基于低压静电场及高通量测序技术对中华管鞭虾(Solenocera crassicornis)保鲜过程中微生物群落影响分析

中华管鞭虾(Solenocera crassicornis)隶属于十足目、管鞭虾科、管鞭虾属, 主要分布于我国东南沿海。其富含多种必需氨基酸和矿物质, 高蛋白低脂肪, 但易受微生物污染而发生腐败变质, 需引用基于16S rRNA的高通量测序技术准确测定其微生物群落组成成分变化。以中华管鞭虾为试验材料, 采用高通量测序技术对虾肉的微生物群落碱基进行基因测序, 将产生的碱基序列通过OTU聚类、多样性及相关性分析手段研究了贮藏过程中电场处理后影响中华管鞭虾品质的微生物发育信息和群落组成变化规律。分组为新鲜样本(G0), 2 kV、3 kV及对照组贮藏中期(G1、G2、G3), 2 kV、3 kV、对照组贮藏末期(G4、G5、G6), 通过物种韦恩图、Alpha和Beta多样性以及物种组成分析, 研究不同强度电场环境对中华管鞭虾微生物群落组成的影响。结果表明, OTU聚类分析中优势菌群从属水平看为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)、假单胞菌属(Pseudomonas)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter)和热杀索丝菌属(Brochothrix)等, 其中假交替单胞菌属能够适应高盐浓度环境, 是中华管鞭虾微生物腐败主要致腐菌。贮藏中期微生物物种多样性顺序为3 kV组>2 kV组>对照组(0 kV), 电场能够有效抑制优势菌的生长; 贮藏末期3组物种结构相近, 此时电场对虾肉菌群结构无明显影响。PCoA主成分分析图中发现, 在坐标系中贮藏中期的G1、G2、G3组距离较为接近, 贮藏末期的G4、G5、G6组距离较为接近, 说明在同一贮藏期间的各组微生物种群结构类似。综上, 贮藏前中期低压静电场能够抑制优势菌的生长, 维持微生物物种间平衡并使其物种多样性较高, 且3kV更佳, 贮藏末期时由于优势菌更适应环境, 热杀索丝菌属和肉食杆菌属占比增加, 电场对物种多样性的影响不大。研究结果可为深入探讨影响中华管鞭虾贮藏保鲜效果的微生物群落组成和基础发育信息提供有效依据。     

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)雄性生殖系统发育过程中生化成分的季节变化

采用生化方法测定了中华绒螯蟹雄性生殖系统及肝胰腺各组织中甘油三酯、胆固醇、蛋白质、葡萄糖和糖原含量的季节变化。结果表明，全年胆固醇含量在肝胰腺、血淋巴和精巢中均有2个高峰，分别在6月和12月、7月和12月、9月和次年1月，且第二峰值均明显高于第一峰值；肝胰腺葡萄糖含量最高值出现在6月，之后逐渐下降，而血淋巴和精巢则在7月，之后亦逐渐下降；肝胰腺和血淋巴出现糖原峰值的时间和葡萄糖相似，但精巢在9月，而副性腺在8月时已达到较高含量，最高值出现在次年1月；蛋白质的变化与上述3种物质基本相似，但血淋巴出现峰值的时间要早于肝胰腺。上述各生化成分变化的先后顺序和连续性表明，肝胰腺内上述物质在进入性腺快速发育期前，经血淋巴向精巢和副性腺转移，精巢对胆固醇和葡萄糖的积累要早于副性腺，这些物质的变化与生殖周期存在明显的相关性。肝胰腺中甘油三酯始终处于积累状态，而精巢和副性腺在前期对甘油三酯的积累极少，直至后期才略有上升，表明甘油三酯并非性腺发育所必需。     

螺旋藻(Spirulina)基因组外DNA的高效提取与纯化

通过研究建立了一种简便、高效提取螺旋藻基因组外DNA(exDNA)的方法——CTAB-蛋白酶K法。该法先以含200μg/ml蛋白酶K的CTAB提取液裂解螺旋藻细胞,并用氯仿/异戊醇抽提得到总DNA粗提物,粗提物再经100μg/ml蛋白酶K酶解及酚/氯仿/异戊醇抽提得到总DNA,再利用凝胶冻融离心法得到高纯度exDNA。利用上述方法,对6株钝顶螺旋藻品系Sp-1、Sp-2、Sp-3、Sp-4、Sp-5和Sp-6所作的研究结果表明,(1)6株品系均含有exDNA,但数目与相对质量不尽相同;(2)Sp-1、Sp-2、Sp-5和Sp-6均只有一种exDNA,依次约为1.15kb、0.75kb、1.15kb和1.1kb;(3)Sp-3和Sp-4均有2条exDNA带,Sp-3的exDNA约为1.55kb和3.0kb,Sp-4的exDNA约为1.8kb和3.6kb;(4)螺旋藻品种(系)间exDNA的异同性及其与生理生态等特性的关系,暗示着exDNA可能与螺旋藻的分类、进化和形态建成等重大生物学课题有关,并有可能担负着某些生物学功能。     

龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)多糖的分离纯化及其组成研究

以龙须菜粗多糖为原料,利用离子交换层析分离纯化,紫外光谱、醋酸纤维薄膜电泳和凝胶过滤层析法鉴定多糖的纯度及其分子量,同时进一步采用气相色谱分析龙须菜多糖的单糖组成.结果表明,利用蒸馏水、0.3mol/L NaCl和1.2mol/L NaCl溶液分步洗脱,DEAE-Sephadex A-25离子交换层析纯化得到龙须菜多糖的三个组分G1、G2和G3,得率分别为3.61%、69.26%、18.70%:G1、G2和G3均显示为单一电泳谱带和单一洗脱峰,无蛋白、核酸杂质,分子量依次为21993、48460、61031U;G2和G3的单糖组成主要为半乳糖、3.6-内醚半乳糖及少量葡萄糖;G2糖链通过1→2键与1→6键方式连接,存在非还原末端基及连三羟基,G3糖链则通过1→3键与1→2键方式连接.     

缢蛏(Sinonovacula constricta)生化遗传特征分析

于 2 0 0 1年 4月 ,在浙江近海采集 1 0 0个缢蛏样品 ,采用聚丙烯酰胺垂直板不连续电泳方法 ,对缢蛏足、水管、消化腺、外套膜、鳃等 5种组织或器官进行了EST、ADH、MDH、IDH、ME、G6PDH、LDH、ALP、GDH、CAT、ALP、ACP、SOD、SDH、ATP、SUDH、GCDH、AMY、GAD、POD等 2 0种同工酶的电泳研究 ,并对各种酶的同工酶位点及酶谱表型进行了分析。结果表明 ,所测组织中未检出CAT、ALP、GCDH、GAD ;AMY和ACP只在消化腺中有表达 ;SUDH只在水管、鳃、消化腺中表达 ;所检测的酶均不同程度地表现出了组织差异。     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex- 75 ,Sephadex- 10 0凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌 (Vibriop acini) X4 B- 7菌株产生的碱性蛋白酶 ,得到电泳纯酶制品 ,并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示 :纯酶的分子量为 2 7KD,等电点 p I=8.7,最适反应 p H9.0～ 10 .5 ,最适反应温度 5 0～ 6 0℃。ED-TA对酶活力没有影响 ,高酶浓度可以降低 SDS对酶的抑制作用 ,该酶可用于解聚组蛋白。 DNA琼脂糖凝胶电泳证明 :酶对 DNA酶有降解作用 ,而对 DNA没有降解作用 ,该酶有希望应用于核酸的提取     

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)冻藏过程中肌肉蛋白质生化特性的变化

以三疣梭子蟹肌肉基本营养成分、蛋白质组成、肌原纤维蛋白含量、Ca~(2+)-ATPase活性、总巯基含量、二硫键含量以及肌原纤维蛋白的SDS-PAGE分析作为指标,研究了三疣梭子蟹在不同冻藏温度下肌肉蛋白质生化特征的变化。结果表明,三疣梭子蟹是典型的高蛋白食品;随着冻藏时间的延长,水溶性蛋白含量先增加后减少,盐溶性蛋白和不溶性蛋白含量逐渐减少,碱溶性蛋白含量逐渐增加;肌原纤维蛋白含量、Ca~(2+)-ATPase活性、总巯基含量随着冻藏时间的延长,均呈现下降趋势,而二硫键含量则呈上升趋势,且–20℃和–40℃两组之间差异显著(P0.05)。SDS-PAGE分析结果表明,组成肌原纤维蛋白的各种蛋白质均有不同程度降解,且–20℃比–40℃组降解更明显。因此,–40℃冻藏对梭子蟹肌肉蛋白质生化特性的影响较小。     

中华原钩虾(Eogammarus possjeticus)对浒苔(Ulva prolifera)及其他类型饵料的摄食研究

采用生理生态学方法,研究了中华原钩虾(Eogammaruspossjeticus)对黄海绿潮原因种浒苔(Ulva prolifera)及海水池塘4种优势大型海藻,即肠浒苔(Ulva intestinalis)、扁浒苔(Ulva compressa)、线形硬毛藻(Chaetomorphalinum)和丝毛藻(Cloniophorasp.)的摄食率,比较了对浒苔与其他不同类型饵料(包括人工饵料)的摄食,开展了不同密度的中华原钩虾对浒苔的现场摄食研究。结果显示,中华原钩虾的摄食率、饵料吸收率与海藻的含水量成呈正相关,表明该端足类存在明显的补偿性摄食行为。对不同类型饵料的摄食结果显示,中华原钩虾除了摄食海藻,对豆粕、虾饲料等人工饵料也具有较高的饵料吸收率,表明其可人工投喂培育。中华原钩虾具有一定摄食节律,夜晚摄食量高于白昼,表明夜晚投喂有利于中华原钩虾摄食,可减少饵料污染,有利于清洁生产。现场摄食实验结果显示,中华原钩虾摄食量随养殖密度的增加而增加,但其摄食率和存活率与养殖密度呈负相关,表明高密度时中华原钩虾竞争摄食增加了饵料消耗,同时中华原钩虾为抵抗养殖密度过高造成的竞争而增加能量等消耗。     

脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)组织蛋白酶D基因的克隆及其表达分析

采用RACE技术获得了总长为1853bp的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)组织蛋白酶D基因全长cDNA序列。该基因5′和3′非编码区分别为120bp和572bp,开放阅读框为1161bp,推测编码386个氨基酸,预测分子量为42.36kDa,理论等电点为7.54,命名为EcCatD基因。同源性和系统进化分析表明,EcCatD基因与斑节对虾、美洲螯龙虾的相似性分别为86%和80%,与斑节对虾和美洲螯龙虾紧密聚为一支。荧光定量RT-PCR结果表明,EcCatD基因在血细胞中的相对表达量最高,其次为肝胰腺。该基因在鳗弧菌和WSSV感染后的脊尾白虾血细胞和肝胰腺中的表达量显著增加,并具有不同的时空表达趋势。结果表明EcCatD基因在脊尾白虾免疫反应中具有重要作用。     

口虾蛄(Oratosquilla oratoria)同工酶的组织特异性及生化遗传分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳方法，研究分析了口虾蛄(Oratosquilla oratoria)肌肉、眼球、腹鳃、心脏和肝胰腺5种器官或组织中LDH、ADH、MDH、SDH、MEP、POD、AMY、GDH、SCD、EST、GLDH和SOD共12种同工酶的表达情况。结果表明，口虾蛄同工酶的表达具有明显的组织特异性。对12种同工酶进行生化遗传分析，获得了基本酶谱。12种同工酶共记录出35个基因座位，其中11个基因座位Ldh-3、Adh-1、Sdh-2、Est-1、Est-2、Est-3、Mdh、Mep-7、Gldh-1、Gldh-2和Scd-1为多态，其多态座位比例为31.43％。     

海带中细胞激动素的纯化分离方法

海带样品于 2 0 0 1年采自青岛太平角海湾 ,用三种不同方法处理样品 ,通过对实验方法及条件的筛选 ,确立了提取、纯化和分离海带中细胞激动素的方法步骤和流程。结果表明 ,最佳方法的基本步骤为 :( 1 )用甲醇∶水∶醋酸 ( 70∶ 30∶ 3,V/V/V)从海带组织中提取出细胞激动素 ,再用PVPP柱去除提取液中的酚类和其他杂质 ;( 2 )将提取液通过连在一起的PVPP柱、DEAE柱和C1 8柱 ,以纯化样品并同时从自由基、核苷、核苷酸和葡糖苷型细胞激动素混合物中分离出核苷酸型细胞激动素 ;( 3)用接有氨基柱的正相液相色谱进一步将葡糖苷型细胞激动素分离出来 ;( 4 )用C1 8液相色谱柱分离其他各种细胞激动素     

中国对虾肝胰腺细小病毒的纯化与鉴定

于１９９１年９月－１９９３年底，利用在青岛市沙子口对虾养殖场采采的中国对虾病虾肝胰腺样品，采用一种改进的酒石酸钾－甘油密度梯度离心法，对原先称之为肝胰腺细小样病毒的一种对虾病毒进行纯化。通过电子显微镜观察，提取病毒核酸用不同核酸酶处理并结合电泳等方法，对病毒的基本生物物理和生物化学特性作鉴定，结果表明，用酒石酸钾－甘油密度梯度离心法，可获得良好的病毒纯化效果；纯化后的病毒颗粒显示正二十面体立体对称     

锯缘青蟹碱性磷酸酶分离纯化及部分理化性质研究

于１９９５年２月在厦门海域采集锯缘青蟹,取其内脏经正丁醇抽提,硫酸铵分级分离ＤＥＡＥ－５２离子交换柱层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤柱层析纯化,获得碱性磷酸酶 制剂,以快速 蛋白液相色谱及聚丙烯酰胺凝胶电泳检验萁 纯度,获得单一蛋白纯的酶 制剂。     

绿色巴夫藻硒多糖的提取、分离与纯化

于１９９５年３－７月采用本实验室培养的绿色巴夫藻,经沸水提取及去除蛋白,小分子物等杂质后,通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层进行分离,纯化实验。结果表明,分离纯化得到的两种多糖－４Ｐ１和４Ｐ２,通过醋酸纤维素薄膜电脉及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤检验纯度后,证实其均为单一含硒多糖,且都带负电。两种硒多糖含硒量都较低,分别为７７ｍｇ／ｇ和２２０ｍｇ／ｇ。     

中国对虾一种C型杆状病毒的纯化技术及形态特征研究

染病中国对虾于１９９５年７月取自青岛崂山对养殖场。为探索对虾杆状病毒分离纯化技术，采用组织超薄切片技术对染病对虾进行电镜观察：被病毒感染的对虾经组织匀浆、差速离心和密度梯度离心，纯化出杆状病毒粒子；纯化的杆状病毒经钨酸钾负染色，于透射电子显微镜下观察形态结构。结果表明，中国对虾中肠组织     

不同规格瘤背石磺(Onchidium struma)肌肉的生化组成及营养价值评价

提要采用生化测定方法对不同规格瘤背石磺的肌肉指数、肌肉中常规生化成分、氨基酸组成、脂类和脂肪酸组成进行了系统的研究。结果表明:(1)随着体重的增加,瘤背石磺的肌肉指数和肌肉的蛋白质含量均呈下降趋势,而脂肪和碳水化合物含量呈上升趋势,大规格组瘤背石磺肌肉中的蛋白质、脂肪和碳水化合物含量分别为55.20%、9.10%和17.38%。(2)随着体重的增加,肌肉中的氨基酸总量呈显著下降趋势。成体瘤背石磺肌肉中检测出17种氨基酸,其中含有9种人体必需氨基酸,天冬氨酸和谷氨酸为瘤背石磺肌肉中的主要鲜味氨基酸,除蛋氨酸+胱氨酸和色氨酸外,其余必需氨基酸含量均符合FAO/WHO/UNU(1985)的理想模式。(3)不同规格组瘤背石磺肌肉中的脂类和脂肪酸组成接近,肌肉中磷脂含量达80%以上,肌肉中的脂肪酸组成平衡(S∶M∶P接近于1∶1∶1),成体n3-PUFA/n6-PUFA值为1.0左右,而∑PUFA和∑HUFA分别达30.53%和21.78%。