10）合用能有效解离单细胞和原生质体。海带雌性原生质体经2d培养再生了细胞壁。     

曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)血蓝蛋白酚氧化酶样活性研究和相关功能单元片段的克隆

采用分光光度法对曼氏无针乌贼血蓝蛋白及相关功能单元(FUs)的酚氧化酶活性进行研究,并获得该功能单元的序列信息.结果表明,曼氏无针乌贼血蓝蛋白能氧化左旋多巴和邻苯二酚而不能氧化酪氨酸单酚,说明该血蓝蛋白可能具有酚氧化酶活性,并属于儿茶酚酶类;进一步研究显示,曼氏无针乌贼血蓝蛋白酶解片段FUg的酶活特性显著区别于其它功能...     

坛紫菜原生质体的超微结构观察

在细胞与原生质体的分离培养与融合的研究中,利用电子显微镜观察高等植物细胞去壁情况、原生质体再生壁的形成过程以及原生质体融合后细胞内细胞器的变化已经是比较普遍采用的手段。但在大型海藻细胞分离与培养方面的研究工作中,利用这一手段进行研究的并不多见。 我们在研究Ⅰ中曾经利用海螺酶解离坛紫菜的营养细胞并成功地培养成紫菜叶状体,但是解离成单离细胞去壁情况如何,当时     

青蛤(Cyclina sinensis)cDNA文库构建及免疫相关因子基因的筛选

在鳗弧菌侵染下,利用SMART方法构建了青蛤的cDNA文库,并采用高通量测序方法和BLASTX比对筛选出ESTs及免疫相关因子的基因.结果表明,所构建的cDNA文库的库容量为1.12×106,插入片段均在500bp以上;大于100bp的有效ESTs序列1113条,平均长度725bp,拼接后获得一致性序列420条,其中包括126个叠联群和294个单拷贝EST,BLASTX比对后获得注释序列271条,进一步筛选获得青蛤免疫相关因子基因序列45条,为克隆其免疫防御相关因子的基因提供了重要的基础.     

鳗弧菌感染牙鲆的组织学和免疫组织化学观察

利用免疫组织化学ＡＢＣ法及组织学ＨＥ染色技术对鳗弧菌人工感染后的牙鲆肝组织及胃肠道进行了组织病理学及细菌的定位研究。结果显示,感染后肝细胞肿胀,空泡化现象严重,肝窦扩张,肝组织内可见阳性反应的细菌呈堆状存在;胃黏膜褶变矮。胃壁变薄,黏膜层内可见阳性反应的细菌;肠绒毛细胞出现破损,肠腔内有大量细胞碎片,肠腔内也可见阳性反应的细菌。提示：鳗弧菌可直接侵入组织细胞破坏组织结构,进而使鱼体出现死亡。     

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肠道和肝胰腺5-羟色胺(5-HT)和5-羟色胺受体2(5-HTR2)的定位研究

肠道和肝胰腺是中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)重要的消化器官,本文运用组织学技术测量了中肠和后肠长度,并对肠道长与体长进行相关性分析。应用免疫组化技术对5-HT和5-HT受体2进行组织定位和计数。结果表明:(1)中华绒螯蟹的肠道长与体长接近,两者之间呈极显著正相关(P0.01)。后肠长度约为中肠的2倍;(2)5-HT和5-HT受体2在中肠和后肠中的组织定位和数量相似,均分布于黏膜上皮细胞间和肌层与外膜交界处,亦见于后肠的固有膜和黏膜下层与肌层交界处,在肠球外膜中也有大量分布;(3)5-HT和5-HT受体2阳性物质在肝胰腺的四种细胞的胞核中均有分布,在F细胞的胞质中也有分布。5-HT和5-HT受体2在中华绒螯蟹肠道和肝胰腺组织中的分布规律一致,表明中华绒螯蟹消化道5-HT发挥生理功能可能与5-HT受体2有关。此外,5-HT和5-HT受体2在后肠近肌细胞分布的特点可能与肠道收缩有关。后肠在中华绒螯蟹消化生理中的作用应引起重视。     

鼠尾藻(Sargassum thunbergii)有性生殖过程与育苗

采用室内培养和野外实地观测的方法,研究了鼠尾藻的生长发育和有性生殖过程,并在此基础上进行了有性生殖人工育苗实验。结果表明,鼠尾藻在海水温度高于22℃时,生殖托开始发育,海水温度超过23℃以后,生殖托的生长速度加快,海水温度超过24℃时,生殖托生长速度最快并迅速成熟,在海水温度达到26℃时,观察到了卵的集中排放挂托现象。鼠尾藻卵的排放较为齐整且有一定的先后顺序,生殖托基部的卵最先排出,中部次之,最后是顶部,雄托排精时间要稍晚于雌托排卵时间。受精卵大约在受精1h后进行第一次细胞分裂,分裂面与长轴垂直,大约2h后进行第二次分裂,下端细胞的分裂面平行于第一次分裂方向,而上端细胞的分裂面则垂直,随后大约每2—4h细胞分裂一次。从卵挂托到幼胚脱落一般需要24—48h。观察发现,生殖窝不仅存在于生殖托上,在部分生殖枝上也有分布。在鼠尾藻的人工育苗的实验中,胚苗在苗帘上的生长状态良好。     

重金属Cu、Pb对泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)卵细胞凋亡及DNA损伤的SCGE试验

采用室内暴露试验方法,以单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测,研究了Cu、Pb不同浓度梯度与不同暴露时间联合染毒对泥鳅卵细胞DNA的损伤.结果表明,各Cu、Pb浓度组DNA平均迁移长度增加,与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.05).此外,随着Cu、Pb染毒剂量的增加,各试验组DNA的平均迁移长度逐渐增加,在试验浓度梯度范围内(Cu 0.01mg/L+Pb 0.05mg/L、Cu 0.10mg/L+Pb 0.50mg/L、Cu 0.25mg/L+Pb 0.75mg/L),存在较为显著的剂量-效应关系(P＜0.05),但未见明显的时间-效应关系(P＞0.05).Cu、Pb可引起泥鳅卵细胞凋亡和DNA损伤,卵细胞的不同损伤水平可望作为较为理想的水环境基因毒性指标.