养殖中国对虾肝胰脏细小病毒病的免疫金银染色法诊断研究

80年代以来 ,肝胰脏细小病毒病在养殖中国对虾中广泛流行并造成了一定的损失。作者采用免疫金银染色 (immunogold silver staining,IGSS)技术 ,对患病对虾肝胰脏中的细小病毒(Hepatopancreatic parvovirus,HPV)进行了免疫组织化学的研究。结果表明 ,经 IGSS染色的病虾肝胰脏上皮细胞核内出现了黑色的、圆形或椭圆形、大小为 3～ 15μm的结构。由于该结构与 H- E染色切片上出现的肝胰脏细小病毒包涵体在发生部位、形态和大小上皆一致 ,故而认为该结构为HPV包涵体。证明 ,免疫金银染色法是一种可应用于中国对虾肝胰脏细小病毒病诊断的有效方法。     

斑节对虾杆状病毒（MBV）病诊断研究

对潮阳县古埕村养殖斑节对虾Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ的成体病虾在光学显微镜下作病理组织诊断表明，被病原体感染的肝胰脏腺泡管和导管的上皮细胞核肥大，其内包含一些近似圆球形的包涵体，分别用苏木精－曙红、姬姆舍、孚尔根和Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｂｒｅｅｎ＇ｓ Ｇｒａｍ等染色剂作比较染色。致病细胞发育分：（１）指环期：（２）未成熟包涵体期：（３）成熟包涵体期。该病毒包涵体的形状、大小和形成部位、致病细胞发     

用DAPI染色检出对虾肝胰腺细小样病毒

对虾肝胰腺细小样病毒（Ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｐａｒｖｏ－ｌｉｋｅｖｉｒｕｓ,ＨＰＶ）病是我国流行较广泛的一种对虾病毒性疾病,发病时可使对虾在４～８周内累积死亡率达５０％～８０％,野生和养殖对虾均可患此病,但有些对虾从幼体阶段携带此病毒一直到成虾阶段也不死亡。对ＨＰＶ病毒的检出一般常用ＨＥ染色法和孚尔根染色法,在光学显微镜下观察细胞核内的病毒包涵体。或者用电子显微镜对可疑组织作超薄切片观察其病毒颗粒［１］。研究发现在组织切片中用ＤＡＰＩ（４,６－Ｄｉ－ａｍｉｄｉｎｏ－２－Ｐｈｅｎｖｌｉ…     

斑节对虾杆状病毒(MBV)病诊断研究

对潮阳县古埕村养殖斑节对虾Penaeus monodon的成体病虾在光学显微镜下作病理组织诊断表明,被病原体感染的肝胰脏腺泡管和导管的上皮细胞核肥大,其内包含一些近似圆球形的包涵体,分别用苏木精-曙红、姬姆舍、孚尔根和Brown and Breen's Gram等染色剂作比较染色。致病细胞发育分:(1)指环期;(2)未成熟包涵体期;(3)成熟包涵体期。该病毒包涵体的形状、大小和形成部位、致病细胞发育期和组织病理初步分析等均与Lightner等对斑节对虾杆状病毒(MBV)的描述一致。     

对虾白斑杆状病毒（WSBV）对斑节对虾 的实验感染与病理学 …

用取自发病虾塘患典型白斑病的病虾为毒源,对健康斑节对虾Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ进行人工感染,按Ｋｏｃｈ氏法证实了对虾白斑杆状病毒（ＷＳＢＶ）是白斑病的病原。对人工感染ＷＳＢＶ后的组织病理变化和宿主细胞感染ＷＳＢＶ后的超微病变过程。结果表明：感染ＷＳＢＶ后病虾 的不同组织均存在广泛的变性、坏死,上皮细胞大量解体、脱落;部分细胞核肿大、游离;结缔组织糜烂,呈现空泡化;未发现包涵体。航向电镜照片显     

中国对虾（Penaeuschinensis）杆状病毒的装配和包涵体形成过程研究

对中国对虾肝胰腺上皮细胞的透射电镜观察，发现杆状病毒可在对虾肝胰腺上皮细胞的细胞质内繁殖。增殖过程中在病毒发生基质表面及附近形成晶格状排列的包涵体，通过包涵体的形成、分化等过程，完成杆状病毒的装配。杆状病毒的装配过程似可分为５个时期：１．病毒发生基质形成期；２．未成熟包涵体期；３．成熟包涵体期；４．包涵体分化与病毒粒子装配期；５．侵染期     

中国对虾(Penaeus chinensis)肝胰腺上皮细胞质中杆状病毒增殖的电镜观察

对中国对虾肝胰腺上皮细胞进行透射电镜观察。指出：对虾杆状病毒可在肝胰腺上皮细胞的胞质内增殖，与以细胞核内形成包涵体为特征的增殖方式明显不同。溶酶体在增殖过程中内吞濒临解体的线粒体和病原体，利用线粒体内嵴提供的能量，有规律地组装成杆状病毒的包涵体。这一结果为探讨对虾暴发大面积死亡的病因分析提供了新的途径。     

中国对虾(Penaeus chinensis)病害爆发流行期间杆状病毒亚微形态的电镜观察

对１９９４～１９９５年中国对虾病害爆发期间病虾肝胰脏、鳃、胃及肠组织进 行了透射电镜观察。结果表明，多亚群杆状病毒感染是病害发生的主要原因。杆状 病毒以无包涵体１００～１３０ｎｍ×５００～５２０ｎｍ、１１０～１３０ｎｍ×３００～３３０ｎｍ及有包涵 体的 １００～１３０×３００～３３０ｎｍ ３种形态存在。     

中国对虾(Penaeus chinensis)病害爆发流行期间杆状病毒亚微形态的电镜观察

对１９９４￣１９９５年中国对虾病害爆发期间病虾肝胰脏、鳃、胃、及肠组织进行了透射电镜观察。结果表明，多亚群杆状病毒感染是病害发生的主要原因。杆状病毒以无包涵体１００￣１３０ｎｍ×５００￣５２０ｎｍ、１１０￣１３０ｎｍ×３００￣３３０ｎｍ及有包涵体的１００￣１３０×３００￣３３０ｎｍ３种形态存在。     

中国对虾鳃的超微结构研究

本文报道中国对虾Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ鳃的超微结构，结果表明，虾鳃具有三级结构，鳃瓣小叶是鳃的基本呼吸单位，它由鳃膜、呼吸上皮细胞及微血腔组成。文中分别描述了它们的超微结构特征，可供对虾组织细胞病理学诊断作对照参考。     

中国对虾育苗期球形病毒的感染及垂直传播途径的初步探讨

１９９４－１９９５年山东文登市高岛盐厂对虾育苗池和养虾池,随机和定点采集中国对虾的卵,无节幼体,蚤状幼体,糠虾幼体,仔虾及幼虾,成虾样品,利用透射电子显微镜对其进行病毒的检测。结果表明,卵细胞中含有大量的卵黄,没有明显的细胞分化,卵细胞质中有球形病毒感染;无节幼体的肝胰腺和上皮细胞的分化程度较低,有大量球形病毒分布;糠虾幼体已有明显的肝胰腺和上皮细胞的分化,肝胰腺上皮细胞的胞质中发现有球形病毒包涵     

中国对虾血淋巴抗菌活力的测定

采用溶藻胶弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ）、副溶血弧菌（Ｖ． ｐａｒａｈａｅｍ ｏｌｙｔｉｃｕｓ）、哈维氏弧菌（Ｖ．ｈａｒｖｅｙｉ）、嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍ ｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）对中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）血浆样品、血细胞溶解物（ＨＬＳ）样品的抗菌活力进行了测定。表明中国对虾血浆样品对四种细菌均表现出一定的抗菌活力。其中,三种弧菌活细胞数在孵育１ｈ 时呈现最低;嗜水气单胞菌活细胞数在孵育４ｈ 时最少。在三种弧菌中,血浆样品对哈维氏弧菌表现出的抗菌活力最强,而对副溶血弧菌表现出的抗菌活力最弱。血细胞溶解物样品对三种弧菌几乎没有表现出抗菌活力;嗜水气单胞菌在与血细胞溶解物样品孵育２ｈ 时,其活细胞数呈现最低,说明血细胞溶解物样品对该菌表现出了一定的抗菌活力。由此显示,抗菌活力在中国对虾血浆样品中表现得较强,而在血细胞溶解物样品中表现得较弱,血淋巴抗菌因子可以在短时间内对细菌表现出其最强的活力,但对不同种细菌其抗菌作用强弱不同。     

中国对虾组织细胞中的过氧化物酶体

运用电镜细胞化学技术，研究中国对虾(Penaeus chinensis)组织细胞中的过氧化物酶体，透射电镜下观察中国对虾的淋巴器、肝胰腺、触角腺和中肠4种组织。观察显示：过氧化物酶体主要存在于肝胰腺细胞和触角腺的迷路上皮细胞中。在肝胰腺的R-细胞中过氧化物酶体的形成与粗面内质网、脂滴和胞质溶胶有密切关系。肝胰腺中的R-细胞和触角腺的迷路上皮细胞富含过氧化物酶体，提示这两个组织在对虾降解外来有毒物质的过程中发挥着重要的作用。     

疑患EMS/AHPNS对虾中检出黄头病毒的一种新株型

对2012—2013年从河北、福建和广东3个对虾养殖场采集的12份发生疑似早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死综合征(EMS/AHPNS)的样品,采用组织病理学方法、套式RT-PCR检测方法以及快速灵敏检测试剂盒进行了检测。三地来源的养殖对虾样品症状均表现为肝胰腺颜色变淡,部分出现萎缩,空肠空胃,腹节肌肉略微白浊;组织病理切片结果表明,患病对虾肝胰腺血细胞浸润,肝胰腺盲管上皮细胞脱落,继发性细菌感染,淋巴器官和血淋巴细胞内存在核固缩、破裂和细胞质包涵体。按世界动物卫生组织(OIE)手册的套式RT-PCR方法检测,结果显示,黄头病毒(Yellow head virus,YHV)目的产物的阳性样品检出率为66.7%,该方法对这些样品的灵敏度可能很低。目的产物测序后经NCBI Blast,与已报道的YHV相似性为76.5%—89%;系统发育树显示这3个来源的样品位于同一个分支,与已知的YHV/鳃联病毒(gill-associated virus,GAV)株均不相同,其亲缘关系与YHV较近,而与GAV较远。用新研发的YHV快速高灵敏检测试剂盒检测,结果表明,所有样品均为YHV强阳性。以上表明患AHPNS的养殖对虾中存在一种YHV的新株型的感染,这也是我国首次检测到YHV的感染。     

白斑综合症杆状病毒致病性特征

对白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）致病性特征的研究结果表明：ＷＳＢＶ的致病性与斑节对虾Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ个体大小无关,ＷＳＢＶ的致病力与感染方式和病毒数量有关;在盐度为１４、温度为２８－３２℃的海水中,游离ＷＳＢＶ在４ｈ内失去感染活性;体长７ｃｍ的白斑综合症死亡斑节对虾,其携带的ＷＳＢＶ在５７ｈ失去感染活性;体长７ｃｍ死亡斑节对虾经２８℃空气干燥,其携带的ＷＳＢＶ在５０ｈ失去感染活性;ＷＳＢＶ不能通过体表感染健康斑节对虾,而斑节对虾摄食一定数量病毒才能导致感染;水不能作为游离ＷＳＢＶ的载体传播ＷＳＢＶ。     

中国对虾肝胰脏细小病毒病的直接荧光抗体法诊断研究

中国对虾肝胰脏细小病毒是一种广泛流行于中国对虾中的危害性较大的疾病。由于该病没有特异的肉眼症状,因此早期、快速诊断方法的研究就十分重要。作者曾完成了ＳＰＡ协同凝集试验法和免疫金银色法的诊断研究。     

对虾一种无包涵体杆状病毒病原的PCR检测

为建立对虾无包涵体杆状病毒的快速诊断技术,应用PCR技术分别对暴发性流行病发生前、流行中和发病后的对虾样品进行了检测.根据已克隆的对虾杆状病毒部分基因组序列而设计的引物能特异性地扩增出靶DNA片段,最低可以检测1pg的病素DNA.由典型发病症状对虾的胃、腮、肝胰腺、中肠、游泳足、肌内和心脏等器官和组织中成功地检测到病毒.不同组织和器官经扩增得到的信号强弱不同:病虾的胃扩增得到的信号最强,中肠、肌肉、心脏和游泳足次之,腮和肝胰腺信号最弱,说明病毒在不同组织和器官中数量及感染程度不同.在对虾发病前及发病后,用二次PCR还能检测表面不发病呈隐性感染状态的对虾携带的病毒;而对野生健康虾的检测结果为阴性.研究表明,PCR是检测对虾暴发性流行病快速、灵敏而准确的方法,对病毒病的早期诊断、防治和高健康对虾品种的选育具有指导意义.     

核酸探针原位杂交检测白斑综合症病毒的组织特异性

从白斑综合症病毒（ｗｈｉｔｅ ｓｐｏｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｖｉｒｕｓ,简称ＷＳＳＶ）部发基因组库中得到核酸探针,采用原位杂交检测方法检测对虾甲壳下表皮、胃、后肠、鳃、触角腺的上皮细胞、淋巴器官的基质细胞、肌细胞、心肌细胞及结缔组织细胞,原位杂交结果均为阳性。对虾甲壳下表皮的上皮细胞、胃的上皮细胞对病毒较其它部位敏感,感染程度高;中肠上皮细胞、肝胰腺上皮细胞、淋巴器官内皮细胞未发现感染病毒,原位杂     

“虾康一号”防治虾病的应用研究

随着我国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）养殖生产的发展，虾病日趋严重。１９９３年，由于虾病发病早、范围广、死亡率高，给我国对虾养殖生产带来严重损失。因地理水质环境及致病因子不同，虾病及症状十分复杂。但发病范围广死亡率最高的是“头胸甲白斑，肝胰腺肿大综合症”。其特点是在头胸甲壳上出现白斑，有的体色微红，内部解剖发现肝胰腺肿大，有的红肿有的白浊。病理检查，从肝胰腺分离出大量弧菌，同时在血淋巴、心肌间质、整个中肠管壁和鳃上也发现大量细菌。有的从肝胰腺、胃壁和中肠细胞中发现病毒或病毒包涵体。这种…     

铜在中国对虾体内的积累和致毒效应

本文研究了Cu在中国对虾(Panaeus orientalis)体内的累积规律和致毒效应,探讨了积累机理。实验表明,对虾的胃、肠、鳃和肝胰脏都能从海水中较快地积累Cu。肝胰脏的积累速度最快,是Cu在对虾体内贮存的主要场所。进一步分析表明,累积在肝胰脏中的Cu有部分与类金属硫蛋白相结合,但大部分是与细胞液中的小分子物质结合在一起。从肝胰脏中分离出了一种小分子Cu络合物,随着Cu的积累,这种小分子络合物含量增加,同时肝胰脏中细胞色素氧化酶的活性也发生变化,而且这种变化与对虾的中毒反应有相关性。